低分子量肝素改善急性胰腺炎微循環(huán)障礙課件

低分子量肝素改善急性胰腺炎微循環(huán)障礙的實(shí)驗研究專業(yè)普通外科研究生王強(qiáng)*前言*實(shí)驗方法和材料*實(shí)驗結(jié)果*結(jié)論*討論*參考文獻(xiàn)一、前言

急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制胰酶自身消化學(xué)說腸道細(xì)菌易位及二次打擊論炎癥因子的級聯(lián)瀑布式反應(yīng)胰腺微循環(huán)障礙

研究表明SAP早期即發(fā)生微循環(huán)障礙，并貫穿SAP的整個病程，是SAP的啟動因子和持續(xù)損害因子，其中炎癥因子和血管活性物質(zhì)的過度釋放更加重了SAP的微循環(huán)障礙[1，2]。所以改善胰腺微循環(huán)障礙有望成為治療SAP的一種重要手段。胰腺微循環(huán)的影響因素胰腺小葉多由獨(dú)支小葉內(nèi)動脈供給血液，相鄰小葉內(nèi)動脈之間及其分支之間無吻合存在，屬終末動脈，所以小葉內(nèi)動脈的痙攣、栓塞或壓迫會造成胰腺小葉的缺血、壞死

；急性胰腺炎時大量細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)釋放（如：NO、ET、PAF、TXB2、TNF、IL、緩激肽）

，使血管收縮、痙攣、通透性增加，加重了微循環(huán)障礙；二、實(shí)驗材料和方法實(shí)驗材料TNF-αELISA試劑盒、BKELISA試劑盒均購自美國R&D公司。牛黃膽酸鈉購自美國Sigma公司。低分子量肝素（LMWH）購自廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司。

重癥急性胰腺炎大鼠模型的制作

Wistar大鼠32只作為實(shí)驗對象，采用膽胰管內(nèi)逆行注射5%?；悄懰徕c溶液的方法復(fù)制SAP模型。術(shù)前禁食12h，飲水不限。1%戊巴比妥鈉腹腔麻醉（3ml/kg）,固定大鼠。經(jīng)上腹正中切口進(jìn)腹，提起十二指腸以無損傷血管夾夾閉肝門部胰膽管。TB針經(jīng)十二指腸穿刺胰膽管，加壓注射5%牛黃膽酸鈉(1ml/kg)，持續(xù)1min，助手捏緊十二指腸兩端，保持3min，觀察到胰腺迅速充血、間質(zhì)水腫并有散在出血點(diǎn)，術(shù)畢關(guān)腹。實(shí)驗動物及分組及處理

Wistar大鼠假手術(shù)組(S組，n=8)低分子量肝素鈣組(L組，n=12)

急性胰腺炎模型組（SAP組，n=12)只麻醉開腹，關(guān)腹后給予生理鹽水造模成功后給予低分子量肝素鈣造模成功后給予生理鹽水

分別于6h、12h采血，ELISA雙抗夾心法測定數(shù)據(jù)，觀察病理切片統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。TNF-α、BK比較采用重復(fù)測量資料的方差分析。病理評分比較用單因素方差分析的LSD-t檢驗。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。三、實(shí)驗結(jié)果各組大鼠血清TNF-α、BK的濃度（ng/L）及病理評分

組別TNF-αBK病理評分6h12h6h12hS組SAP組L組75.7±3.5598.8±2.0690.8±2.0076.1±3.52107.9±1.7585.35±2.4216.97±1.5924.09±1.1221.43±0.8316.98±0.9829.34±1.1119.13±1.550.5±0.29.8±1.64.2±0.9病理切片S組(400×）SAP組（400×）L組（400×）統(tǒng)計圖表TNF-α均數(shù)圖（單位ng/L）BK均數(shù)圖（單位ng/L）胰腺病理切片的病理評分四、討論TNF-α是最重要的炎性介質(zhì)之一，其參與IL-1、IL-6和IL-8等炎癥因子的產(chǎn)生且誘導(dǎo)自身的基因表達(dá)，導(dǎo)致各種炎癥因子的大量釋放，引起“瀑布”效應(yīng)；促使白細(xì)胞趨化、黏附，使血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加；刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)皮素一氧化氮和氧自由基等介質(zhì),加劇微循環(huán)障礙，導(dǎo)致胰腺組織壞死[5,6]。緩激肽（BK）可以通過與血管緊張素、氧自由基、內(nèi)皮素和血小板活化因子的相互作用來發(fā)揮其血管效應(yīng)[3]。Bloechle［7］等的實(shí)驗研究表明緩激肽可導(dǎo)致微循環(huán)瘀滯，廣泛的白細(xì)胞粘附，提示BK加重了微循環(huán)障礙并加重胰腺組織損傷。但是Weidenbach[8]等實(shí)驗發(fā)現(xiàn)緩激肽對AP胰腺微循環(huán)具有保護(hù)作用。

