生化檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本知識(shí)

生化檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本知識(shí)內(nèi)容簡介一、生化檢驗(yàn)標(biāo)本二、生化試劑盒三、檢驗(yàn)項(xiàng)目四、生化儀器五、室內(nèi)質(zhì)量控制六、實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（LIS）七、常用生化分析技術(shù)一、生化檢驗(yàn)標(biāo)本生化檢驗(yàn)最常用的標(biāo)本為血液標(biāo)本，其他有尿液、腦脊液和胸腹水等不恰當(dāng)?shù)臉?biāo)本收集與保存，不注意影響標(biāo)本成分變化的各種因素，往往是導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可靠的主要原因（一）標(biāo)本采集1.血標(biāo)本采集方法采血部位：靜脈、動(dòng)脈、毛細(xì)血管2.血標(biāo)本類型與選擇血標(biāo)本可分為全血、血漿與血清血清與血漿有何區(qū)別？血清與血漿有何區(qū)別？1.血漿是抗凝血釋出，而血清是非抗凝血釋出2.血漿中含有纖維蛋白原，而血清中不含有纖維蛋白原3.血清與血漿中：ALT、AST、GLU、CK、TBIL、BUN、Ca2+等無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Alb、TG、ALP、UA、鈉磷等有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義無臨床意義（二）影響血標(biāo)本成分變化因素1.生理因素：年齡、性別、體型、情緒、運(yùn)動(dòng)2.飲食因素：3.藥物因素：4.溶血因素：5.儲(chǔ)存因素：Cho/UA/ALP性激素TG皮質(zhì)醇、催乳素、生長素、GLU下降：Alb、鐵、鉀、總膽增高：ALT/AST/ACP/ALP/TP/BUN/CR/UA/GLU/AMY受飲食影響的項(xiàng)目項(xiàng)目：GLU、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳酸、BUN、UA、轉(zhuǎn)氨酶等原則：空腹6-12h后采血受藥物影響的項(xiàng)目藥物影響檢驗(yàn)結(jié)果途徑：1.藥物本身對檢驗(yàn)方法的影響2.藥物代謝產(chǎn)物對檢驗(yàn)方法的影響3.藥物對代謝器官功能的影響原則：檢驗(yàn)受某種藥物影響的項(xiàng)目之前3天，停止該藥物的使用受溶血因素影響的項(xiàng)目當(dāng)待測物在紅細(xì)胞內(nèi)的濃度高于血清時(shí)，溶血可使該待測物結(jié)果偏高，如LDH，AST，ALT，ACP，K+等紅細(xì)胞溶解所釋放出來的大量血紅素，可干擾某些項(xiàng)目的檢測，如CHO的酶法測定，BIL的重氮反應(yīng)，光譜分析等防止溶血的幾個(gè)環(huán)節(jié)：一是采血過程;一是血清分離過程防止溶血的辦法：？1.采血器要潔凈;2.扎脈時(shí)間要短;3.抽血后，排血?jiǎng)幼饕p、慢;4.血清分離動(dòng)作輕受儲(chǔ)存條件影響的項(xiàng)目原則：采血后，2h內(nèi)盡快將血清與細(xì)胞分離，并檢測完畢。為什么受放置時(shí)間影響最大的項(xiàng)目有：增高：TP、ALB、CHO、K+、Na+、AST、ALP、GGT降低：GLU、TBIL、CL-、ALT因?yàn)榧?xì)胞仍然活著，仍進(jìn)行代謝活動(dòng)，消耗能量，并產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，影響血清成分變化3h:GLU、CO28h：GLU、CO2、TP、K+、AST24h:GLU、CO2、TP、K+、AST、ALB、TBIL、CHO、Na+、CL-、ALT、ALP、GGT二、生化試劑盒商品化試劑盒的