痰液涂片抗酸染色的結果分析研究 生物技術專業(yè)

痰液涂片抗酸染色的結果分析[摘要]目的：通過分析結核病患者的痰液涂片鏡檢結果，了解瀏陽市及其周邊各鄉(xiāng)鎮(zhèn)結核病發(fā)生情況，改進技術，以提高鏡檢準確率。方法：1000份樣本均來自2017年1月1日至2017年3月31日到瀏陽市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科、綜合科、兒科、感染科等科室就診并疑似感染的患者，所有患者取痰液標本，實施抗酸染色，采用顯微鏡進行檢測，統(tǒng)計檢測結果。結果：在1000份痰液標本當中，檢測結果為陽性的有340份，檢測陽性率為34.0%；不同時間段和不同性狀痰液的標本的陽性檢出率存在很大的差異，清晨痰樣本是檢出率最高的標本，陽性檢出率為41.25%，即時痰樣本檢出率最低，為17.5%，不同時間段痰液標本陽性檢出率相比差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在不同性狀的痰液標本當中，干酪樣痰標本陽性檢出率最高，達到了57.14%，唾液水樣痰標本檢出率最低，為2.50%，不同性狀痰液標本陽性檢出率相比存在明顯的差異，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論：對于結核病患者來說，在進行抗結核治療之前就需要采集患者的痰標本進行涂片檢查，這樣可以提高陽性檢出率，以便及時發(fā)現(xiàn)傳染源，做好隔離工作。另外，為了提高檢測結果的準確性，需要做好痰液標本的質量控制工作。對于不同時間段取樣的痰液標本，質量合格的為清晨痰和夜間痰，檢出率比較低的為即時痰，不符合樣本的質量要求。為充分保證痰液樣本檢測的質量，可以選擇血性樣痰和干酪樣痰，更有利于做好對結核病的預防和控制工作。關鍵詞：肺結核??；痰液樣本；涂片；抗酸染色；發(fā)現(xiàn)率[Abstract]Objective:Toanalyzetheresultsofsputumsmearintuberculosispatients,tounderstandtheoccurrenceoftuberculosisinLiuyanganditssurroundingvillages,andtoimprovethetechniquetoimprovetheaccuracyofmicroscopicexamination.Methods:1000sampleswerefromJanuary1,2017toMarch31,2017toLiuyangCityPeople'sHospitalDepartmentofRespiratoryMedicine,GeneralPediatrics,Pediatrics,InfectiousDiseasesandotherdepartmentsandsuspectedinfectedpatients,allpatientstakingsputumspecimens,Theimplementationofacid-resistantstaining,usingamicroscopetodetect,statisticaltestresults.Results:Amongthe1000samplesofsputum,340positivesamplesweredetectedandthepositiveratewas34.0%.Thepositiverateofsputumsamplesindifferenttimeperiodsanddifferenttraitswasverydifferent.(P<0.05).Thepositiverateofsputumsampleswas41.25%,andthedetectionrateofsputumsampleswasthelowest(17.5%).Thepositiverateofsputumsampleswasstatisticallysignificant(P<0.05)Inthesputumsampleswithdifferenttraits,thepositiverateofpositivesampleswas57.14%,thelowestwas2.50%,andthepositivedetectionrateofsputumspecimensofdifferenttraitswasSignificantdifferenceswerestatisticallysignificant(P<0.05).Conclusion:Forpatientswithtuberculosis,intheanti-TBtreatmentbeforetheneedtocollectthepatient'ssputumspecimensforsmear,whichcanimprovethepositivedetectionrate,inordertodetectthesourceofinfection,doisolationwork.Inaddition,inordertoimprovetheaccuracyofthetestresults,needtodoagoodjobofqualitycontrolofsputumspecimens.Fordifferenttimesamplesofsputumsamples,thequalityofqualifiedforthemorningsputumandnightsputum,thedetectionrateisrelativelylowfortheimmediatesputum,doesnotmeetthequalityrequirementsofthesample.Tofullyguaranteethequalityofsputumsampletesting,youcanchoosebloodysputumandcheesesputum,moreconducivetothepreventionandcontroloftuberculosiswork.Keywords:tuberculosis;sputumsample;smear;acidpickling;discoveryrate分枝桿菌的細胞壁內(nèi)含有大量的脂質，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色[1-3]。而結核分枝桿菌，是引起結核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但以肺結核為最多見。結核病至今仍為重要的傳染病，估計世界人口中1/3感染結核分枝桿菌。據(jù)WHO報道，每年約有800萬新病例發(fā)生，至少有300萬人死于該病。再加上此病具有病情遷延難愈的特點，成為世界性的公共衛(wèi)生問題，對世界衛(wèi)生組織提出嚴峻的調整[4-6]。肺結核病是一種由結核桿菌引起的呼吸道傳染病，是一種嚴重危害人們健康的常見病和多發(fā)病，作為肺結核病的重要診斷手段，痰涂片抗酸染色一直受到臨床的重視。近年來由于環(huán)境的污染和有些地區(qū)因艾滋病、吸毒、免疫抑制劑的應用、酗酒和貧困等原因，發(fā)病率又有上升趨勢。抗酸染色涂片檢測抗酸桿菌是控制肺結核病的主要手段,是對結核病的趁早治療，發(fā)現(xiàn)傳染得來源，以及診斷有著很大的幫助，所以對痰液涂片抗酸染色結果分析與研究，以提高鏡檢正確率，對疾病的治療有著重要的意義[7-9]。1資料與方法1.1一般資料樣本均來自2017年1月1日至2017年3月31日到瀏陽市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科、綜合科、兒科、感染科等科室就診并疑似感染的患者，主要覆蓋瀏陽市及其周邊各鄉(xiāng)鎮(zhèn)，共1000份，對所有疑似感染患者取痰液標本。痰液標本按照取痰時間的不同可以分為即時痰標本（200份）、清晨痰標本（400份）以及夜間痰標本（400份）；按照痰液標本不同性狀進行劃分，包括280份干酪樣痰標本，300份血性樣痰標本，300份粘液痰標本，120份唾液水樣痰標本。1.2納入標準和排除標準1.2.1納入標準通過胸部影像學檢查疑似肺結核疾病或者胸部影像學檢查無法排除肺結核疾病，需要進一步進行檢查確定；以往有肺結核病史，并且停止治療時間超過三個月；所有患者的年齡都在18歲以上，并且HIV檢測呈現(xiàn)陰性[10]。1.2.2排除標準排除了存在惡性腫瘤史的患者；排除了患有嚴重肝臟或腎臟疾病患者以及處于妊娠期的患者；排除有既往肺結核病史并且停止治療小于三個月的患者。1.3檢查材料和方法1.3.1檢查材料儀器設備和試劑主要包括電子顯微鏡，酒精燈，抗酸染色試劑等。