第4章第1節(jié)第3課時(shí)基因工程的基本操作程序

第3課時(shí)基因工程的基本操作程序課標(biāo)內(nèi)容要求核心素養(yǎng)對(duì)接闡明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞和目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)鑒定等步驟。.科學(xué)思維——結(jié)合實(shí)例，采用文字和圖示方式說(shuō)明基因工程的基本操作程序。.生命觀念——運(yùn)用結(jié)構(gòu)與功能觀等觀念理解PCR技術(shù)的過(guò)程、原理、條件等。一、利用表達(dá)載體構(gòu)建重組DNA分子是基因工程操作的第二步.克隆載體：用于大量擴(kuò)增外源DNA的載體,稱為克隆載體。.表達(dá)載體：使目的基因既能擴(kuò)增又能表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)的載體,稱為表達(dá)載體。.構(gòu)建重組DNA分子:用同種限制性內(nèi)切核酸酶剪切含有目的基因的DNA片段以及表達(dá)載體,然后用DNA連接酶將它們連接起來(lái),可完成體外重組，形成重組的DNA分子。二、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞是基因工程操作的第三步.將目的基因?qū)爰?xì)菌細(xì)胞(1)感受態(tài)細(xì)胞：自然條件下，細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率很低，通過(guò)化學(xué)和物理方法的處理可以增強(qiáng)細(xì)菌捕獲外源DNA的能力,成為感受態(tài)細(xì)胞。(2)方法(以大腸桿菌為例)：將大腸桿菌放于低溫、低濃度的CaCL溶液中,造成細(xì)胞膨脹,細(xì)胞膜通透性改變，成為感受態(tài)細(xì)胞。再在低溫條件下將大腸桿菌與重組DNA分子混合,使外源DNA會(huì)附于受體細(xì)胞表面，最后進(jìn)行短暫的熱刺激處理,使外源DNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞。.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞(1)常用方法：顯微注射法。(2)常用受體細(xì)胞：受精卵。.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞(1)常用方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。⑵農(nóng)桿菌特點(diǎn)：自然條件下，根癌農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DAN片段能整基因是否可以維持穩(wěn)定和表達(dá)其遺傳特性。下列關(guān)于目的基因的檢測(cè)和鑒定的敘述，錯(cuò)誤的是()A.獲取目的基因的單鏈片段并用含放射性的物質(zhì)標(biāo)記后制成探針B.可用含有目的基因的DNA探針檢測(cè)基因是否轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞C.目的基因是否轉(zhuǎn)錄和翻譯的檢測(cè)方法是DNA分子雜交技術(shù)D.可從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)來(lái)檢測(cè)目的基因是否翻譯成相應(yīng)蛋白質(zhì)C［將含有目的基因的DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記，以此作為探針，A正確?？刹捎肈NA分子雜交技術(shù)將含有目的基因的DNA片段用放射性同位素等做標(biāo)記，以此作為探針，檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)入了受體細(xì)胞，B正確。目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA的檢測(cè)方法是分子雜交技術(shù)；檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原一抗體雜交，C錯(cuò)誤。檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原一抗體雜交,若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已形成相應(yīng)蛋白質(zhì)產(chǎn)物，D正確。］5.下圖是將某細(xì)菌的基因?qū)氪竽c桿菌內(nèi)，制備“工程菌”的示意圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題。(1)獲得A有兩條途徑：一是以A的mRNA為模板，在酶的催化下，合成互補(bǔ)的單鏈DNA,然后在的作用下合成雙鏈DNA,從而獲得所需基因；二是根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的序列，推測(cè)出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)其DNA的序列，再通過(guò)化學(xué)方法合成所需基因。(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí)，需要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有、、4種脫氧核糖核昔三磷酸和耐高溫的DNA聚合酶，擴(kuò)增過(guò)程可以在PCR擴(kuò)增儀中完成。