廣泛應(yīng)用，對檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響，它不僅使檢驗(yàn)操作更簡便，而且使試劑生產(chǎn)和檢驗(yàn)操作更易標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化，尤其是有利于提高檢驗(yàn)質(zhì)量二、生化試劑盒化學(xué)法酶法方法學(xué)免疫法物理性狀液體型試劑（自配）凍干型試劑片劑或凍干粉劑液體型試劑（商品）組合方式多劑型試劑單劑型試劑雙劑（多劑）試劑操作方式手工多步驟操作離心式自動(dòng)分析儀分列式多功能分析儀二、生化試劑盒（一）液體型試劑與粉劑型試劑優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)液體1.組分均一、瓶間差異小、重復(fù)性好;2.無外源水質(zhì)影響，試劑性能穩(wěn)定，準(zhǔn)確性好保存時(shí)間短，不便運(yùn)輸粉劑保存時(shí)間較長，便于運(yùn)輸1.重復(fù)性差2.準(zhǔn)確性差二、生化試劑盒（二）單試劑與雙試劑優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)單操作簡單、快速1.抗干擾能力差2.分析誤差較大雙1.簡便、快速;2.抗干擾能力強(qiáng)，穩(wěn)定性好;3.分析誤差小，準(zhǔn)確性高試劑Ⅰ：消耗或清除干擾物試劑Ⅱ：與待測物起反應(yīng)比如：TG測定，試劑1（含甘油激酶、3-磷酸甘油氧化酶、辣根過氧化物酶、壞血酸氧化酶，但不含脂蛋白脂肪酶），消耗游離甘油。試劑2（含脂蛋白脂肪酶）起動(dòng)TG反應(yīng)。比如酶法測定GLU、CHO、UA、HDL等，試劑1含維生素C氧化本科酶，清除維C對Trinder反應(yīng)的干擾二、生化試劑盒（三）試劑盒質(zhì)量評價(jià)1.線性范圍2.酶促反應(yīng)時(shí)間曲線或化學(xué)反應(yīng)速度時(shí)間曲線（1）終點(diǎn)法：空白值、反應(yīng)時(shí)間（2）連續(xù)監(jiān)測法：空白、斜率、反應(yīng)曲線3.穩(wěn)定性試驗(yàn)三、生化檢驗(yàn)項(xiàng)目(一)常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目1.單檢驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)用性：經(jīng)濟(jì)、快速可靠性：針對性強(qiáng)2.組合檢驗(yàn)項(xiàng)目全面性：提供全面的檢驗(yàn)信息高效性：提高檢驗(yàn)和診斷效率三、生化檢驗(yàn)項(xiàng)目（二）急診生化檢驗(yàn)項(xiàng)目急診項(xiàng)目：指對臨床危急、重癥病人的診斷、搶救和治療有重要指導(dǎo)意義的檢驗(yàn)項(xiàng)目。一般要求從“標(biāo)本采取”到“檢驗(yàn)報(bào)告”發(fā)出控制在2h內(nèi)。如血?dú)夥治?、腎功、電解質(zhì)、心功等常規(guī)項(xiàng)目急診項(xiàng)目危急值檢驗(yàn)項(xiàng)目三、生化檢驗(yàn)項(xiàng)目（三）特殊項(xiàng)目指標(biāo)本采集技術(shù)高，或標(biāo)本數(shù)量少，或含有傳染性病毒或細(xì)菌的標(biāo)本，這些標(biāo)本中的項(xiàng)目不管是急診還是常規(guī)項(xiàng)目均屬于特殊項(xiàng)目四、生化儀器(一)離心機(jī)(二)電解質(zhì)分析儀(三)血?dú)夥治鰞x(四)生化分析儀（一）離心機(jī)離心機(jī)：利用離心力分離液體與固體顆?；蛞后w與液體的混合物中各組分的機(jī)械（一）離心機(jī)利用離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強(qiáng)大離心力，加快液體中顆粒的沉降速度，把樣品不同沉降系數(shù)和浮力物質(zhì)的密度分離開來。