高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量分析平

高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量分析平

【摘要】目的：通過高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量。方法：使用醋酸鈉溶液(PH4.0)-甲醇(1:1)流動相，并在C18上進(jìn)行分析。結(jié)果：檢測波長為235納米，外標(biāo)法;回收率99.92%，在0.4~1.4毫克每毫升范圍內(nèi)良好，r=0.999。結(jié)論：通過高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量與硝酸汞電位滴定測定結(jié)果沒有太大差異，但其具方法簡單、測定快速、并結(jié)果準(zhǔn)確的特點?！綤eys】高效液相色譜法；青霉素；鈉含量青霉素是一種良好的抗菌藥物，在醫(yī)學(xué)界也被廣泛的使用，其主要對革蘭氏陽性菌如鏈球菌、葡萄球菌、肺炎球菌等具有良好抵抗作用，所以由以上病菌所引發(fā)的患者全身感染或局部受到重度感染時，會應(yīng)用到青霉素制藥進(jìn)行治療。青霉素中納含量的測定方法有很多，而根據(jù)我國的《中國藥典》進(jìn)行測定青霉素中鈉含量的方法為硝酸汞電位滴定法，這種方法要求較為嚴(yán)格，但受到的影響因素也較多，例如，時間因素、溫度因素等，在一定程度上也會對環(huán)境造成污染。此外，時間因素影響較大，一般需要耗費(fèi)較長時間才能測定完成，因此并不適合工業(yè)進(jìn)行生產(chǎn)。本文通過高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量，并對5批青霉素進(jìn)行分別測定，結(jié)果證明通過高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量不僅結(jié)果較為標(biāo)準(zhǔn)，而操作方法也較為簡捷。1.高效液相色譜法基本原理高效液相色譜(HPLC)法是以高壓下的液體為流動相，并采用顆粒極細(xì)的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)。高效液相色譜對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中，可用氣相色譜分析的約占20%，而80%則需用高效液相色譜來分析。高效液相色譜和氣相色譜在基本理論方面沒有顯著不同，它們之間的重大差別在于作為流動相的液體與氣體之間的性質(zhì)的差別。1.1高效液相色譜分析原理:1.1.1高效液相色譜分析的流程:由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，徑流量與壓力測量之后，導(dǎo)入進(jìn)樣器。被測物由進(jìn)樣器注入，并隨流動相通過色譜柱，在柱上進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測器，檢測信號由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復(fù)雜的混合物分離(極性范圍比較寬)還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而HPLC改變的是流動相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。1.1.2高效液相色譜的分離過程:同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使得不同溶質(zhì)得以分離。2.高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量2.1測定試驗需要的儀器及試劑必要的硬件設(shè)備：某公司生產(chǎn)的高效液相色譜儀、MOD-ELSD-200型號輸液泵、UV-C型號檢測器，SP4400積分儀器、手動進(jìn)樣器、BP-40半自動青霉素電位滴定分析儀。液體及樣品：無水甲醇、醋酸鈉、冰醋酸、硝酸汞均為滴定分析純，青霉素鉀（青霉素鉀是由中國藥品生物制品檢定中心提供，其純度為99.9%），青霉素鈉。2.2方法與結(jié)果2.2.1色譜條件根據(jù)色譜柱的標(biāo)注采用C18（5um，5mm*250mm）型號的流動相醋酸鈉溶液（其ph值為4.0，液體中醋酸含量為6.8g，并進(jìn)行添加100毫升的冰醋酸，再用清水稀釋到1000毫升）-甲醇（1:1），在使用該液體前應(yīng)進(jìn)行過濾、脫氣處理；另外要求其檢測波的長度為235納米，其流速為1毫升每分鐘，同時進(jìn)樣量為20ul。2.2.2回歸方程的確立首先進(jìn)行精密稱取青霉素鉀對照品5份，其次用醋酸鈉緩沖液制度量度分別為0.4毫克每毫升、0.8毫克每毫升、1.0毫克每毫升、1.2毫克每毫升、1.4毫克每毫升的溶液，并對進(jìn)樣量進(jìn)行分別采取，一般為20ul。通過對進(jìn)樣量的測定，記錄其色譜圖。結(jié)果顯示：當(dāng)青霉素波度在0.4毫克每毫升到1.4毫克每毫升時，峰面積與濃度形成良好的線性關(guān)系。最終確立其回歸方程式為A=2.3230*105+5.5704*106C，r=0.99.2.3樣品含量測定2.3.1高效液相色譜法取青霉素鈉樣品(約100mg),精密稱定,置100m1容量瓶中,用醋酸鈉緩沖溶液(pH6.0)溶解并稀釋至刻度，搖勻,用微孔濾膜(0.2μm)濾過,精密吸取20μl,注入液相色譜儀，記錄峰面積。取青霉素鉀對照品同法測定，以外標(biāo)法計算,即得。2.3.2硝酸汞電位滴定法精密稱取青霉素鈉適量,照硝酸汞電位滴定法"進(jìn)行測定。2.4結(jié)果比較取5批樣品，分別用高效液相色譜法、硝酸汞電位滴定法進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。2.5回收率的測定精密稱定已知含量的青霉素鈉適量(約50mg),分別添加不同濃度水平的青霉素鈉對照品,用高效液相色譜法進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。平均回收率為99.92%,RSD=0.77%n=5。3.討論首先，通過高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量與其它青霉素鈉的含量測量方法對比，其具有操作簡單、測定速度快、受到外界干擾小、并結(jié)果準(zhǔn)確的特點，所以適合應(yīng)用到工業(yè)生產(chǎn)當(dāng)中。其次，通過高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量的方法，在使用流動相醋酸鈉溶液(PH4.0)-甲醇(1:1)的過程中應(yīng)注意酸醋鈉的結(jié)晶現(xiàn)象，結(jié)晶的產(chǎn)生往往容易形成進(jìn)樣器的堵塞，并影響測定的進(jìn)度。所以在測定過程中應(yīng)及時對進(jìn)樣器進(jìn)行清洗，清洗的過程一般以沖洗為主。第三，在測定過程中流動相甲醇的用量對青梅素中納含量的保留時間具有較大的影響，所以在高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量的方法中應(yīng)注意甲醇的含量，適當(dāng)?shù)臏p少甲醇含量可以延長青霉素中鈉的保存時間。第四，長時間的放置的青霉素鈉溶液會有降解物產(chǎn)生的可能，如果將帶有降解物額溶液進(jìn)行測定會對測定結(jié)果造成一定的影響，所以在測定過程中應(yīng)盡量避免該現(xiàn)象的產(chǎn)生，并應(yīng)盡量在6小時之內(nèi)完成高效液相色譜法測定青霉素鈉的含量的測定過程。Reference陳國良,李美玉,陳仙明,etal.正相高效液相色譜法測定4-AA對映異構(gòu)體含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2014,10(3):31-32.黃柳霞,葉日金,黃永連,etal.超高效液相色譜法食品中展青霉素的方法研究[J].食品與發(fā)酵科技,2018,v.54；No.204(02):120-123.張博,楊黎彬,李金娟,