(3)由基因A和載體B拼接形成的C通常稱為o(4)在基因工程中，常用Ca2+處理D,其目的是［解析1(1)利用逆轉(zhuǎn)錄法合成目的基因的過(guò)程是：以mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化作用下合成單鏈DNA,然后在DNA聚合酶作用下，合成雙鏈DNA分子；根據(jù)蛋白質(zhì)工程合成目的基因的過(guò)程是：根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測(cè)出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)DNA中脫氧核昔酸的排列順序，通過(guò)化學(xué)方法合成。（2）PCR過(guò)程中需要酶、底物、模板、引物和能量等條件。（3）目的基因和載體結(jié)合，形成基因表達(dá)載體。（4）在利用大腸桿菌作受體細(xì)胞時(shí)，需要先用Ca2+處理，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的狀態(tài)。［答案］（1）逆轉(zhuǎn)錄DNA聚合酶氨基酸脫氧核昔酸（2）引物模板（A基因）（3）基因表達(dá)載體（4）使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的狀態(tài)合到植物染色體DNA中。(3)轉(zhuǎn)化方法：將目的基因插入質(zhì)粒的Tz*&中，用重組Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌,再讓農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，目的基因就會(huì)隨T-DNA整合到植物染色體DNA中，最后通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)可培育出完整的轉(zhuǎn)基因植株。三、檢測(cè)目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物是基因工程操作的第四步.通過(guò)檢測(cè)DNA可確定目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)是否穩(wěn)定在在。⑴借助載體上的標(biāo)記基因可以檢測(cè)目的基因是否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定地存在并遺傳。(2)PCR和核酸分子雜交技術(shù)可更加精準(zhǔn)地鑒定受體細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)入了目的基因。①運(yùn)用PCR技術(shù)檢測(cè)的簡(jiǎn)要步驟是：根據(jù)目的基因的序列設(shè)計(jì)PCR引物,利用待檢DNA為模板進(jìn)行PCR,再通過(guò)電泳或DNA測(cè)序技術(shù)鑒定PCR產(chǎn)物。②核酸分子雜交技術(shù)a.核酸分子雜交是指兩個(gè)不同來(lái)源核酸單鏈的核昔酸之間堿基互補(bǔ)配對(duì)的過(guò)程。b.核酸探針是帶有放射性或熒光標(biāo)記的具有特定核昔酸序列的DNA或RNAoc.利用探針檢測(cè)目的基因的簡(jiǎn)要方法是：用化學(xué)方法使待檢的DNA變性成單鏈并固定在硝酸纖維素膜上,然后加入探針,在適當(dāng)?shù)臈l件下探針與互補(bǔ)的目的基因片段形成雙鏈。漂洗硝酸纖維素膜去除未互補(bǔ)結(jié)合的探針后，若硝酸纖維素膜仍具有放射性或熒光,則可判斷待檢DNA中含有目的基因。.檢測(cè)RNA、蛋白質(zhì)以及個(gè)體水平上是否出現(xiàn)相應(yīng)性狀，可得知目的基因是否正確表達(dá)。(1)運(yùn)用核酸分子雜交技術(shù)還可檢測(cè)受體細(xì)胞中是否含有目的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNAo如果能檢測(cè)到目的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA,則說(shuō)明目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)成功轉(zhuǎn)錄。(2)運(yùn)用抗原一抗體雜交技術(shù)可以檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)。如果能探測(cè)到目的蛋白,則說(shuō)明目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)。(3)觀察測(cè)定個(gè)體是否表現(xiàn)出目的基因控制的特定性狀并穩(wěn)定遺傳,是判斷轉(zhuǎn)基因成功的直接證據(jù)。判斷對(duì)錯(cuò)（正確的打“J”，錯(cuò)誤的打“X”）.為保證目的基因在水稻細(xì)胞中表達(dá)，載體上應(yīng)含有特定的復(fù)制原點(diǎn)。（X）提示：基因表達(dá)需要有啟動(dòng)子，復(fù)制原點(diǎn)就是復(fù)制起點(diǎn)。.外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間才能進(jìn)行復(fù)制。（X）提示：復(fù)制需要以復(fù)制原點(diǎn)為起點(diǎn)，啟動(dòng)子與終止子是轉(zhuǎn)錄的起止點(diǎn)。.從大腸桿菌細(xì)胞中獲得人胰島素基因的mRNA,說(shuō)明目的基因完成了表達(dá)。（X）提示：基因的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯，獲得mRNA只能說(shuō)明完成了轉(zhuǎn)錄。.將重組表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物受精卵常用顯微注射法。（J）.轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉植株抗蟲(chóng)效果的鑒定必須通過(guò)分子檢測(cè)才能達(dá)到目的。（X）提示：抗蟲(chóng)效果的鑒定要在個(gè)體生物學(xué)水平上做抗蟲(chóng)接種實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒定。.可通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)棉花的染色體上是否插入了次基因。（J）遨Q0四1利用表達(dá)載體構(gòu)建重組DNA分子.表達(dá)載體的組成及作用.表達(dá)載體的構(gòu)建步驟目的基因與載體的結(jié)合過(guò)程，實(shí)際上是不同來(lái)源的基因重組的過(guò)程。其過(guò)程大體為：用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出黏性末端或平末端。一般用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，使其產(chǎn)生相同的黏性末端或平末端。將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處，再加入適量DNA連接酶，形成一個(gè)重組DNA分子（重組質(zhì)粒）（如圖）。（1）目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，若其沒(méi)有啟動(dòng)子，只將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中將無(wú)法進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。（2）目的基因的表達(dá)需要調(diào)控序列，因而用作載體的質(zhì)粒在插入目的基因的部位前面需要有啟動(dòng)子，后面需要有終止子。（3）鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞中需要有篩選標(biāo)記一一標(biāo)記基因。因此，一個(gè)基因表達(dá)載體的組成應(yīng)該包括：?jiǎn)?dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因等。⑴由于受體細(xì)胞有動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、微生物細(xì)胞之分，以及目的基因

導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法不同，所以基因表達(dá)載體在構(gòu)建上也會(huì)有所差別，不可能是千篇一律的。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程中，最好用同一種限制酶切割目的基因和載體,以獲得相同的黏性末端或平末端，便于二者進(jìn)行連接。但有時(shí)可用兩種限制酶分別切割載體和目的基因，這樣可避免載體與載體之間、目的基因與目的基因之間的自身連接，還可以確保目的基因和載體的正向連接。.圖(a)中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoRI>BamHI和3AI三種限制性內(nèi)切核酸酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖(b)為某種表達(dá)載體的示意圖(載體上的EcoRI、Sau3\I的切點(diǎn)是唯一的)。圖(a)圖(b)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題。(1)經(jīng)以7mHI酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被酶切后的產(chǎn)物連接，理由是(2)若某人利用圖(b)所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖(c)所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有,不能表達(dá)的原因是圖(c)［解析］(1)由題圖(a)可知，BamWI和Sau3AI兩種限制性內(nèi)切核酸酶的共mIxmIx1a.—GATC同識(shí)別序列是_CTAGmIx1a.—GATC同識(shí)別序列是_CTAG，二者切割可以形成相同的黏性末端，因此經(jīng)mIx1a.—GATC同識(shí)別序列是_CTAG，二者切割可以形成相同的黏性末端，因此經(jīng)BamH⑵在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子應(yīng)位于目的基因的首端，終止子應(yīng)位于目的基因的尾端，這樣基因才能順利地轉(zhuǎn)錄，再完成翻譯過(guò)程，即順利表達(dá)。圖中甲所示的目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙所示目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄，因此目的基因不能表達(dá)。