微粒移動(dòng)速度與其大小、形態(tài)和密度有關(guān)，又與重力場的強(qiáng)度及液體的粘度有關(guān)1.按分離因素：常速、高速和超速2.按操作方式：間隙式、連續(xù)式（一）離心機(jī)注意事項(xiàng)1.離心前要平衡2.離心機(jī)套管底部要墊棉花或試管墊3.離心管必須對稱放入套管中，防止機(jī)身振動(dòng)4.電動(dòng)離心機(jī)如有噪音或機(jī)身振動(dòng)時(shí)，應(yīng)立即切斷電源，即時(shí)排除故障5.啟動(dòng)離心機(jī)時(shí)，應(yīng)蓋上離心機(jī)頂蓋后6.分離結(jié)束后，先關(guān)閉離心機(jī)，在離心機(jī)停止轉(zhuǎn)動(dòng)后，方可打開離心機(jī)蓋，取出樣品(二)電解質(zhì)分析儀溶液中被測離子接觸電極時(shí)，在離子選擇電極基質(zhì)的含水層內(nèi)發(fā)生離子遷移，遷移離子的電荷改變存在電勢，使膜面間的電位發(fā)生變化，在測量電極與參比電極間產(chǎn)生一個(gè)電位差，測量電位差大小可求得待測離子濃度(三)血?dú)夥治鰞x血?dú)夥治鰞x不僅能在幾分鐘內(nèi)檢測出病人血液中的氧氣、二氧化碳等氣體的含量和血液酸堿度及相關(guān)指標(biāo)的變化，還能快速反映血液中鉀、鈉、鈣的含量，為危重病人搶救中快速、準(zhǔn)確的檢測提供了有利的保障。(四)生化分析儀日立7060v:400T/h日立7600v:3200T/h五、室內(nèi)質(zhì)量控制1.標(biāo)本質(zhì)量控制2.試劑質(zhì)量控制3.儀器質(zhì)量控制4.操作過程質(zhì)量控制（標(biāo)準(zhǔn)化與規(guī)范化）5.質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的建立6.失控原因分析與處理六、實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)LIS:laboratoryinformationsystem,實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)，是通過計(jì)算機(jī)對實(shí)驗(yàn)室日常工作、科研管理、學(xué)科建設(shè)等多個(gè)方面所需信息，進(jìn)行收集、處理、存儲(chǔ)和應(yīng)用的系統(tǒng)HIS：hospitalinformationsystem,醫(yī)院信息系統(tǒng)六、實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)七、常用生化分析技術(shù)（一）光譜分析技術(shù)（二）電泳技術(shù)（三）離心技術(shù)（四）層析技術(shù)（五）電化學(xué)分析技術(shù)（六）生物芯片技術(shù)（一）光譜分析技術(shù)定義：利用各種化學(xué)物質(zhì)所具有的發(fā)射、吸收或散射光譜譜系的特征，來確定其性質(zhì)、結(jié)構(gòu)或含量的技術(shù)，稱之為光譜分析技術(shù)。根據(jù)光譜譜系特征，可分為發(fā)射光譜分析、吸收光譜分析和散射光譜分析三大類（一）光譜分析技術(shù)類型優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)種類吸收光譜分析1.靈敏度高，達(dá)10-5mol/L;2.操作簡單、快速，選擇性好和應(yīng)用廣泛;1.比色法需有標(biāo)準(zhǔn)品;2.紫外法的吸收池需用石英杯;3.原子吸收法需特定元素的空心陰極燈1.可見光及紫外光分光度法2.原子吸收分光光度法發(fā)射光譜分析1.熒光分析法靈敏度高，取樣量少，檢測范圍廣，臨床應(yīng)用廣泛;1.火焰光度法操作繁雜、干擾因素多，被離子選擇性電極法取代;1.火焰光度法2.熒光分析法散射光譜分析操作簡單、快速，主要用于免疫球蛋白、載脂蛋白和補(bǔ)體等項(xiàng)目檢測1.易受混懸液中微粒的分散度影響;2.