1.3.2檢查方法對于初診和復診患者來說，在痰液樣本采集數(shù)量方面存在一定的差異，初診患者需要采集三個時間段的痰液，制成三個標本，即清晨痰標本、夜間痰標本和即時痰標本，而復診患者只需要采集清晨痰標本和夜間痰標本這兩份標本即可。標本采集工作完成之后盡快送檢驗室檢測，首先對標本進行編號，然后進行痰涂片，再使用酒精燈對標本進行固定，接著用玻片夾夾持涂片標本，滴加石炭酸復紅2-3滴，十分鐘后用水沖洗，接著使用3%鹽酸酒精脫色20秒左右，再用水沖洗，最后用堿性美蘭溶液復染20秒左右，用水沖洗，用吸水紙吸干后使用顯微鏡進行觀察。1.4結果判定標準通過檢驗，發(fā)現(xiàn)痰液標本當中含有抗酸桿菌，則可以將檢測結果判定為陽性。1.5統(tǒng)計學分析處理應用統(tǒng)計學軟件SPSS18.0對本次研究所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析處理；計量資料用（x±s）表示，并用t檢驗；計數(shù)資料用χ2檢驗,用（n.%）表示；P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1不同時間段取樣痰液標本結核桿菌陽性檢出率對比分析在1000份痰液標本當中，檢測結果為陽性的有340份，檢測陽性率為34.0%；不同時間段和不同性狀痰液的標本的陽性檢出率存在很大的差異，清晨痰樣本是檢出率最高的標本，陽性檢出率為41.25%，即時痰樣本檢出率最低，為17.5%，不同時間段痰液標本陽性檢出率相比差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。詳細情況見表1。表1不同時間段取樣痰液標本結核桿菌陽性檢出率對比分析（n.%）時間段不同樣本數(shù)呈陽性數(shù)陽性檢出率清晨痰40016541.25%夜間痰40014035.0%即時痰2003517.5%總計100034034.0%2.2不同性狀取樣痰液標本結核桿菌陽性檢出率對比分析在不同性狀的痰液標本當中，干酪樣痰標本陽性檢出率最高，達到了57.14%，唾液水樣痰標本檢出率最低，為2.50%，不同性狀痰液標本陽性檢出率相比存在明顯的差異，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。詳細情況見表2。表2不同性狀取樣痰液標本結核桿菌陽性檢出率對比分析（n.%）取樣痰液性狀樣本數(shù)量呈陽性數(shù)陽性檢出率干酪樣痰28016057.14%血性樣痰30014046.67%粘液痰3003712.33%唾液唾液水樣痰12032.50%總計100034034.0%3討論經(jīng)過長時間的努力，肺結核疾病的預防和控制工作取得了顯著成效。但是近年來，由于環(huán)境污染情況不斷惡化以及有些地區(qū)艾滋病盛行或免疫抑制劑使用不當?shù)纫蛩兀瑢е路谓Y核疾病的發(fā)病率又有所升高[11-14]。肺結核屬于一種呼吸系統(tǒng)疾病，具有較強的傳染性，并且病情遷延難愈，治療的難度比較大，對人們的身體健康造成了嚴重不利的影響，甚至對社會的和諧穩(wěn)定發(fā)展都構成了一定的危害。因此，要對肺結核疾病做好防控工作。而要想做好肺結核疾病的防控工作，防止傳染范圍擴大，就需要及時對疑似病例進行診斷，如果診斷為陽性，就需要及時隔離治療[14-17]。引起肺結核疾病的病原菌為結核分枝桿菌，屬于分枝桿菌的一種，這種病原菌由于細胞壁內(nèi)含有大量的脂質，將肽聚糖包裹在里面，因此不容易著色，需要經(jīng)過加熱處理，并且延長染色的時間，一旦染色完成之后，使用酸性脫色劑就很難對其脫色，這也被稱為抗酸染色[18-21]。目前，臨床上對肺結核疾病主要的診斷方式就是痰液涂片抗酸染色鏡檢，此種方法檢測的準確度比較高，并且符合經(jīng)濟、操作簡便等原則，在臨床上具有廣泛的應用。國際衛(wèi)生組織對此方法檢測的效果也給予了肯定[22]。痰液涂片抗酸染色鏡檢是對肺結核疾病進行篩查的重要手段，符合世界衛(wèi)生組織和國家肺部疾病聯(lián)合會針對發(fā)展中國家制定的診斷技術指南，具有很大的優(yōu)越性，主要體現(xiàn)在以下幾個方面：（1）診斷準確。使用痰液涂片抗酸染色鏡檢方式對胸部影像檢查疑似肺結核疾病患者進行檢查，陽性檢出率比較高，檢測結果準確。（2）技術簡單，使用的儀器設備比較少，成本比較低。痰液涂片抗酸染色鏡檢方法操作比較簡單，在保證樣本質量的前提下，對檢驗人員的要求不是太高，一般具有實踐經(jīng)驗的人員就可以勝任。