DB37-T 3421-2018混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類藥物的測定高效液相色譜法

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DB37山 東 省 地 方 標 準DB37/T3421—2018混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類藥物的測定高效液相色譜法Determinationoffluoroquinolonesinmixedfeedadditives-Highperformanceliquidchromatography2018-09-14發(fā)布 2018-10-14實施山東省質量技術監(jiān)督局 發(fā)布DB37/T3421DB37/T3421—2018II前??言本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由山東省畜牧獸醫(yī)局提出。本標準由山東省畜牧業(yè)標準化技術委員會歸口。本標準主要起草單位：山東省飼料質量檢驗所。本標準主要起草人：張蕓、孫延軍、張瑋、宮玲玲、李俊玲。DB37/T3421DB37/T3421—2018PAGEPAGE5混合型飼料添加劑中氟喹諾酮類藥物的測定高效液相色譜法范圍丙沙星、甲磺酸達氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星的方法。（稻殼粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、桔梗、甘草、白術、赤藥、知母、茯苓等混合）合型飼料添加劑中氟喹諾酮類藥物的測定。0.15mg/kg0.5mg/kgmg/kg0.15mg/kg規(guī)范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T20195動物飼料試樣的制備原理試樣中的氟喹諾酮類藥物用鹽酸甲醇溶液提取，高效液相色譜-熒光檢測法測定，外標法定量。試劑或材料除非另有說明，所有試劑均為分析純。水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。甲醇。乙腈：色譜純。乙腈水溶液：乙腈+水=1+9，V+V。鹽酸溶液：c（HCl）=0.1mol/L9mL1000mL鹽酸甲醇溶液：鹽酸溶液（4.4）+甲醇=8+2V+V。10.56g7.87g800mLpH4.0，1000mL0.22μm氫氧化鈉溶液：c（NaOH）=30mmol/L0.12g100mLCAS見附錄B。（110mg(0.0001g)10mL30mmol/L61mL10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容。2℃～86Ⅰ1mL10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容。2℃～8610mL0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL，5μg/mL?，F用現配。儀器設備高效液相色譜儀：配熒光檢測器。0.001g0.01mg旋渦混合器。5000r/min。微孔濾膜：0.22μm，水相。樣品按GB/T20195制備試樣，粉碎過0.45mm試驗篩，充分混勻，裝入磨口瓶中備用。試驗步驟提取準確稱取試樣2精確至0.00150mL4.5)10mLmin5000r/min離心10min0.22μm濾膜，備用。測定高效液相色譜參考條件色譜柱：C18，150mm4.6mm2.7μm流動相：檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（4.6）+乙腈（4.2），1；流速：0.7mL/mind)柱溫：50℃；進樣量：20μL；278nm465nm表1梯度洗脫程序時間（min）乙腈（%）檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（%）09911299120208020.19010表1梯度洗脫程序 （續(xù)）時間（min）乙腈（%）檸檬酸-乙酸銨緩沖溶液（%）25901025.199130991定量測定按照7.2.1給出的色譜參考條件，分別上機測定標準系列溶液（從低濃度到高濃度進樣）和試樣溶(4.5)適當稀釋后再進樣分析。甲磺酸達氟沙星線性范圍0.01μg/mL～1μg/mL，諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星和沙拉沙星線性范圍0.02μg/mL～5μg/mL。氟喹諾酮類藥物標準溶液圖譜參見附錄A。試驗數據處理試樣中氟喹諾酮類藥物的含量i，以質量分數表示，單位為毫克每千克(mg/kg)，按式（1）計算：XVn (1)i m式中：V—提取液體積，單位為毫升（mL)；ci—試樣中氟喹諾酮類藥物峰面積對應的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL)；m—試樣質量，單位為克(g)；n—稀釋倍數。測定結果用平行測定的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。重復性在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于這兩個測定值的算術平均值的20%。附 錄 A（資料性附錄）氟喹諾酮類藥物標準溶液色譜圖氟喹諾酮類藥物標準溶液色譜圖見圖A.1。注：1——諾氟沙星；2——氧氟沙星；3——環(huán)丙沙星；4——甲磺酸達氟沙星；5——恩諾沙星；6——沙拉沙星。圖A.1氟喹諾酮標準溶液色譜圖（1.0μg/mL）附 錄 B（資料性附錄）氟喹諾酮類藥物的純度及CAS號氟喹諾酮類藥物的純度及CAS號見表B.1。表B.1氟喹諾酮類藥物的純度及CAS序號標準品名稱純度要求CAS號1諾氟沙星≥97%