臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件

臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)緒論

目前,我國臨床醫(yī)學(xué)檢驗(clinicalmedicallaboratory)的設(shè)置,主要包括臨床生物化學(xué)、臨床血液學(xué)、臨床微生物學(xué)、臨床免疫學(xué)、臨床分子生物學(xué)和臨床檢驗基礎(chǔ)。由于臨床醫(yī)學(xué)檢驗與臨床醫(yī)學(xué)日益結(jié)合,因此已形成了包括實驗診斷學(xué)在內(nèi)的臨床檢驗醫(yī)學(xué)(clinicallaboratorymedicine)。緒論

目前,我國臨床醫(yī)臨床檢驗基礎(chǔ)是一門高度綜合性的應(yīng)用科學(xué),是臨床醫(yī)學(xué)和實驗室醫(yī)學(xué)的橋梁學(xué)科,是前期課程的延伸,是醫(yī)學(xué)檢驗五年制本科生的必修主干課程之一.近年來隨著計算機(jī),生物化學(xué),分子生物學(xué),生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)和電子技術(shù)等學(xué)科的發(fā)展,醫(yī)學(xué)臨床檢驗又吸收引進(jìn)了大量的其他學(xué)科的先進(jìn)技術(shù),使臨床檢驗工作在分析檢測的速度和靈敏度上有了很大的提高,檢測的方法學(xué)有了很大的發(fā)展.

臨床檢驗基礎(chǔ)是一門高度綜合性的應(yīng)用科學(xué),是臨床醫(yī)學(xué)和實驗室醫(yī)主要內(nèi)容:本門課程由一般血液檢查,血栓與止血,體液檢驗,脫落細(xì)胞檢驗共十八章組成.

學(xué)習(xí)目標(biāo):本門課程的教學(xué)目的和基本技能訓(xùn)練要求是:通過對臨床診斷應(yīng)用較廣泛的各種標(biāo)本的檢測,使學(xué)生對臨床檢驗工作形成較深刻的理解,掌握各種實驗室理論和操作技能,養(yǎng)成良好的實驗室工作作風(fēng),為畢業(yè)后能從事臨床檢驗技術(shù)工作和管理工作奠定良好的理論和實驗室基礎(chǔ).

主要內(nèi)容:本門課程由一般血液檢查,血栓與止血,體液檢驗,脫落一.臨床檢驗基礎(chǔ)的現(xiàn)狀和特點

臨床檢驗,源于古代對尿液的感官檢查,如尿液的顏色、氣味等。17世紀(jì)荷蘭Leeuwenhoek發(fā)明顯微鏡,跨時代地推動了醫(yī)學(xué)走進(jìn)微觀世界。人們從認(rèn)識靜態(tài)的血液細(xì)胞形態(tài)開始,逐步深入到研究細(xì)胞的功能、大分子物質(zhì)、基因的結(jié)構(gòu)和功能,試圖探究生命現(xiàn)象的本質(zhì)。20世紀(jì)末以來,臨床醫(yī)學(xué)檢驗的加速發(fā)展,是現(xiàn)代物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、數(shù)學(xué)等學(xué)科之間相互交融的結(jié)果,特別是醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)的進(jìn)展,更直接映射出現(xiàn)代電學(xué)、電子學(xué)、計算機(jī)科學(xué)、光學(xué)等自然科學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科與生物化學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科杰出結(jié)合的光輝;而當(dāng)前正在興起的現(xiàn)代信息網(wǎng)絡(luò)技術(shù),又進(jìn)一步實現(xiàn)了病理學(xué)、影象學(xué)等形態(tài)檢查的遠(yuǎn)程醫(yī)學(xué)傳播,為臨床醫(yī)學(xué)及時提供了檢測報告和實時交流。