在檢測的過程中使用的設備主要包括顯微鏡、酒精燈等，設備比較少，因此檢測的成本比較低，符合技術指南當中的經(jīng)濟性原則。（3）檢測時間比較短。痰液涂片抗酸染色鏡檢可以快速的得到檢驗結果，從而根據(jù)檢測結果對被檢驗者的具體情況進行分析，得到準確的診斷結果，從而及時發(fā)現(xiàn)肺結核患者，并及時對已經(jīng)確診的患者進行隔離治療，防止病情傳染擴散[23-25]。通過本文的分析發(fā)現(xiàn)，在1000份痰液標本當中，檢測結果為陽性的有340份，檢測陽性率為34.0%，這就說明目前瀏陽市及其周邊各鄉(xiāng)鎮(zhèn)結核病的發(fā)病率仍然比較高，防控形勢仍然十分嚴峻，應該更加積極和廣泛的開展肺結核疾病的預防控制、健康教育工作以及篩查等工作，以便及時發(fā)現(xiàn)肺結核疾病患者，從而及時進行隔離治療，防止疾病傳播。據(jù)WHO報道，每年約有800萬新病例發(fā)生，至少有300萬人死于該病。針對這種情況，我國衛(wèi)生部門還需要不斷提高對肺結核疾病防控的重視程度，將其作為重要任務來抓，不斷降低肺結核疾病的發(fā)病率，維護國民的身體健康和生命安全[26-28]。不同時間段和不同性狀痰液的標本的陽性檢出率存在很大的差異，清晨痰樣本是檢出率最高的標本，陽性檢出率為41.25%，夜間痰標本陽性檢出率為35.0%，即時痰樣本檢出率最低，為17.5%，不同時間段痰液標本陽性檢出率相比差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。這就說明清晨痰標本和夜間痰標本檢出率相對比較高，與近年來相關文獻研究報告基本一致。要想提高肺結核疾病診斷的準確性，做好痰液標本質量控制工作至關重要，因此需要選擇清晨痰標本和夜間痰標本。清晨痰是患者經(jīng)過一夜睡眠之后咳出的痰液，里邊含有較多的抗酸桿菌，因此檢出率比較高。夜間痰往往來自下呼吸道，也含有較多的抗酸桿菌，檢測的準確率也比較高。即時痰往往來自于上呼吸道，抗酸桿菌的攜帶量比較少，并且含有唾液比較多，因此陽性檢出率比較低。這就告訴我們，對于肺結核疾病患者或者疑似肺結核疾病患者，在提取痰液樣本時，盡量選擇清晨痰和夜間痰[29]。在不同性狀的痰液標本當中，干酪樣痰標本陽性檢出率最高，達到了57.14%，唾液水樣痰標本檢出率最低，為2.50%，不同性狀痰液標本陽性檢出率相比存在明顯的差異，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。這就說明干酪樣痰樣本的質量比較好，而唾液水樣痰標本的質量比較差，原因分析如下：干酪樣痰是由被檢驗者肺部深處咳出的，里邊含有大量壞死的肺部組織，抗酸桿菌的含量也比較高，因而陽性檢出率也就比較高，相對于其它性狀的痰液標本，干酪樣痰液標本是最為理想的標本。因此，在實際的工作當中，也需要盡量選擇此種痰液樣本。有報道稱，唾液水樣痰標本為不合格標本，陽性檢出率非常低，在實際的工作中也有這種認識，由于其中含有較多的唾液，導致涂抹的痰膜比較薄，在使用顯微鏡進行檢查的過程中，觀察視野比較難以確定，使鏡檢工作的難度增加，檢測結果的準確性下降。因此，在實際的工作當中，為了保證樣本的質量，對于疑似肺結核疾病患者，提取痰液樣本的人員一定要耐心向被檢驗人員講解保證樣本質量的必要性和重要性，以便獲得被檢驗者的配合。指導被檢驗者從肺部深處咳痰的方式方法，以便獲得干酪樣痰，提高檢測結果的準確性。另外，在獲取痰液樣本時，還需要指導被檢驗者使用清水漱口，防止將被檢驗者口腔的食物殘渣帶入樣本當中[30]。綜上所述，肺結核疾病屬于一種嚴重的傳染病，死亡率比較高，對肺結核疾病的預防和控制是我國衛(wèi)生防控部門重要的工作內(nèi)容，也是世界衛(wèi)生組織重點預防和控制的傳染性疾病。為了做好肺結核疾病的預防和控制工作，需要加強對肺結核疾病的篩查，而主要的篩查手段就是痰液涂片抗酸染色鏡檢。痰液涂片抗酸染色鏡檢是一種良好的篩查方法，具有檢測效果好、成本低、操作簡單等多種優(yōu)點。對疑似肺結核患者進行痰液涂片檢測，最主要的是獲取合格的痰液標本，這是提高檢測結果的準確性的重要前提條件和保障。不同時間段取樣的痰液標本，其陽性檢出率存在較大的差異，其中檢出率最高的樣本未清晨痰液樣本，其次為夜間痰樣本，即時痰樣本的陽性檢出率最低。