LMWH在改善SAP微循環(huán)障礙方面已經(jīng)得到基本肯定，大量實(shí)驗證明LMWH對AP有治療作用，可以降低AP炎癥因子及血管活性物質(zhì)的大量釋放。潘小季[9]等的實(shí)驗研究證明LMWH可以降低SAP大鼠炎癥因子TNF-α、IL-6的釋放，降低胰腺組織的TXB2/6-keto-PGF1α比值，改善SAP的微循環(huán)障礙。李介秋［10］等經(jīng)實(shí)驗研究表明LMWH能降低兔子急性壞死性胰腺炎(AHNP)模型的TNF，NO，淀粉酶（AMS），TXB2水平,抑制丙二醛（MDA）產(chǎn)生,可改善AHNP兔微循環(huán)障礙,對AHNP有一定治療作用。

五、結(jié)論

本實(shí)驗的研究表明，SAP組大鼠TNF-α和BK的血清含量隨時間增加明顯升高，并明顯高于S組大鼠且胰腺病損程度明顯升高，經(jīng)過LMWH干預(yù)后，TNF-α和BK的釋放隨時間增加明顯減少，同時經(jīng)過LMWH干預(yù)的大鼠各時間點(diǎn)TNF-α和BK的釋放明顯低于SAP組且胰腺病損程度明顯降低。表明TNF-α和BK的大量釋放加重了SAP胰腺微循環(huán)障礙，同時LMWH可以減少TNF-α和BK的釋放，從而改善SAP胰腺微循環(huán)障礙，減輕SAP胰腺病損程度，對SAP起到治療作用。

六、參考文獻(xiàn)[1].BhatiaM，NeoptolemosJP，SlacinJ.InflammatoryMdiatorsastherapeutictargetsinacutepancreatitis[J].CurrOpininvestingDrugs,2001,2(4):496-501.[2].陳友岱，周總光，緩激肽在器官微循環(huán)損傷中的作用[J]。微循環(huán)學(xué)雜志,2001,11（1）:43-46[3].劉立濤,滑志娟,程樹杰等,小劑量低分子肝素對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺微循環(huán)的影響[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志2007,36(5):1289-1291[4].DoboszM,MionskowskaL,HaaeS.Heparinimprovesorganmicrocirculatorydisturbancesincaeruleininducedacutepancreatitisinrats.World[J]Gastroenterol2004;10(17):2553-2556[5].譚向龍，王世斌，姚詠明等，低分子量肝素聯(lián)合烏司他丁治療急性胰腺炎的療效分析[J]。中國急救復(fù)蘇與災(zāi)害醫(yī)學(xué)雜志，2008,3(10):597-607[6].彭新剛，張順，盧云等，大鼠重癥急性胰腺炎時IL-6、TNF-α和微循環(huán)變化的實(shí)驗研究[J]。陜西醫(yī)學(xué)雜志，2007，36（10）：1275-1278[7].BloechleC,KustererK,KuehnRM,etal.Inhibitionofbradykininβ2receptorpreservesmicrocirculationinexperimentalpancreatitisinrats[J].AmPhysiol,1998,274(1):42-51[8].WeidenbachH,LerchMM,GressTM,etal.Vasoactivemediatorsandtheprogressionfromoedematoustonecrotisingexperimentalacutepancreatitis〔J〕.Gut,1995;37(3)