［答案］（l）Sa〃3AI兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端（2）甲和丙甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游,二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄遨此喜二將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法1.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法為什么要將目的基因插入農(nóng)桿菌質(zhì)粒的T-DNA片段?生物類型方法受體細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程特點(diǎn)植物農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法體細(xì)胞或受精卵目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上一轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌一導(dǎo)入植物細(xì)胞一插入植物細(xì)胞中的染色體DNA上一目的基因表達(dá)適用于雙子葉植物和裸子植物花粉管通道法在植物受粉后的一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊適用于任何開(kāi)花植物動(dòng)物顯微注射法受精卵目的基因表達(dá)載體提純一取卵（受精卵）一顯微注射一受精卵發(fā)育一獲得具有新性狀的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是采用最多、最有效的方法微生物3+處理法原核細(xì)胞Ca?+處理微生物細(xì)胞f使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)一將基因表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合在緩沖液中一一定溫度下促使該細(xì)胞吸收DNA分子原核生物繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少，從而成為最常用的受體細(xì)胞提示：Ti質(zhì)粒的T?DNA片段可以整合到受體細(xì)胞的染色體上。.如果改用花粉管通道法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，與農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法相比有什么優(yōu)點(diǎn)?提示：（1）操作簡(jiǎn)便；（2）直接將目的基因?qū)胧芫?，無(wú)須組織培養(yǎng)即可獲得植株。（答出一個(gè)即可，其他答案合理也可）.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的受體細(xì)胞除了受精卵外，還可以選擇什么細(xì)胞？提示：還可以將目的基因?qū)肱咛ジ杉?xì)胞，因?yàn)榕咛ジ杉?xì)胞也能發(fā)育成動(dòng)物體。.（2020?山東泰安期中改編）下列關(guān)于將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.可利用花粉管通道法培育轉(zhuǎn)基因植物B.用CM+處理大腸桿菌，以改變大腸桿菌細(xì)胞的生理狀態(tài)C.對(duì)于動(dòng)物來(lái)說(shuō)，受體細(xì)胞一般是受精卵D.將目的基因轉(zhuǎn)入微生物細(xì)胞常用顯微注射法D［可利用花粉管通道法培育轉(zhuǎn)基因植物，A正確；用Ca2+處理大腸桿菌，使之處于一種能夠吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，B正確；對(duì)于動(dòng)物來(lái)說(shuō)，受體細(xì)胞一般是受精卵，因?yàn)槭芫训娜苄砸子诒憩F(xiàn)，C正確；將目的基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法，將目的基因轉(zhuǎn)入微生物細(xì)胞常用Ca2+處理法，D錯(cuò)誤。］.下列關(guān)于目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的描述，正確的是（）A.可以通過(guò)顯微注射法直接將目的基因?qū)雱?dòng)物的受精卵中B.通過(guò)基因工程大量獲得胰島素時(shí)，受體細(xì)胞選擇大腸桿菌比酵母菌更有優(yōu)勢(shì)C.可以用PEG處理大腸桿菌將目的基因?qū)肫浼?xì)胞內(nèi)D.可以使用病毒將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞D［目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞前必須進(jìn)行基因表達(dá)載體的構(gòu)建，不能直接將目的基因?qū)?，A錯(cuò)誤；酵母菌細(xì)胞中有多種細(xì)胞器，作為受體細(xì)胞生產(chǎn)胰島素（分泌蛋白）比大腸桿菌更有優(yōu)勢(shì)，B錯(cuò)誤；大腸桿菌作為受體細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用Ca?+進(jìn)行處理，C錯(cuò)誤；可以利用部分病毒將自身DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上的特點(diǎn)構(gòu)建病毒表達(dá)載體，并通過(guò)病毒的侵染將目的基因?qū)胂嚓P(guān)受體細(xì)胞，D正確。］懣卜0券三檢測(cè)目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物1.在分子水平上檢測(cè)目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物待檢測(cè)物質(zhì)檢測(cè)目的檢測(cè)方法DNA確定目的基因在受體細(xì)胞中是否穩(wěn)定存在借助標(biāo)記基因檢測(cè)、運(yùn)用PCR技術(shù)鑒定、利用核酸分子雜交技術(shù)鑒定RNA確定目的基因核酸分子雜交技術(shù)蛋白質(zhì)是否正確表達(dá)抗原一抗體雜交技術(shù)2.