一.臨床檢驗基礎(chǔ)的現(xiàn)狀和特點

臨床檢驗,臨床檢驗基礎(chǔ),借助先進(jìn)的檢測技術(shù),對來自離體的血液,尿液.糞便以及分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行理學(xué)、化學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡形態(tài)學(xué)的檢查,以簡便、快速的檢測結(jié)果，基本滿足臨床醫(yī)學(xué)檢驗篩檢疾病的需求。臨床檢驗基礎(chǔ),借助先進(jìn)的檢測技術(shù),對來自離體的血液,尿液.糞近20年來,臨床檢驗基礎(chǔ)的發(fā)展具有以下鮮明的特征：1、從手工檢測步入儀器自動化、電腦化檢測。20世紀(jì)50年代初問世的血液分析儀,從儀器自動計數(shù)血液紅細(xì)胞、白細(xì)胞幾項參數(shù)開始,到如今發(fā)展到綜合運用電學(xué)、光學(xué)、細(xì)胞化學(xué)等多種檢測原理.具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的中高檔儀器,能同時提供全血細(xì)胞計數(shù)及其相關(guān)參數(shù)和(或)網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù).”幼稚細(xì)胞”分類等多項參數(shù)。血液分析儀的特點包括:用血量少(以微升計)、檢測快速(以分、秒計)、檢測項目多(參數(shù)達(dá)20～40余項)、精度高(變異系數(shù)可低于1%)、自動質(zhì)量控制(提供多種質(zhì)量方式和質(zhì)控圖形)以及信息取存和聯(lián)網(wǎng)系統(tǒng)。用于臨床檢驗基礎(chǔ)的檢驗儀器,還有尿液干化學(xué)分析儀、尿沉渣分析儀、血沉儀等。同樣具有檢測簡便、快速、精密度高的特點。近20年來,臨床檢驗基礎(chǔ)的發(fā)展具有以下鮮明的特征：2.床邊檢測(pointofcaretest,POCT)這種檢測方法省去了標(biāo)本轉(zhuǎn)運的程序，使檢測的標(biāo)本更新鮮、交叉污染率更低,更接近被檢者當(dāng)時生理或病理實際狀態(tài)。床邊檢測標(biāo)本用量更少、檢測速度更快、檢測場所更靈活、結(jié)果報告更及時(常立等可取),對檢驗者無需專門培訓(xùn)。干化學(xué)單項試帶或多聯(lián)試帶尿液定性或半定量檢測,是典型的床邊檢驗實例。2.床邊檢測(pointofcaretest,POC3.試劑批量化、配套化、專業(yè)化和多樣化已有許多優(yōu)質(zhì)的商品化試劑應(yīng)用于臨床基礎(chǔ)檢驗，包括瑞氏染色液，血液分析儀、止凝血檢測用的配套試劑盒、尿液分析儀用配套的試帶等。3.試劑批量化、配套化、專業(yè)化和多樣化已有許多優(yōu)質(zhì)4.更加重視檢驗方法的標(biāo)準(zhǔn)化。當(dāng)前，我國檢驗界十分重視對血液分析儀、尿液沉渣顯微鏡檢查操作的標(biāo)準(zhǔn)化。目前，已經(jīng)有血液分析儀的評價系統(tǒng)，保證了檢測質(zhì)量和各種儀器之間的可比性。對床邊檢測項目更要求標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，對止凝血等各種商品化檢測試劑，強(qiáng)調(diào)必須達(dá)到應(yīng)有的檢測靈敏度和特異性。4.更加重視檢驗方法的標(biāo)準(zhǔn)化。當(dāng)前，我國檢驗界十分重視對血液5.實施全面質(zhì)量管理和質(zhì)量保證質(zhì)量保證包括人員和物質(zhì)兩大方面。在人員方面，主要是檢驗人員的醫(yī)德素質(zhì)和技能素質(zhì)。檢驗者必須有高尚的醫(yī)德、熟練的技能；熟悉如何避免檢驗前、中、后影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的各種因素和防止主要干擾內(nèi)素的具體方法。檢驗過程中，檢驗人員必須作好嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)量控制，并積極參與室間質(zhì)量控制的活動，不斷提高檢驗質(zhì)量的準(zhǔn)確性和可靠性。5.實施全面質(zhì)量管理和質(zhì)量保證質(zhì)量保證包括人員和物質(zhì)兩大方面檢驗前，標(biāo)本的采集和轉(zhuǎn)運過程尤為重要；管理好這兩個環(huán)節(jié)，可降低70%的檢驗差錯率。檢驗用的標(biāo)本通常有血液、尿液、糞便及其他體液。有些標(biāo)本的采集，需用嚴(yán)格的消毒方法，并帶有一定的創(chuàng)傷性。因此，檢驗人員應(yīng)事先向患者解釋，讓患者充分理解、積極配合，從而獲取合格的標(biāo)本。檢驗前，標(biāo)本的采集和轉(zhuǎn)運過程尤為重要；管理好這兩個環(huán)節(jié)，可降（1）標(biāo)本采集原則：留取標(biāo)本的基本原則是保持離體標(biāo)本采集質(zhì)和量的完整性。任何離開人體的標(biāo)本，要盡可能保持體內(nèi)當(dāng)時生理或病理的固有狀態(tài)：使標(biāo)本的有形部分（指一般能用普通光學(xué)顯微鏡觀察到的成分，如各種細(xì)胞、蟲卵等）和無形成分（指一般能溶解于液體，不能用顯微鏡觀察到的化學(xué)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、葡萄糖等）的質(zhì)和量基本不變。事實上，任何機(jī)體中的成分，一旦離開人體，則受到環(huán)境的影響，會發(fā)生改變。衡量標(biāo)本是否新鮮的簡單尺度，是從標(biāo)本采集到檢驗所允許的時限。因此，標(biāo)本越及時送檢、越早完成檢驗，檢驗結(jié)果就越可靠。（1）標(biāo)本采集原則：留取標(biāo)本的基本原則是保持離體2）避免非疾病因素：非疾病因素造成檢驗結(jié)果異常的主要環(huán)節(jié)可分為3個階段：第1階段是在檢測前，包括是否有合格的操作人員、合乎要求的標(biāo)本以及被檢測者當(dāng)時的生理特征和狀態(tài)；第2階段是在實驗檢測中，包括具體的檢測方法、儀器和試劑的質(zhì)量等；第3階段是檢測后對結(jié)果的正確評價和解釋。2）避免非疾病因素：非疾病因素造成檢驗結(jié)果異常的主要環(huán)節(jié)可分（１）生理變異：由生理因素引起檢驗結(jié)果變異比檢測過程中產(chǎn)生的技術(shù)性變異往往更大。生理變異可分為兩大類：一類是不能控制的，如年齡和性別，對檢驗的影響是長期效應(yīng)；另一類是能夠加以控制的，如食物、藥物、情緒、活動狀態(tài)、體位等，對檢驗的影響多為短期效應(yīng)。年齡：一般而言，檢測時應(yīng)考慮四組年齡：新生兒、兒童期到青春期、成人和老年人。性別：不少檢測項目的參考值，男女有別，即使在同一年齡階段，也有明顯的差異。這種情況主要反映在青春期后。例如：在15—40歲，男女的紅細(xì)胞計數(shù)值不同，女性一般低于男性；妊娠期中后期，紅細(xì)胞計數(shù)值隨血容量增高和血液稀釋可明顯減低；紅細(xì)胞沉降率，女性高于男性，如妊娠期3個月以上，可進(jìn)一步增高。體位：直立時，血容量比臥位平躺時減少600—700ml。從臥位到直立時，血容量可減少10%左右。運動：對檢驗結(jié)果的影響程度，與運動的強(qiáng)度和時間長短有關(guān)。時間和狀態(tài)變化：晝夜更替、睡眠與覺醒狀態(tài)、暴熱、寒冷、緊張，可使腎上激素分泌變化，從而引起血細(xì)胞數(shù)量、質(zhì)量和許多物質(zhì)濃度的改變。（１）生理變異：由生理因素引起檢驗結(jié)果變異比檢測過程中產(chǎn)生的（２）飲食因素：如剛進(jìn)食不久即作血液檢測，可見血葡萄糖、脂肪濃度增高。長期素食者，尿液偏堿，血維生素B12接近缺乏，膽紅素則較高。禁食、減肥者，血糖和胰島素減低，血酮體可明顯增高，血清許多酶活性增高，嚴(yán)重者還可發(fā)生酸中毒。飲酒者，產(chǎn)生輕度醉酒時，血葡萄糖濃度就可增加20%-50%。吸煙者，吸入一支煙，血糖濃度在10min內(nèi)就可增加0.56mmol/L，可持續(xù)1h之久，紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)增高，精子計數(shù)減少，異形精子率增高，精子活動力減弱。（２）飲食因素：如剛進(jìn)食不久即作血液檢測，可見血葡萄糖、脂肪（３）藥物因素：口服方式，藥效作用慢而持久；注射或吸入方式，藥效作用快而短促。當(dāng)出現(xiàn)了不可思議異常檢驗結(jié)果時，或與臨床不符合時，應(yīng)考慮是否有藥物引起干擾。例如，高濃度維生素C，可使乳酸脫氫酶活性減低、尿干化學(xué)膽紅素試驗和尿糖試驗假陰性，而使班氏尿糖測定假陽性。口服避孕藥可影響許多試驗的測定，也應(yīng)特別注意。因此，對短期效應(yīng)的生理因素進(jìn)行有效的預(yù)控，是保證檢驗質(zhì)量至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。（３）藥物因素：口服方式，藥效作用慢而持久；注射或吸入方式，二、臨床檢驗基礎(chǔ)的應(yīng)用目的臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件1．為疾病診斷和鑒別診斷提供實驗室篩檢或確診的客觀依據(jù)如將血液分析儀和顯微鏡檢查有機(jī)結(jié)合，可提供全血細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量（形態(tài)）眾多的參數(shù)和紅細(xì)胞、血小板、白細(xì)胞異常的最基本的實驗診斷信息。例如，白細(xì)胞（中性粒細(xì)胞）數(shù)量增高和血沉增高，支持急性心肌梗死的診斷，可與心絞痛鑒別；顯微鏡發(fā)現(xiàn)病原體，是確診感染性疾病的依據(jù)。1．為疾病診斷和鑒別診斷提供實驗室篩檢或確診的客觀依據(jù)如將血2．為疾病療效監(jiān)測和預(yù)后判斷提供動態(tài)變化依據(jù)例如，尿液蛋白質(zhì)檢測對于腎臟疾病患者的病情估計、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)對于進(jìn)行化學(xué)療法和放射療法的患者或貧血患者的骨髓功能判斷均具有可靠而實際的指導(dǎo)作用。2．為疾病療效監(jiān)測和預(yù)后判斷提供動態(tài)變化依據(jù)例如，尿液蛋白質(zhì)3．為預(yù)防疾病提供檢測依據(jù)例如，從標(biāo)本中檢出寄生蟲，可對感染人群進(jìn)行必要的治療和（或）隔離，防止疾病的傳播和傳染。3．為預(yù)防疾病提供檢測依據(jù)例如，從標(biāo)本中檢出寄生蟲，可對感染4．為科學(xué)研究提供醫(yī)學(xué)檢驗基本數(shù)據(jù)、基本檢驗方法和操作技能。4．為科學(xué)研究提供醫(yī)學(xué)檢驗基本數(shù)據(jù)、基本檢驗方法和操作技能。三．學(xué)好臨床基礎(chǔ)檢驗的基本要求（5）臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件1．掌握檢驗的基礎(chǔ)理論包括檢驗項目涉及的生理、病理基礎(chǔ)，特別是檢驗基本理論．1．掌握檢驗的基礎(chǔ)理論包括檢驗項目涉及的生理、病理基礎(chǔ)，特別2.掌握檢驗的實驗技能臨床檢驗基礎(chǔ)的許多操作是進(jìn)行其他臨床醫(yī)學(xué)檢驗的必要基礎(chǔ)，包括標(biāo)本采集、操作規(guī)范、質(zhì)量控制等。因此，特別強(qiáng)調(diào)學(xué)生在實驗課或在臨床實習(xí)中動手能力的訓(xùn)練。