不同性狀的痰液樣本也會得到不同的陽性檢出率，其中干酪樣痰樣本和血性樣痰樣本的檢出率相對比較高，最高的為干酪樣痰樣本，這是質量最好的痰液樣本，因此盡量選擇干酪痰樣本，以提高檢測結果的準確性，做好對結核病的預防和控制工作。另外，為了進一步提高檢測質量，在實際的工作當中，樣本檢驗人員需要樹立質量意識，按照檢驗工作的標準和要求，以認真負責的工作態(tài)度完成檢驗工作，同時需要和被檢驗者做好溝通和交流，讓其認識到保證痰液樣本質量的重要性，從而取得被檢驗者的配合，以便獲取合格的痰液樣本，在獲取樣本之后，需要及時送往檢驗室，防止樣本受損。在工作之余，樣本檢驗人員還需要不斷加強業(yè)務學習，提高自己的檢驗技術水平?？傊瑱z驗結果是否準確，和送檢樣本的質量存在直接的關系，這需要引起相關工作人員的重視。同時，我國相關的衛(wèi)生部門還需要不斷加強宣傳教育工作，利用各種媒體向群眾介紹預防肺結核疾病的方法，提高人民群眾預防肺結核疾病的意識，引導群眾發(fā)現(xiàn)自己患有肺結核疾病時主動接受治療，只有這樣才能不斷降低我國肺結核疾病的發(fā)病率。參考文獻：[1]鄒曉艷,楊德遠,孔昌盛等.肺結核病患者痰標本性狀及采樣時間與抗酸桿菌陽性結果分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2013,10(3):339-341.[2]趙永勝,趙鳳仙.1110份痰標本直接涂片檢查抗酸桿菌結果分析[J].口岸衛(wèi)生控制,2011,16(1):33-34.[3]陳明明,李自越,李巖等.某地區(qū)抗酸桿菌陽性攜帶者痰液檢測及結果分析[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2012,33(12):1452-1453.[4]胡英華,梅玲.紅花崗區(qū)2001~2013年結核痰涂片結果分析[J].心理醫(yī)生,2015,21(19):238-239.[5]任章勇.關于痰標本涂片培養(yǎng)的結果分析[J].黔南民族醫(yī)專學報,2016,29(4):238-239.[6]謝愛蓉,呂建新.三種痰涂片前處理方法的染色及消毒效果評價[J].溫州醫(yī)學院學報,2013,43(4):269-272.[7]董仁康,鄧懋青,湯瓊健等.淺析痰液標本質量對抗酸桿菌檢出率的影響[J].基層醫(yī)學論壇,2011,15(25):844-845.[8]劉燕文,曾少芳,吳龍章等.三種不同涂片法對分枝桿菌涂片陽性率的影響[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2014,14(11):88-89.[9]梁海燕,黃藝,米利古等.不同因素與痰涂片抗酸桿菌檢出關系探討[J].石河子大學學報（自然科學版）,2013,31(1):61-64.[10]劉少娟,孟繁榮,劉志輝等.痰液中MPB64蛋白檢測在肺結核診斷中的臨床應用及其常見菌對檢測影響的研究[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導報,2012,18(15):2139-2142.[11]呂建淵,錢建康.高壓滅菌后離心沉淀法檢查痰液抗酸桿菌的應用體會[J].實用醫(yī)技雜志,2007,14(36):5077-5078.[12]林雨亭,曹福軍,吳峰等.XpertMTB/RIF檢測技術與痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌的比較[J].醫(yī)學檢驗與臨床,2016,27(4):38-39.[13]鐘麗云.金胺O熒光染色聯(lián)合抗酸染色在結核病診斷中的應用價值[J].深圳中西醫(yī)結合雜志,2016,26(7):23-24.[14]鄒自英,朱冰,湯雪晴等.結核桿菌的細菌學、分子生物學和免疫學檢測方法評價[J].四川醫(yī)學,2011,32(5):756-758.[15]郭新枝,陳裕,于永敏等.痰液BACTEC-MGIT960快速結核菌培養(yǎng)對菌陰肺結核的臨床診斷價值[J].中國藥物與臨床,2013,13(2):201-202.[16]趙朝珍,田洪瑞,唐麗,等.2010年南充市肺結核病患者痰涂片鏡檢結果分析.寄生蟲病與感染性疾病,2011(2):96-97.[17] 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