常見(jiàn)轉(zhuǎn)基因生物在個(gè)體水平上鑒定、檢測(cè)的方法轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)方法觀察目標(biāo)抗蟲(chóng)植物飼喂害蟲(chóng)害蟲(chóng)死亡抗病毒（菌）植物病毒（菌）感染未侵染上病斑抗鹽植物鹽水澆灌正常生長(zhǎng)抗除草劑植物噴灑除草劑正常生長(zhǎng)4.下列哪一種方法不能用于檢測(cè)目的基因是否以i功導(dǎo)入或表達(dá)（）A.在顯微鏡下直接觀察受體細(xì)胞中是否含有目的基因B.通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞的DNA分子上是否含有目的基因C.提取受體細(xì)胞合成的相應(yīng)蛋白質(zhì)，利用抗原一抗體特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)D.抗蟲(chóng)基因?qū)胫参锛?xì)胞后，檢測(cè)植物是否具有抗蟲(chóng)特性A［檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入或表達(dá)的方法有多種。①分子水平上的檢測(cè)：通過(guò)FCR等技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因或檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA;檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)用抗原一抗體雜交技術(shù)。②個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定：檢測(cè)是否具有抗性及抗性程度；檢測(cè)基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性是否相同等。在顯微鏡下無(wú)法觀察到受體細(xì)胞中是否含有目的基因，故選A。］5.同一人體，所有體細(xì)胞都是由同一個(gè)受精卵有絲分裂而來(lái)的，所以人體內(nèi)所有細(xì)胞所含DNA相同，且具有該個(gè)體全部的遺傳物質(zhì)，但是由于基因的選擇性表達(dá)，不同種細(xì)胞中的mRNA和蛋白質(zhì)種類有所區(qū)別，如胰島A細(xì)胞能表達(dá)胰高血糖素基因，但不會(huì)表達(dá)胰島素基因。關(guān)于目的基因的檢測(cè)與鑒定，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A.要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因，可采用PCR技術(shù)B.要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,采用核酸分子雜交技術(shù)C.要檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，采用抗原一抗體雜交技術(shù)，此技術(shù)要提前制備好抗原D.要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定，以確定是否賦予轉(zhuǎn)基因生物相應(yīng)的特性C［檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，采用的方法為抗原一抗體雜交技術(shù)，此技術(shù)要提前制備好抗體（抗原為基因表達(dá)的蛋白質(zhì)，可以根據(jù)抗原提前制備好抗體）。］［課堂小結(jié)］1.下列有關(guān)基因表達(dá)載體的敘述，不正確的是（）知識(shí)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建核心語(yǔ)句背誦基因工程的基.本操作程序獲取目的基因構(gòu)建重組DNA分子一將目的其因?qū)胧荏w細(xì)胞檢測(cè)目的基因1,使目的基因既能擴(kuò)增又能表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)的載體，稱為表達(dá)載體。表達(dá)載體包含適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄和翻譯信號(hào)。2,將目的基因?qū)爰?xì)菌、動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞常用的方法分別為CM+處理法、顯微注射法和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。.借助載體上的標(biāo)記基因可以檢測(cè)目的基因是否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定地存在并遺傳。.PCR和核酸分子雜交技術(shù)可更加精準(zhǔn)地鑒定受體細(xì)胞中是否轉(zhuǎn)入了目的基因。.運(yùn)用核酸分子雜交技術(shù)還可以檢測(cè)受體細(xì)胞中是否含有目的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNAo.運(yùn)用抗原一抗體雜交技術(shù)可以檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)。A.具有復(fù)制起點(diǎn)，使目的基因能在受體細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增B.具有啟動(dòng)子，作為多肽鏈合成的起始信號(hào)C.具有標(biāo)記基因，有利于目的基因的初步檢測(cè)D.具有目的基因，以獲得特定的基因表達(dá)產(chǎn)物B［基因表達(dá)載體必須使目的基因能夠在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增，因此要具有復(fù)制起