2.掌握檢驗的實驗技能臨床檢驗基礎(chǔ)的許多操作是進(jìn)行其他臨床醫(yī)3.熟悉檢驗方法學(xué)的評價學(xué)會如何評估和選擇靈敏度高、特異性好的檢驗方法，有時是恰如其分、正確地比較和認(rèn)識手工檢驗方法和儀器檢驗方法的長處和短處。3.熟悉檢驗方法學(xué)的評價學(xué)會如何評估和選擇靈敏度高、特異性4.了解檢驗項目的參考值檢驗者應(yīng)經(jīng)常記憶最常用的檢驗項目參考值，以便結(jié)合臨床，對檢驗結(jié)果進(jìn)行有效的分析?，F(xiàn)已用“參考值”代替過去常用的“正常值”。這是因為檢驗項目的測定結(jié)果，只能來自部分地區(qū)、部分健康人群的相對統(tǒng)計。再者，即使在選定的人群中，檢驗結(jié)果被納入?yún)⒖挤秶囊仓徽急粰z人群數(shù)的95%，還有5%人群末被統(tǒng)計在內(nèi)。由于對每個患者發(fā)病前的基礎(chǔ)檢驗值的情況了解甚少，所以僅憑一次出現(xiàn)“低于”或“高于”（特別是略低于或略高于）參考值范圍的結(jié)果，并不能肯定為異常，通常至少應(yīng)重復(fù)2次以上檢驗、并出現(xiàn)相同或相近結(jié)果時，才可認(rèn)為檢驗結(jié)果可靠有效。4.了解檢驗項目的參考值檢驗者應(yīng)經(jīng)常記憶最常用的檢驗項目參考5.熟悉檢驗項目的臨床意義檢驗人員應(yīng)用循證檢驗醫(yī)學(xué)新思維指導(dǎo)臨床檢驗，不斷追求和采納已經(jīng)科學(xué)評價和證明了的、具有當(dāng)時最佳臨床價值的“金標(biāo)準(zhǔn)”檢驗項目和最佳檢驗方法，為臨床提供有效的檢驗結(jié)果，要主動與臨床保持聯(lián)系，共同分析異常檢驗結(jié)果的原因。必須認(rèn)識到，由于醫(yī)學(xué)檢驗在時間上和空間上存在一定的局限性，因此，對任何檢驗結(jié)果均需慎重分析，才能作出符合實際的合理解釋。5.熟悉檢驗項目的臨床意義檢驗人員應(yīng)用循證檢驗醫(yī)學(xué)新思維指導(dǎo)第一章血液標(biāo)本采集和血涂片制備臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件第一節(jié)血液標(biāo)本采集和抗凝劑選擇

血標(biāo)本分為全血、血漿和血清等。全血：由血細(xì)胞和血漿組成，主要用于臨床血液學(xué)檢查，如血細(xì)胞計數(shù)、分類和形態(tài)學(xué)檢查等。全血標(biāo)本的化學(xué)物質(zhì)檢查易受血細(xì)胞量增減的影響，現(xiàn)在的臨床化學(xué)檢查已較少使用全血標(biāo)本。血漿：為全血除去血細(xì)胞的部分，用于血漿生理性和病理性化學(xué)成分的測定，適合臨床生化檢查，特別是內(nèi)分泌激素測定；血漿除鈣離子外，含有其他全部凝血因子，適合血栓和止血的檢查。細(xì)胞內(nèi)、外各種溶質(zhì)成分和含量有差別。疾病時，血細(xì)胞內(nèi)成分變化較小，但血漿中成分變化可很大。血清：是離體后的血液自然凝固后析出的液體部分，除纖維蛋白原等凝學(xué)因子在凝血時消耗外，其他成分與血漿基本相同，更適用于多數(shù)臨床化學(xué)和臨床免疫學(xué)檢查。在少數(shù)項目檢查，血漿和血清的測定也有些差別。第一節(jié)血液標(biāo)本采集和抗凝劑選擇

血標(biāo)本一．采血方法

血標(biāo)本的正確采集是獲得準(zhǔn)確、可靠實驗結(jié)果的關(guān)鍵。在標(biāo)本采集前，應(yīng)仔細(xì)考慮實驗的需要，決定采血方法、所需血量及選用合適的抗凝劑。血液標(biāo)本的采集分為皮膚采血法、靜脈采血法和動脈采血法。不同的采血法無論細(xì)胞成分或化學(xué)組成，都存在不同程度的差異，因此在判斷和比較結(jié)果時必須予以考慮。所有的采血技術(shù)均要求保持血液標(biāo)本的完整性。動脈血成分在全身幾乎相同；而靜脈血，由于組織或器官的不同，其在不同部位的成分也不同；動脈血含氧量明顯高于靜脈血。一．采血方法

血標(biāo)本的（一）靜脈采血法

當(dāng)所需血量較多或采用全自動血液分析儀測定時，通常使用靜脈采血法（venipunctureforbloodcollection）。位于體表的淺靜脈幾乎均可作為采血部位，通常采用肘部靜脈；如肘部靜脈不明顯時，可改用手背靜脈或內(nèi)踝靜脈，必要時頸外靜脈采血可用于小兒，但有危險性，以少用為宜。根據(jù)采血量多少可選用不同型號注射器，配備相應(yīng)的針頭。某些特殊檢查，為避免血小板激活，要使用塑料注射器和硅化處理后的試管或塑料試管。注射器和容器必須干燥，抽血不宜過快，以免產(chǎn)生大量泡沫或溶血；采血后應(yīng)先拔針頭，然后將血液徐徐注入標(biāo)本容器，否則易于溶血。采血前應(yīng)向患者作適當(dāng)解釋，以消除疑慮和恐懼。如遇患者采血后發(fā)生暈厥，可讓其平臥，通常休息片刻即可恢復(fù)。必要時可嗅芳香氨酊，針刺或指掐人中、合谷等穴位。（一）靜脈采血法

當(dāng)所需血量較多或（二）皮膚采血法

皮膚采血法（skinpunctureforbloodcollection）,曾長期被稱為毛細(xì)血管采血法，所采之血實質(zhì)是微動脈、微靜脈和毛細(xì)血管的混合血，含有細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液。主要用于需血微量的檢查或一般常規(guī)檢查。多選擇手指或耳垂采血部位采血。耳垂采血痛感較輕，操作方便，但血循環(huán)較差，受氣溫影響較大，檢驗結(jié)果不夠恒定。世界衛(wèi)生組織（worldhealthorganization,WHO）推薦取左手無名指指端內(nèi)側(cè)血液做血液一般檢驗。嬰幼兒手指太小可用大拇趾或足跟采血。嚴(yán)重?zé)齻颊?，?yīng)選擇皮膚完整處采血，采血器以三棱針或?qū)Ｓ谩安裳槨睘楹茫貏e是后者。為避免交叉感染，應(yīng)嚴(yán)格實行一人一針制。（二）皮膚采血法

皮膚采（三）真空采血法

真空采血法（vacuumtubeforbloodcollection）,又稱為負(fù)壓采血法。國內(nèi)外已生產(chǎn)專供醫(yī)學(xué)檢驗使用的真空采血裝置，有套筒式和頭皮靜脈式兩種，后者還設(shè)計備有軟橡皮套管式止血裝置，穿刺回血后，即可將另一端的硬插管插入真空定量硅化的采血試管中，血液足量后，拔出硬插管即止血，當(dāng)插另一真空定量試管時又可采血，整個采血過程無血液外溢和污染。血標(biāo)本轉(zhuǎn)運方便，特別適用于病房和野外流動采血；能避免對醫(yī)護(hù)人員的感染和患者血標(biāo)本間的交叉感染。封閉式采血的血樣無需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少了溶血現(xiàn)象，能有效保護(hù)血液有形成分，保持待驗血標(biāo)本原始性狀的完整性，使檢驗結(jié)果更近真實，為臨床診斷提供可靠依據(jù)。非封閉式采血，血標(biāo)本暴露于空氣中，待驗血標(biāo)本易受空氣中塵埃、微生物和二氧化碳等異物的污染。各種真空定量儲存抗凝試管，根據(jù)需要標(biāo)有不同的色碼備用，適于不同的檢驗項目（表1-1）。但真空采血管價格較高，有待進(jìn)一步降低成本。

（三）真空采血法

真空采血

真空采血容器色澤及應(yīng)用范圍

顏色抗凝劑應(yīng)用范圍灰草酸鹽、氟化鈉全血、血漿，抑制糖原分解的酶黃消毒容器綠肝素全血、血漿紅血清藍(lán)枸櫞酸鹽全血、血漿，凝血一般檢查紫乙二胺四乙酸鹽全血、血漿

