DB37-T 3771-2019 棗瘋病綜合防控技術(shù)規(guī)程-（高清版）

ICS 65.020B16

DB37山 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB37/T3771—2019棗瘋病綜合防控技術(shù)規(guī)程Technicalregulationforintegratedmanagementofjujubewitches’-broom20192019120520200105山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并組織實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省果樹研究所、山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所。棗瘋病綜合防控技術(shù)規(guī)程范圍GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則NY/T393綠色食品農(nóng)藥使用準(zhǔn)則NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則下列術(shù)語和定義適用于本文件。下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1植原體Phytoplasma3.2棗瘋病Jujubewitches’-broom（Jujubewitches’-broomphytoplasma）3.3棗瘋病雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附（DAS-ELISA）檢測(cè)利用棗瘋病植原體免疫膜蛋白抗體（來源于兔）及堿性磷酸酯酶標(biāo)記的羊抗兔進(jìn)行ELISA檢測(cè)樣品的吸光值（I）與健康植株（H）的吸光值。根據(jù)I/H的比值來判斷棗瘋植原體的存在與否。4發(fā)病規(guī)律4.1傳播途徑棗瘋病植原體主要通過媒介昆蟲、嫁接和帶病苗木進(jìn)行傳播。4.2發(fā)病特點(diǎn)1～25～6初期表皮呈褐色，萌生的根蘗呈叢枝狀，后期形成點(diǎn)發(fā)性潰瘍斑，繼而枯死。倍～6結(jié)果少或不結(jié)果，果實(shí)小、花臉，肉質(zhì)硬，口感差。結(jié)果少或不結(jié)果，果實(shí)小、花臉，肉質(zhì)硬，口感差。6普查與鑒定每年8月～10月進(jìn)行逐株檢查，枝條節(jié)間縮短、簇生，葉片黃化變小為病害診斷主要依據(jù)，對(duì)查出的病株做好明顯標(biāo)記，統(tǒng)計(jì)發(fā)病率。（PCR）檢測(cè)方法見附錄A。（DAS-ELISA）檢測(cè)方法見附錄B。7防治措施新建棗園宜在沒有發(fā)生棗瘋病的地塊建園。cm～60cm0.360～70適度修剪，合理整形，提高樹體通透性和光照強(qiáng)度。（7.5防治媒介昆蟲主要傳毒媒介為中華擬菱紋葉蟬（HishimonoideschinensisA.）、凹緣菱紋葉蟬（HishimonusselltusU.）（HishimonuslamellatusC.）（Typhlocybasp.）GB/T8321NY/T393和NY/T1276附錄A（規(guī)范性附錄）棗瘋病病原聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)方法DNA采取癥狀明顯的和健康的棗樹幼嫩枝條、葉片或者花樣本，樣本短時(shí)間（1周內(nèi)）可于4℃冰箱保存，長(zhǎng)時(shí)間需于-80℃冰箱保存。用商品化植物基因組DNA快速提取試劑盒提取。PCR16SrRNAR16mF2（5'-CATGCAAGTCGAACGGA-3'）/R16mR1（5'-CTTAACCCCAATCATCGAC-3'）進(jìn)行PCRDNAPCRPCRTaq后9445s，601min，722min，357210minPCR產(chǎn)物于1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。陽性材料直接PCR擴(kuò)增片段大小約1.4kb，陰性對(duì)照及空白PCR產(chǎn)物于1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。陽性材料直接PCR擴(kuò)增片段大小約1.4kb，陰性對(duì)照及空白對(duì)照均應(yīng)無擴(kuò)增片段。A.4序列測(cè)定及分析PCRDNA進(jìn)行Blast檢索，初步確定病原種類。附錄B（規(guī)范性附錄）棗瘋病植原體雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附（DAS-ELISA）檢測(cè)方法將疑似病樣按照1:10或1:100的比例加入抗原包被緩沖液，研磨后取上清備用。取150μL稀釋的檢測(cè)樣品液加入96孔酶標(biāo)板中，以棗瘋植原體陽性標(biāo)準(zhǔn)品為陽性對(duì)照，以健康棗樹標(biāo)準(zhǔn)品為陰性對(duì)照，在4℃條件下孵育過夜或37℃孵育1h～2h。洗板將酶聯(lián)板迅速反扣，棄去孔中液體，每孔加入PBST液200μL，靜置3min～5min后迅速棄去孔中液體，并在吸水紙上扣打幾下以盡量除去孔中液體，重復(fù)3次。B.4封閉B.4封閉去除酶標(biāo)板中的PBST緩沖液，每孔加入150μL的封閉緩沖液，37℃恒溫箱孵育1.5h。B.5洗板同步驟C.3。B.6加一抗用PBST稀釋棗瘋植原體免疫膜蛋白抗體（來源于兔）至合適的工作濃度（1:1000），每孔樣品加150μL，37℃恒溫箱孵育2h。B.7洗板同步驟C.3。B.8加酶標(biāo)抗體每孔加入150μLPBST稀釋的堿性磷酸酯酶標(biāo)記的羊抗兔（1:5000），37℃恒溫箱孵育2h。B.9洗板同步驟C.3。每孔加底物溶液150μL；室溫避光顯色30min～60min；酶聯(lián)儀在405nm下讀數(shù)。附錄C（）藥劑防治棗瘋病的方法見表C.1。表C.1藥劑防治棗瘋病的方法藥劑選擇四環(huán)素類農(nóng)用抗生素使用時(shí)間棗樹展葉期，5月上旬使用方法配藥4～6500mL打孔20cm452cm～3cm0.45cm的注藥孔。若多側(cè)均有瘋枝時(shí)，打孔數(shù)量依據(jù)樹干直徑?jīng)Q定，樹干直徑＜10cm110cm210cm410cm附近不能有樹洞和裂縫，避免造成漏液。輸液1.5m常滴液后，放到最大輸液速度處輸液。輸完液后用泥巴涂抹好孔口，以防藥液揮發(fā)。使用藥量10cm～