混懸液的穩(wěn)定性較差常用法為免疫比濁法（一）光譜分析技術(shù)影響光譜分析的主要因素：1.化學(xué)因素：濃度、pH、時(shí)間、雜質(zhì)2.主觀因素：操作不當(dāng)有關(guān)3.光學(xué)因素：儀器性能有關(guān)（二）電泳技術(shù)定義：在電場中，帶電粒子向所帶電荷相反的電板移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳。根據(jù)電泳原理可分為移動(dòng)界面電泳、區(qū)帶電泳和穩(wěn)態(tài)電泳等（二）電泳技術(shù)類型優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)種類移動(dòng)界面電泳已被區(qū)帶電泳取代復(fù)雜、干擾因素多已淘汰區(qū)帶電泳凝膠電泳使用更廣泛：1.分辨率高2.無拖尾現(xiàn)象3.電泳后無需透明1.濾紙電泳2.凝膠電泳3.毛細(xì)管區(qū)帶電泳穩(wěn)態(tài)電泳復(fù)雜1.等電聚焦2.等速電泳（二）電泳技術(shù)影響電泳的因素：顆粒性質(zhì)、電場強(qiáng)度、溶液性質(zhì)、pH、離子強(qiáng)度、溶液粘度等影響電泳的三大要素：電場、帶電粒子和促使粒子移動(dòng)的介質(zhì)（三）離心技術(shù)定義：根據(jù)顆粒的密度不同，在受到同一離心力的作用下可分成不同界面的技術(shù)根據(jù)原理可分為平衡離心法、等密度離心法和沉降平衡離心法根據(jù)速度可分為低、高、超速離心機(jī)（三）離心技術(shù)類型特點(diǎn)與應(yīng)用種類低速離心機(jī)初級分離和大量生物標(biāo)本制備1.錐型臺(tái)式2.水平型桶式3.大容量立式高速離心機(jī)適用于各種生物細(xì)胞、病毒、血漿蛋白等分離，是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究的重要工具超速離心機(jī)1.用于細(xì)胞器、病毒的分離2.用于生物大分子的分子量、沉降系數(shù)、純度等檢測1.制備型2.分離型（四）層析技術(shù)定義：利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)，由固定相和流動(dòng)相組成原理：當(dāng)待分離的混合物隨流動(dòng)相通過固定相時(shí)，由于各組分與固定相的吸附、溶解、結(jié)合等能力不同，在兩相中的分配也不同。與固定相相互作用弱的組分，受阻力小，移動(dòng)速度快，先分離出來，反之，后分離出來（四）層析技術(shù)按兩相所處狀態(tài)分為液-液、液-固、氣-液和氣-固層析法按層析原理分為吸附、分配、離子交換、凝膠和親和層析法按操作模式分為柱層析、薄層層析、紙層析和薄膜層析法（四）層析技術(shù)類型特點(diǎn)與應(yīng)用凝膠層析法凝膠屬惰性載體，不帶電荷，吸附力弱，較溫和，且不需有機(jī)溶劑。主要用于脫鹽、分離純化、測定大分子物質(zhì)分子量等離子交換層析法固定相具有離子交換性能。主要用于分離氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核酸、同工酶等高效液相層析法分離能力強(qiáng)、測定靈敏度高、可室溫下進(jìn)行。主要用于分離蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸等親和層析法操作簡單、快速、分離效率高，但必須針對某一分離對象，制備專一配基和尋求層析的穩(wěn)定條件，應(yīng)用范圍受到限制。主要用于免疫物質(zhì)、核酸、受體等的分離（五）電化學(xué)分析技術(shù)定義：利用物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)，測定化學(xué)電池的電位、電流或電量的變化進(jìn)行分析的方法。主要有電位法、電導(dǎo)法和電容量分析法等離子選擇性電極分析法是電位分析法中發(fā)展最快的一支，主要用于電解質(zhì)和血?dú)夥治觯┥镄酒夹g(shù)定