鉀鹽用于血細(xì)胞、血小板和血液學(xué)檢查真空采血容器色澤及應(yīng)用范圍

顏色

血液學(xué)檢查

[方法學(xué)評價]血液一般檢查過去常用皮膚采血，其主要缺點是易于溶血、凝血和可能混入組織液。為了采血，局部皮膚揉擦對多數(shù)的檢查項目都會有一定的影響；且采血針刺深度不一，個體之間皮膚厚度不同，難免有組織液混入而影響檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。皮膚采血檢查結(jié)果重復(fù)性差、易發(fā)生凝塊，現(xiàn)在多已該用靜脈采血。開放式采血由于操作環(huán)節(jié)多、難于規(guī)范統(tǒng)一，在移液及丟棄注射器時可能造成環(huán)境污染。封閉式采血法操作規(guī)范，從靜脈穿刺到血標(biāo)本轉(zhuǎn)運，整個過程血標(biāo)本皆不與外界接觸。既有利于標(biāo)本的收集運送和保存，也有利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的交叉感染和環(huán)境保護(hù)。[方法學(xué)評價]血液一般檢查過去常用皮膚采血，其主要缺點是易于[質(zhì)量控制]血液標(biāo)本的采集是分析前質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)。很多因素會影響到血液標(biāo)本檢測。１.患者患者的活動情況和精神狀態(tài)、藥物、年齡、性別、種族、標(biāo)本采集的時間以及是否吸煙等都會明顯影響檢測結(jié)果。例如，正常人一日之間，白細(xì)胞數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)、血小板數(shù)等均有一定的波動。[質(zhì)量控制]血液標(biāo)本的采集是分析前質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)。很多因２.采血血標(biāo)本采集應(yīng)規(guī)范操作，以減少誤差。在采血前，應(yīng)使患者盡量減少運動以保持平靜；住院患者應(yīng)在早晨臥床時取血。冬天，患者從室外進(jìn)入室內(nèi)，應(yīng)等其暖和后再采血。①皮膚采血：應(yīng)盡量避開有炎癥、化膿、凍傷等皮膚損害部位處采血。皮膚出汗時，應(yīng)先用干棉球擦干，以免稀釋血液。采血時，不要擠壓皮膚，血液應(yīng)自然流出。②靜脈采血：止血帶壓迫時間宜小于1min，若止血帶結(jié)扎超過2min，大靜脈血流受阻而使毛細(xì)血管內(nèi)壓上升，可有血管內(nèi)液與組織液交流，能使相對分子質(zhì)量小于5000的物質(zhì)逸入組織液；隨著壓迫時間的延長，局部組織發(fā)生缺氧而引起血液成分的變化漸大，檢查結(jié)果出現(xiàn)不應(yīng)有的增高或減低。２.采血血標(biāo)本采集應(yīng)規(guī)范操作，以減少誤差。在采血前，應(yīng)使患者３.溶血血細(xì)胞內(nèi)、外各種成分有梯度差，有的成分相差數(shù)十倍，故在采集、轉(zhuǎn)移、保管和分離血細(xì)胞時應(yīng)盡量避免溶血。發(fā)生溶血的主要原因有容器不潔、接觸水、強(qiáng)力振蕩和分離血細(xì)胞時操作不慎等。溶血標(biāo)本不僅紅細(xì)胞計數(shù)、血細(xì)胞比容降低；而且能使血細(xì)胞內(nèi)、外成分混合，血漿、血清的化學(xué)組成產(chǎn)生變化，影響鉀、鎂、轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素等多項指標(biāo)的測定，使檢查結(jié)果增高或減低，不能反映原始標(biāo)本的實際含量。３.溶血血細(xì)胞內(nèi)、外各種成分有梯度差，有的成分相差數(shù)十倍，故４.血標(biāo)本處理血液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，并盡快進(jìn)行檢查。血液標(biāo)本的保存條件非常重要，不適當(dāng)?shù)谋４姝h(huán)境直接影響實驗結(jié)果。血漿在4℃保存24h后，某些凝血因子活性僅為采血后即時活性的5%（減少95%）。供血液分析儀進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)的血液在室溫下保存，低溫（4℃）保存可使血小板計數(shù)結(jié)果減低。因此，應(yīng)根據(jù)實驗項目確定最佳的保存條件。４.血標(biāo)本處理血液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，并盡快進(jìn)行檢查。血液５.實驗結(jié)果分析分析檢驗結(jié)果時，應(yīng)特別考慮藥物及飲食因素對檢驗結(jié)果的影響。此外，血液標(biāo)本的分析應(yīng)密切結(jié)合臨床，例如，患者有嚴(yán)重腹瀉或嘔吐時，紅細(xì)胞計數(shù)可因脫水而增高。５.實驗結(jié)果分析分析檢驗結(jié)果時，應(yīng)特別考慮藥物及飲食因素對檢二、抗凝劑選擇

使用全血和血漿檢查，通常采集靜脈血，需要使用抗凝劑。所謂抗凝，是用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固。這種能夠阻止血液凝固的物質(zhì)，稱為抗凝劑或抗凝物質(zhì)。檢查的項目不同，所使用的抗凝劑也不同。實驗室常用的抗凝劑和使用方法如下。

二、抗凝劑選擇

使用全血和血漿檢查，通常采集靜脈血，需要使用乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid,EDTA）鹽常用其鈉鹽（EDTA-Na2-H2O）或鉀鹽（EDTA-K2-2H2O），能與血液中鈣離子結(jié)合成螯合物，而使CA2+失去凝血作用，從而阻止血液凝固。Na2C10H14O8N2+Ca+→CaC10H12O8N2+2Na++2H+EDTA鹽對血細(xì)胞形態(tài)和血小板計數(shù)影響很小，適用于多項血液學(xué)檢查，尤其是血小板計數(shù)，但鈉鹽溶解度明顯低于鉀鹽，有時影響抗凝效果。EDTA-K2特別適用于全血細(xì)胞分析及血細(xì)胞比容測定，室溫下6h，紅細(xì)胞體積不變。根據(jù)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（InternationalCommitteeforStandardizationinHematology,ICSH）1993年文件建議，血細(xì)胞計數(shù)用EDTA-K2作抗凝劑，用量為EDTA-K2-2H2O1.5-2.2mg/ml血液。EDTA影響血小板聚集，不適合于作凝血象檢查和血小板功能實驗。乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraac2.草酸鹽（sodiumoxalate）常用的有草酸鹽、草酸鉀、草酸銨，他們?nèi)芙夂蠼怆x的草酸根與標(biāo)本中的鈣離子形成草酸鈣沉淀，使ca2+失去凝血功能。Na2C2O4+CaC2O4↓+2Na+草酸鹽抗凝的優(yōu)點是溶解度好、價廉。2mg草酸鹽可抗凝1ml血液。草酸鈉通常用0.1mol/l濃度，與血液按1；9比例使用，過去主要用于凝血象檢查。實踐發(fā)現(xiàn)，草酸鹽對凝血V因子保護(hù)功能差，影響凝血酶原時間測定，另外由于草酸鹽與鈣結(jié)合后形成的沉淀物影響自動凝血儀的使用，因此，多數(shù)認(rèn)為，凝血象檢查選用枸櫞酸鈉為抗凝劑更為適宜。高濃度鉀離子或鈉離子易使血細(xì)胞脫水皺縮，而草酸胺則可使血細(xì)胞膨脹，故測定血細(xì)胞比容時用草酸胺和草酸鉀或草酸鈉兩者適當(dāng)比例混合的抗凝劑，恰好不影響紅細(xì)胞的形態(tài)和體積。若用草酸鉀或草酸鈉作抗凝劑，與肝素為抗凝劑測定的血細(xì)胞比容比較，測定值可降低8%-13%，此時的血漿量也相應(yīng)增加；用它測定血漿中化學(xué)成分，結(jié)果可低5%左右。標(biāo)本中如加入高濃度的草酸鹽抗凝劑，可發(fā)生溶血和改變血液PH，干擾血漿中的鉀、鈉和氯測定，還能抑制有些酶的活性。2.草酸鹽（sodiumoxalate）常用的有草酸鹽、草3．肝素（heparin）肝素是生理性抗凝劑，廣泛存在于肺、肝、脾等幾乎所有組織和血管周圍肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞的顆粒中。它是一種含硫酸基團(tuán)的粘多糖，相對分子質(zhì)量15000，帶有較多負(fù)電荷?？鼓龣C(jī)制較為復(fù)雜，主要是加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ（antithrombinⅢ，AT-Ⅲ）滅活絲氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。每毫升血液抗凝需要肝素（15±2.5）IU，所用制劑多為肝素的鈉鹽或鉀鹽。肝素具有抗凝力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血等優(yōu)點。除有些因素會干擾凝血機(jī)制檢查項目外，絕大多數(shù)的檢查都可用肝素作為抗凝劑，它是紅細(xì)胞滲透脆性試驗理想的抗凝劑。盡管肝素可以保持紅細(xì)胞的自然形態(tài)，但由于其?？梢鸢准?xì)胞聚集，并使血涂片在羅氏染色（Romanowsky’sstaining）時產(chǎn)生藍(lán)色背景，因此肝素抗凝血不適合血液學(xué)一般檢查。3．肝素（heparin）肝素是生理性抗凝劑，廣泛存在于肺、4．枸櫞酸鹽主要為枸櫞酸三鈉（trisodiumcitrate）,凝血試驗時枸櫞酸鹽能與血液中的鈣離子結(jié)合形成螯合物，從而阻止血液凝固。2Na3C6H5O7+2Ca2+→2CaC6H5O7-+6Na+枸櫞酸鈉與血液的比例為1；9。枸櫞酸鹽在血中的溶解度低，抗凝力不如前幾種抗凝劑。多用于臨床血液學(xué)檢查，一般用于紅細(xì)胞沉降率和凝血功能測定。因其毒性小，也是輸血保養(yǎng)液的成分之一。4．枸櫞酸鹽主要為枸櫞酸三鈉（trisodiumci第二節(jié).血液涂片制備和細(xì)胞染色

