DB37-T 3421-2018混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類藥物的測定高效液相色譜法

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DB37山 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB37/T3421—2018混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類藥物的測定高效液相色譜法Determinationoffluoroquinolonesinmixedfeedadditives-Highperformanceliquidchromatography2018-09-14發(fā)布 2018-10-14實(shí)施山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布DB37/T3421DB37/T3421—2018II前??言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張蕓、孫延軍、張瑋、宮玲玲、李俊玲。DB37/T3421DB37/T3421—2018PAGEPAGE5混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類藥物的測定高效液相色譜法范圍丙沙星、甲磺酸達(dá)氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星的方法。（稻殼粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、桔梗、甘草、白術(shù)、赤藥、知母、茯苓等混合）合型飼料添加劑中氟喹諾酮類藥物的測定。0.15mg/kg0.5mg/kgmg/kg0.15mg/kg規(guī)范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備原理試樣中的氟喹諾酮類藥物用鹽酸甲醇溶液提取，高效液相色譜-熒光檢測法測定，外標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有說明，所有試劑均為分析純。水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。甲醇。乙腈：色譜純。乙腈水溶液：乙腈+水=1+9，V+V。鹽酸溶液：c（HCl）=0.1mol/L9mL1000mL鹽酸甲醇溶液：鹽酸溶液（4.4）+甲醇=8+2V+V。10.56g7.87g800mLpH4.0，1000mL0.22μm氫氧化鈉溶液：c（NaOH）=30mmol/L0.12g100mLCAS見附錄B。（110mg(0.0001g)10mL30mmol/L61mL10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容。2℃～86Ⅰ1mL10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容。2℃～8610mL0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL，5μg/mL?，F(xiàn)用現(xiàn)配。儀器設(shè)備高效液相色譜儀：配熒光檢測器。0.001g0.01mg旋渦混合器。5000r/min。微孔濾膜：0.22μm，水相。樣品按GB/T20195制備試樣，粉碎過0.45mm試驗(yàn)篩，充分混勻，裝入磨口瓶中備用。試驗(yàn)步驟提取準(zhǔn)確稱取試樣2精確至0.00150mL4.5)10mLmin5000r/min離心10min0.22μm濾膜，備用。測定高效液相色譜參考條件色譜柱：C18，150mm4.6mm2.7μm流動(dòng)相：檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（4.6）+乙腈（4.2），1；流速：0.7mL/mind)柱溫：50℃；進(jìn)樣量：20μL；278nm465nm表1梯度洗脫程序時(shí)間（min）乙腈（%）檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（%）09911299120208020.19010表1梯度洗脫程序 （續(xù)）時(shí)間（min）乙腈（%）檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（%）25901025.199130991定量測定按照7.2.1給出的色譜參考條件，分別上機(jī)測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（從低濃度到高濃度進(jìn)樣）和試樣溶(4.5)適當(dāng)稀釋后再進(jìn)樣分析。甲磺酸達(dá)氟沙星線性范圍0.01μg/mL～1μg/mL，諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星和沙拉沙星線性范圍0.02μg/mL～5μg/mL。氟喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜參見附錄A。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中氟喹諾酮類藥物的含量i，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，單位為毫克每千克(mg/kg)，按式（1）計(jì)算：XVn (1)i m式中：V—提取液體積，單位為毫升（mL)；ci—試樣中氟喹諾酮類藥物峰面積對應(yīng)的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL)；m—試樣質(zhì)量，單位為克(g)；n—稀釋倍數(shù)。測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不大于這兩個(gè)測定值的算術(shù)平均值的20%。附 錄 A（資料性附錄）氟喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖氟喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖A.1。注：1——諾氟沙星；2——氧氟沙星；3——環(huán)丙沙星；4——甲磺酸達(dá)氟沙星；5——恩諾沙星；6——沙拉沙星。圖A.1氟喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（1.0μg/mL）附 錄 B（資料性附錄）氟喹諾酮類藥物的純度及CAS號氟喹諾酮類藥物的純度及CAS號見表B.1。表B.1氟喹諾酮類藥物的純度及CAS序號標(biāo)準(zhǔn)品名稱純度要求CAS號1諾氟沙星≥97%