血液涂片和染色的好壞直接關(guān)系到檢驗的結(jié)果，必須以認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度注意操作過程中的每一個環(huán)節(jié)。第二節(jié).血液涂片制備和細(xì)胞染色

血液涂片和染色的好壞一.血液涂片制備血液涂片制備是血液學(xué)檢查重要的基本技術(shù)之一。一張良好的血片，厚薄要適宜，頭體尾要明顯，細(xì)胞分布要均勻，血膜邊緣要整齊，并留有一定的空隙。制備涂片時，血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快則血膜愈厚，反之血涂片愈薄。血涂片太薄，50%的白細(xì)胞集中于邊緣或尾部，血涂片過厚、細(xì)胞重疊縮小，均不利于白細(xì)胞分類計數(shù)。引起血涂片分布不均的主要原因有：推片邊緣不整齊，用力不均勻，載片不清潔。一.血液涂片制備二血液細(xì)胞染色

瑞氏染色法為了觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識別各種細(xì)胞及其異常變化，血涂片必須進(jìn)行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變而來，目前常用瑞士染色法（Wright’sstain）.二血液細(xì)胞染色

瑞氏染色法1.瑞士染料是由酸性染料伊紅（eosin,E-）和堿性染料亞甲藍(lán)（methyleneblue,M+）組成的復(fù)合染料。亞甲藍(lán)（又名美藍(lán)）為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)。美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料（即天青），市售美藍(lán)中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽。將適量的伊紅、美藍(lán)溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美藍(lán)和伊紅ME，使其解離為M+和E-后兩者可以選擇性的吸附于血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而著色；二是具有很強(qiáng)的脫水作用，可固定細(xì)胞的形態(tài)，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凝固時，蛋白質(zhì)被沉淀為顆粒狀或者網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高對染料的吸附作用，增強(qiáng)染色效果．1.瑞士染料是由酸性染料伊紅（eosin,E-）和堿性染料亞2.染色原理是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程，此過程既有物理吸附作用又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。因此，染色后，在同一血片上，可以看到不同的色彩，例如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色或藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)，與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫紅色，稱為中性物質(zhì)。2.染色原理是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程，此過程既3.PH值的影響細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液pH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅；在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易于美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對氫離子濃度十分敏感。染色所用玻片必須清潔，無酸堿污染。配制瑞氏染液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染液必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致細(xì)胞染色反映呈色異常，影響形態(tài)識別，甚至造成錯誤。3.PH值的影響細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解

新鮮配制的染料偏堿，須在室溫或是37℃下貯存一定時間，待染料成熟，主要是讓美藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后才能使用，貯存時間愈久，染色效果愈好。DeamGilliand等采用吸光度比值（ratioofabsorption,rA）作為瑞氏染液的質(zhì)量規(guī)格。rA測定方法如下：取瑞氏染液15-25微升（視染液濃度而定）加甲醇10ml稀釋，混勻后以甲醇為空白管，分別以波長650nm和252nm測吸光度（rA=A650/A525）。因為美藍(lán)吸收峰波長為650nm，伊紅吸收峰波長為525nm;天青B吸收峰也為650nm，但吸光度A約為美藍(lán)的一半。所以，新配制的染料rA也相應(yīng)下降。rA下降到1.3±0.1時即可使用。瑞氏染液貯存過程中，必須加塞，以防止甲醇揮發(fā)和被氧化成甲酸。有人主張在配方中加入甘油30ml，防止甲醇揮發(fā)，可使細(xì)胞染色清晰。甲醇必須純凈，如甲醇中丙酮含量過多，則染色偏酸，使白細(xì)胞著色不良。新鮮配制的染料偏堿，須在室溫或是37℃下貯存一定時間，待染（二）吉姆薩染色法

吉姆薩染液由天青、伊紅組成。吉姆薩染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同，但對細(xì)胞核和寄生蟲（如瘧原蟲等）著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰，而胞質(zhì)和中性顆粒則染色比較差。為兼顧兩者所長，可用復(fù)合染色法，即在瑞氏染色過程中，以稀釋的吉姆薩染液代替瑞氏染色緩沖液，或先用瑞氏染色法染色后，再用稀釋吉姆薩染液復(fù)染。[方法學(xué)評價]血涂片的顯微鏡檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，良好的血片和染色是血液形態(tài)學(xué)檢查的前提。（二）吉姆薩染色法

吉姆薩染液由天青、伊紅組成。吉姆薩染色１.血涂片的制備手工推片法用血量少、操作簡單，是應(yīng)用最廣泛的方法?？鼓难翰?biāo)本離心后取其灰白層涂片，可提高檢出陽性率；但某些抗凝劑可使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，分類時應(yīng)注意鑒別。此外，還可根據(jù)不同需要（如瘧原蟲、微絲蚴檢查等）采用厚涂片法，旋轉(zhuǎn)器涂片法，可獲得細(xì)胞分布均勻、形態(tài)完好的血片，但尚未普遍推廣。１.血涂片的制備手工推片法用血量少、操作簡單，是應(yīng)用最廣泛的２.血液細(xì)胞染色瑞氏染色法是血細(xì)胞分析最經(jīng)典和常用的染色法，尤其對于細(xì)胞質(zhì)成分及中性顆粒等的染色，可獲得很好的染色效果，但對細(xì)胞核的染色不如吉姆薩染液。故采用瑞氏--吉姆薩復(fù)合染液可取長補(bǔ)短，使血細(xì)胞的胞質(zhì)、顆粒、胞核等均獲得滿意的染色效果。２.血液細(xì)胞染色瑞氏染色法是血細(xì)胞分析最經(jīng)典和常用的染色１.血涂片的制備手工推片法用血量少、操作簡單，是應(yīng)用最廣泛的方法?？鼓难翰?biāo)本離心后取其灰白層涂片，可提高檢出陽性率；但某些抗凝劑可使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，分類時應(yīng)注意鑒別。此外，還可根據(jù)不同需要（如瘧原蟲、微絲蚴檢查等）采用厚涂片法，旋轉(zhuǎn)器涂片法，可獲得細(xì)胞分布均勻、形態(tài)完好的血片，但尚未普遍推廣。２.血液細(xì)胞染色瑞氏染色法是血細(xì)胞分析最經(jīng)典和常用的染色法，尤其對于細(xì)胞質(zhì)成分及中性顆粒等的染色，可獲得很好的染色效果，但對細(xì)胞核的染色不如吉姆薩染液。故采用瑞氏--吉姆薩復(fù)合染液可取長補(bǔ)短，使血細(xì)胞的胞質(zhì)、顆粒、胞核等均獲得滿意的染色效果。１.血涂片的制備手工推片法用血量少、操作簡單，是應(yīng)用最廣泛的第二章、血液一般檢驗

血液是血細(xì)胞和血漿組成的紅色粘稠混懸液。血細(xì)胞包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。血漿是復(fù)雜的膠體溶液，組分非常恒定。血漿中水分占91%-92%；固體成分占8%-9%，包括各種蛋白（抗體、酶、凝血因子等生物活性物質(zhì)）、無機(jī)鹽、激素、維生素和代謝產(chǎn)物。正常成人血量占體重的7%-9%，即60-80ml/kg體重。成人平均血量5l左右，其中血漿占55%，血細(xì)胞45%。血液的pH值為7.35-7.45，比密為1.050-1.060，相對粘度為4-5，血漿滲透壓為290-310mOsm/kgH2O，血液離體后數(shù)分鐘內(nèi)即自行凝固。第二章、血液一般檢驗

血液是血細(xì)胞和血漿血液通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各組織器官密切聯(lián)系，參與機(jī)體呼吸、運輸、防御、調(diào)節(jié)體液滲透壓和酸堿平衡等各項生理活動，維持機(jī)體正常新陳代謝和內(nèi)外環(huán)境的平衡。在病理情況下，造血系統(tǒng)的各種疾患，除直接累及血液外，常會影響全身組織器官，例如貧血患者，由于血液攜帶氧功能減低，可使全身各臟器缺氧，導(dǎo)致循環(huán)、消化、神經(jīng)、呼吸、泌尿等系統(tǒng)出現(xiàn)相應(yīng)的臨床癥狀和體征；血液通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各組織器官密切聯(lián)系，參與機(jī)體呼吸、運輸反之各組織器官的病變也可直接或間接地引起血液發(fā)生相應(yīng)的變化，例如全身各組織的感染性炎癥可引起血液內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù)的改變。因此，血液檢驗不僅是診斷各種血液病的主要依據(jù)，對其他系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別也可提供許多信息，是臨床醫(yī)學(xué)檢驗中最常用、最重要的基本內(nèi)容。反之各組織器官的病變也可直接或間接地引起血液發(fā)生相應(yīng)的變化，第一節(jié)：

紅細(xì)胞檢查

紅細(xì)胞（redbloodcell;erythrocyte）是血液中數(shù)量最多的有形成分。紅細(xì)胞起源于骨髓造血干細(xì)胞（hematopoieticstemcell）,在紅細(xì)胞生成素（erythropoietin,Epo）作用下經(jīng)紅系祖細(xì)胞階段，分化為原紅細(xì)胞，經(jīng)過數(shù)次有絲分裂依次發(fā)育為早幼、中幼和晚幼紅細(xì)胞。晚幼紅細(xì)胞已喪失分裂能力，它通過脫核而成為網(wǎng)織紅細(xì)胞。這一增殖、分化、成熟的過程在骨髓中進(jìn)行約需72h。網(wǎng)織紅細(xì)胞再經(jīng)約48h即完全成熟。紅細(xì)胞釋放入血后，平均壽命約120d，衰老紅細(xì)胞主要在脾破壞，分解為鐵、珠蛋白和膽紅素。紅細(xì)胞逐漸衰老過程中細(xì)胞內(nèi)酶的活性降低，紅細(xì)胞膜生理功能所需要的能量供應(yīng)減少，影響紅細(xì)胞膜的功能；紅細(xì)胞膜中的脂質(zhì)成分也發(fā)生變化，這些都可使紅細(xì)胞膜的變形性降低（正常紅細(xì)胞變形性很強(qiáng)，能通過直徑比它小得多的毛細(xì)血管），膜的脆性增加，這樣的紅細(xì)胞就容易被脾臟“阻滯”、破壞和吞噬細(xì)胞所吞噬；另一方面，衰老紅細(xì)胞膜的表面所帶的負(fù)電荷減少，使紅細(xì)胞與紅細(xì)胞之間的排斥效應(yīng)降低，紅細(xì)胞易于聚集，使體積增大，亦容易被脾臟“阻滯”而破壞。第一節(jié)：紅細(xì)胞檢查

紅細(xì)胞（redbloodcell紅細(xì)胞膜的正常功能主要有紅細(xì)胞的變形性能、調(diào)節(jié)紅細(xì)胞內(nèi)離子平衡和維持細(xì)胞容積、穩(wěn)定Ca2+的內(nèi)環(huán)境等。...紅細(xì)胞膜的正常功能主要有紅細(xì)胞的變形性能、調(diào)節(jié)紅細(xì)胞內(nèi)離子平紅細(xì)胞的主要生理功能是通過胞內(nèi)的血紅蛋白來實現(xiàn)的。紅細(xì)胞有交換和攜帶氣體的功能。紅細(xì)胞經(jīng)過肺部時，肺泡中的氧經(jīng)過肺泡壁和毛細(xì)血管壁進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，與紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白結(jié)合，隨血液被帶到各組織，此時血紅蛋白在一定的環(huán)境條件下與氧氣分離，氧氣進(jìn)入組織內(nèi)供其利用；同時組織代謝后所產(chǎn)生的二氧化碳與血紅蛋白結(jié)合經(jīng)血流帶到肺部，經(jīng)肺泡排除體外，紅細(xì)胞再攜帶氧向組織輸送，如此往復(fù)，使全身組織能及時、充分地得到代謝所需要的氧和排出體內(nèi)多余的二氧化碳。多種原因可造成紅細(xì)胞生成和破壞的平衡失調(diào)，結(jié)果一方面使紅細(xì)胞數(shù)量減少或增多，從而引起貧血或紅細(xì)胞增多癥，另一方面使紅細(xì)胞在質(zhì)量上發(fā)生改變。通過對紅細(xì)胞和血紅蛋白量的檢查，以及對紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)或生化改變的檢查，對診斷和鑒別某些疾病具有重要臨床意義。紅細(xì)胞的主要生理功能是通過胞內(nèi)的血紅蛋白來實現(xiàn)的。紅細(xì)胞有交一紅細(xì)胞計數(shù)

紅細(xì)胞計數(shù)（redbloodcellcount,RBC）是常用的血液基本檢查項目。

一紅細(xì)胞計數(shù)

紅細(xì)胞計數(shù)（red[檢測原理]

１.手工顯微鏡法用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，充入血細(xì)胞計數(shù)池，在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞，經(jīng)換算求出每升血液中紅細(xì)胞數(shù)量。２.血液分析儀法利用電阻抗和（或）光散射原理。[檢測原理]

１.手工顯微鏡法用等滲稀釋液將血液稀釋一[方法學(xué)評價]

１.手工顯微鏡法是傳統(tǒng)的紅細(xì)胞計數(shù)法，不需要特殊設(shè)備，但操作復(fù)雜、費時，現(xiàn)雖已不常用，但仍作為：①血液分析儀的校正。②與白細(xì)胞減少或血小板嚴(yán)重減少時的對照核實。③血小板計數(shù)受小紅細(xì)胞干擾時的校正。２.血液分析儀法儀器法已成為目前細(xì)胞計數(shù)的主要方法，通常采用電阻抗原理。儀器法比手工顯微鏡法更精確，且操作簡便、快速，已廣泛應(yīng)用。電阻抗計數(shù)法的變異系數(shù)（coefficientofvariation,CV）為2%，而手工法大于11%。在正常情況下，紅細(xì)胞和白細(xì)胞的數(shù)量相差懸殊，白細(xì)胞的數(shù)量對紅細(xì)胞計數(shù)影響較?。坏?dāng)某些疾病時，白細(xì)胞數(shù)量明顯增多，紅細(xì)胞計數(shù)和體積測定結(jié)果均會受到干擾而產(chǎn)生誤差。[方法學(xué)評價]

１.手工顯微鏡法是傳統(tǒng)的紅細(xì)胞計數(shù)法，不[質(zhì)量控制]

1.手工法經(jīng)過采血、稀釋、充池、計數(shù)的環(huán)節(jié)，誤差來源包括；⑴標(biāo)本：血液如發(fā)生凝固可使細(xì)胞減少或計數(shù)不均，故應(yīng)充分混勻血液和抗凝劑，且在充液前再次充分混勻。⑵操作：稀釋、充池、計數(shù)等應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)范操作。⑶器材：應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)的微量吸管、計數(shù)板。⑷固有誤差（計數(shù)域誤差）：利用下列公式可求出細(xì)胞計數(shù)95%的可信限及變異系數(shù)。細(xì)胞計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差：s=。。。。。12頁細(xì)胞計數(shù)的變異系數(shù)：。。。1295%的可信限=計數(shù)值+2Sn：表示計數(shù)區(qū)域內(nèi)所有細(xì)胞的總和計數(shù)值：采用國際單位制[質(zhì)量控制]

1.手工法經(jīng)過采血、稀釋、充池、計數(shù)的環(huán)2.儀器法使用儀器嚴(yán)格按照操作規(guī)程；定期進(jìn)行室內(nèi)和室間質(zhì)控。[參考值]成年：男性（4-5.5）×1012/L;女性（3.5-5.0）×1012/L；新生兒（6.0-7.0）×1012/L。2.儀器法使用儀器嚴(yán)格按照操作規(guī)程；定期進(jìn)行室內(nèi)和室間質(zhì)控。臨床意義]

[生理性變化１.年齡與性別的差異：初生兒，由于出生前以彌散方式從母體血液中獲得氧氣。通常處于生理性缺氧狀態(tài)，故紅細(xì)胞明顯增高，但在出生2周后就逐漸下降。小兒生長發(fā)育時鐵供應(yīng)相對不足亦可引起貧血。男性兒童在6—7歲時最低，隨著年齡增大而逐漸上升，到25—30歲時達(dá)高峰，30歲后隨著年齡增加而逐漸下降，直到60歲時尚未停止。在女性兒童也隨年齡增大逐漸增高，到13—15歲時達(dá)最高值，而后受到月經(jīng)、內(nèi)分泌等因素影響逐漸下降，到21—35歲維持最低水平后有逐漸增高與男性水平相近。男女兩性的紅細(xì)胞計數(shù)在15—40歲期間差別明顯，主要可能與在此期間，男性雄性激素水平較高，而睪酮有促進(jìn)紅細(xì)胞造血作用有關(guān)。臨床意義]

[生理性變化２.精神因素：感情沖動、興奮、恐懼、冷水刺激均可使腎上腺素增多，導(dǎo)致紅細(xì)胞暫時增多。３.劇烈體力運動和勞動：主要由于氧需要量增加，引起相對缺氧。一般成人在安靜時全身每分鐘消耗0.3-0.4L，肌肉運動時可增加到2—2.5L，最高可達(dá)到4—4.5L，此時由于紅細(xì)胞生成素生成增加而骨髓加速釋放紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞增多。２.精神因素：感情沖動、興奮、恐懼、冷水刺激均可使腎上腺素增４.氣壓降低：因缺氧刺激，紅細(xì)胞可代償性增生。高山地區(qū)居民和登山運動員紅細(xì)胞數(shù)均高于正常，此因大氣稀薄、氧分壓低，機(jī)體紅細(xì)胞生成素水平增高，引起骨髓產(chǎn)生更多的紅細(xì)胞所致。５.妊娠中、后期：為適應(yīng)胎盤循環(huán)的需要，通過神經(jīng)、體液的調(diào)節(jié)，孕婦的血漿容量明顯增加而引起血液稀釋；6個月—2歲的嬰幼兒由于生長發(fā)育迅速所致的造血原料相對不足；某些老年人造血功能明顯減退，均可導(dǎo)致紅細(xì)胞減少。４.氣壓降低：因缺氧刺激，紅細(xì)胞可代償性增生。高山地區(qū)居民和紅細(xì)胞計數(shù)值正常變異：新生兒較成人約增加35%，高海拔約增加14%。飲酒約減少5%，長期劇烈運動約減少15%，妊娠約減少16%，2個月嬰兒約減少30%。紅細(xì)胞計數(shù)值正常變異：新生兒較成人約增加35%，高海拔約增加病理性變化

紅細(xì)胞和血紅蛋白量減少：在臨床最常見于各種原因的貧血。由于各種病因?qū)е峦庵苎獑挝惑w積紅細(xì)胞減少，即為病理性貧血。貧血的診斷并不難，通過紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定或血細(xì)胞比容測定就可確定有無貧血和貧血的程度；貧血的原因診斷較為困難，一般應(yīng)結(jié)合臨床和進(jìn)一步的檢查進(jìn)行診斷。按病因，可將貧血分成紅細(xì)胞生成障礙、過度破壞和丟失（失血）3大類。病理性變化

紅細(xì)胞和血紅蛋白量減少：在臨床最常見１.急性、慢性紅細(xì)胞丟失過多：如各種原因的出血，見于消化性潰瘍、痔瘡、十二指腸鉤蟲病等。２.紅細(xì)胞壽命縮短：如各種原因的溶血，見于輸血不合溶血反應(yīng)、蠶豆病、遺傳性球形細(xì)胞增多癥等。１.急性、慢性紅細(xì)胞丟失過多：如各種原因的出血，見于消化性潰３.造血原料不足：如慢性失血者對鐵的重新利用率減少，鐵供應(yīng)或吸收不足。鐵是制造血紅蛋白的原料，原料不足使血紅蛋白合成量減少，也有鐵供應(yīng)并不減少，而是由于先天性的或后天獲得性的某種原因引起紅細(xì)胞內(nèi)酶的缺陷，而導(dǎo)致鐵不能被利用合成血紅蛋白，鐵堆積在細(xì)胞內(nèi)外，使發(fā)育中的細(xì)胞功能受障礙，紅細(xì)胞過早死亡而致貧血；紅細(xì)胞小、中心蒼白區(qū)擴(kuò)大等，但其血清鐵和貯存鐵卻增加；在幼稚紅細(xì)胞的周圍圍繞著鐵顆粒，此為鐵粒幼細(xì)胞貧血，有時可見于60歲以上的老年人，其原因不明。造血原料不足引起的貧血也見于某些藥物如異煙肼、硫唑嘌呤、酒精、鉛中毒，繼發(fā)于某些疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、白血病、甲狀腺功能亢進(jìn)、慢性腎功能不全等。３.造血原料不足：如慢性失血者對鐵的重新利用率減少，鐵供應(yīng)或４.骨髓造血功能減退：藥物如抗腫瘤藥物、磺胺類藥物、保泰松、有機(jī)砷、馬利蘭等，可抑制骨髓的造血功能；物理因素如X線60鈷、鐳等核素照射均可抑制骨髓。造血功能障礙亦可繼發(fā)于其他疾病，如慢性腎功能衰竭時，因有尿素、肌酐、胍類、酚、吲哚等物質(zhì)潴留可對骨髓和紅細(xì)胞有不良影響；原發(fā)性再生障礙性貧血是一種原因尚未完全了解的造血功能障礙，常有全血細(xì)胞減少。４.骨髓造血功能減退：藥物如抗腫瘤藥物、磺胺類藥物、保泰松、（2）紅細(xì)胞增多

１）.原發(fā)性紅細(xì)胞增多：見于真性紅細(xì)胞增多癥、良性家族性紅細(xì)胞增多癥等。真性紅細(xì)胞增多癥是一種原因不名的以紅系細(xì)胞異常增殖為主的疾病，紅細(xì)胞計數(shù)在（7-10）×1012/L，由于同時有中性粒細(xì)胞和血小板數(shù)目增多，故目前認(rèn)為本病為多能干細(xì)胞受累所致；常見于40—70歲年齡組；典型患者，不但周圍血液紅細(xì)胞明顯增多，且白細(xì)胞和血小板增高，有時伴慢性粒細(xì)胞性白血病。（2）紅細(xì)胞增多

２.繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥：常見于可以引起低氧血癥的疾?。喝?.心血管?。焊鞣N先天性心血管疾病如房室間隔缺損、法洛四聯(lián)癥。2.肺疾?。悍螝饽[、肺源性心臟病、肺纖維化和各種引起肺氣體交換面積減少的病因。3.異常血紅蛋白?。貉t蛋白由于攜氧能力降低而造成缺氧，使紅細(xì)胞生成增多。4.腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)（庫欣?。赡芘c皮質(zhì)激素刺激骨髓使紅細(xì)胞生成偏高有關(guān)。此外，引起紅細(xì)胞數(shù)增高的藥物有腎上腺素、糖皮質(zhì)激素、雄激素等。２.繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥：３.相對性紅細(xì)胞增多：由于血液水分的丟失，如嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、多汗、多尿、大面積燒傷、晚期消化道腫瘤而長期不能進(jìn)食等原因引起的血液濃縮，血液中有形成分相對增多，而并非是紅細(xì)胞生成真性增加，多為暫時性增多。３.相對性紅細(xì)胞增多：紅細(xì)胞計數(shù)醫(yī)學(xué)決定水平：1.高于6.8×1012/L，應(yīng)采取相應(yīng)的治療措施。2.低于3.5×1012/L為診斷貧血的界限，應(yīng)繼續(xù)尋找原因。3.低于1.5×1012/L應(yīng)考慮輸血。紅細(xì)胞計數(shù)醫(yī)學(xué)決定水平：1.高于6.8×1012/L，應(yīng)二、血紅蛋白測定

血紅蛋白是一種微紅色的膠體物質(zhì)，其相對分子質(zhì)量為64458。它是一種呼吸載體，每克血紅蛋白可攜帶氧1.34mL。成人紅細(xì)胞總量約有600g血紅蛋白，可攜氧800mL。研究發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞內(nèi)充滿小顆粒，最小的直徑為6.5nm，相當(dāng)于1個血紅蛋白分子的直徑，此種顆粒于近紅細(xì)胞膜處最多，越往細(xì)胞中央越少。這一分布與瑞氏染色血片上紅細(xì)胞的著色特點，即周邊深、中央淺所謂生理性中心淡染現(xiàn)象是完全一致的。二、血紅蛋白測定

血紅蛋白是一種微紅色的膠體物質(zhì)，其相對分子（１）血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)及成分

血紅蛋白是在人體有核紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)形成的一種含色素輔基的結(jié)合蛋白質(zhì)。色素部分是亞鐵血紅素，蛋白質(zhì)部分是由原卟啉和鐵原子組成的一種結(jié)合物，合成受δ-氨基-γ酮戊酸合成酶、血紅素本身和Fe2+調(diào)節(jié)。Fe2+位于卟啉環(huán)的中心，有6個配位鍵，其中4個與原卟啉分子中心的4個氮原子相聯(lián)，第5個配位鍵與珠蛋白的肽連F段第8個氨基酸-組氨酸的咪唑基相連，第6個配位為空位，能可逆性地與氧結(jié)合，完成運氧功能。組成Hb的多肽鏈分為α和β兩大類：1.α類連：α，ζ和θ鏈；2.非α鏈：、β、γ、δ、ε鏈。α鏈由141個氨基酸組成，β鏈由146個氨基酸組成。每個Hb分子由2條α類肽鏈和2條β類肽鏈組成，每條珠蛋白肽鏈含有1個亞鐵血紅素。在正常狀態(tài)，機(jī)體有99%Hb的鐵原子呈Fe2+狀態(tài)，稱為還原Hb，1%的Fe3+為高鐵血紅蛋白，只有亞鐵血紅蛋白，只有亞鐵狀態(tài)的Hb的鐵原子才能與氧結(jié)合，此時稱氧合血紅蛋白。（１）血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)及成分

血紅蛋白是在人體有核紅細(xì)胞及網(wǎng)（二）血紅蛋白的合成

血紅蛋白的合成受激素的調(diào)節(jié)。影響Hb合成的激素有2種：一種是紅細(xì)胞生成素，可促進(jìn)δ-氨基-γ酮戊酸的生成與鐵的利用，從而促進(jìn)血紅素和Hb的合成；二是雄激素，睪酮在肝臟內(nèi)由5-β氫睪酮還原酶轉(zhuǎn)變?yōu)?-β氫睪酮，它能促進(jìn)δ-氨基-γ酮戊酸合成酶的生成。雄激素還能促進(jìn)紅細(xì)胞生成素的生成，直接和間接促進(jìn)Hb的合成。當(dāng)血紅素合成過多時，血紅素自發(fā)氧化為高鐵血紅素，高鐵血紅素對δ-氨基-γ酮戊酸合成酶有直接抑制作用，并能阻止δ-氨基-γ酮戊酸合成酶生成，進(jìn)而減少血紅素的合成。

（二）血紅蛋白的合成

在人體不同生長時期，Hb種類與比例不同。在胚胎發(fā)育早期，大約于妊娠第5周，ζ與ε基因即表達(dá)于卵黃囊的成紅細(xì)胞中，形成了個體發(fā)育中第一個有功能的胚胎期血紅蛋白四聚體ζ2ε2，在妊娠第6周，成紅細(xì)胞開始由卵黃囊游移到肝臟，此時ζ表達(dá)水平顯著降低，α和γ基因開始表達(dá)，由這些肽鏈組成3種胚胎期血紅蛋白，HbGowerI ,HbGowerII,HbPortland和一種胎兒血紅蛋白HbF，到胚胎發(fā)育第8周，ζ和ε鏈逐漸消失，γ鏈合成達(dá)到高峰，而且開始有β鏈合成，即有成人血紅蛋白HbA產(chǎn)生。36周后β鏈合成迅速增加，γ鏈合成速率降低，出生后不久β和γ鏈合成大致等量，出生后3個月由于β鏈合成繼續(xù)增加，而γ鏈合成迅速降低而使HbA占絕對優(yōu)勢，逐步占95%以上。而HbF逐步下降到小于或等于1%。δ鏈開始合成的確切時間不很清楚，由于臍帶血中存在微量的δ鏈，說明它在胎兒時期已經(jīng)開始合成，出生后γα2δ2占Hb總量的2%--3%。臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件在人體不同生長期，Hb種類與比例不同。在胚胎發(fā)育早期，大約于妊娠第5周，ζ與ε基因即表達(dá)于卵黃囊的成紅細(xì)胞中，形成了個體發(fā)育中第一個有功能的胚胎期血紅蛋白四聚體ζ2ε2在妊娠第6周，成紅細(xì)胞開始由卵黃囊游移到肝臟，此時ζ表達(dá)水平顯著降低，α和γ基因開始表達(dá)，由這些肽鏈組成3中胚胎期血紅蛋白，HbGowerI ,HbGowerII,HbPortland和一種胎兒血紅蛋白HbF，到胚胎發(fā)育第8周，ζ和ε鏈逐漸消失，γ鏈合成達(dá)到高峰，而且開始有β鏈合成，即有成人血紅蛋白HbA產(chǎn)生。36周后β鏈合成迅速增加，γ鏈合成速率降低，出生后不久β和γ鏈合成大致等量，出生后3個月由于β鏈合成繼續(xù)增加，而γ鏈合成迅速降低而使HbA占絕對優(yōu)勢，逐步占95%以上。而HbF逐步下降到小于或等于1%。δ鏈開始合成的確切時間不很清楚，由于臍帶血中存在微量的δ鏈，說明它在胎兒時期已經(jīng)開始合成，出生后γα2δ2占Hb總量的2%--3%。在人體不同生長期，Hb種類與比例不同。在胚胎發(fā)育早期，大約于（三）血紅蛋白的代謝

正常人體內(nèi)的紅細(xì)胞不斷地衰老、破壞更新，血紅蛋白分子降解為珠蛋白和血紅素。血紅素中大部分鐵由單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞加工處理后，再重新回到循環(huán)血液中，與運鐵蛋白結(jié)合進(jìn)入鐵代謝庫。珠蛋白由一系列蛋白酶和肽酶作用分解為氨基酸組分（內(nèi)源性氨基酸），與外源性氨基酸混在一起，進(jìn)入氨基酸代謝，可再與合成蛋白質(zhì)和多肽或轉(zhuǎn)變成其他含氮物質(zhì)。（三）血紅蛋白的代謝

正常人體內(nèi)的紅細(xì)胞不斷地衰老、破壞更新[檢測原理]

血紅蛋白是一種色素蛋白，可以用比色法測定。血液中血紅蛋白以各種形式存在，包括氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白或其他衍生物。[檢測原理]

血紅蛋白是一種色素蛋白，可以用比色法測定。血液1.氰化高鐵血紅蛋白測定法(HiCN)血液中，除了硫化血紅蛋白外各種血紅蛋白均可被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，再和CN-結(jié)合生成穩(wěn)定的棕色復(fù)合物氰化高鐵血紅蛋白。氰化高鐵血紅蛋白在540nm處有一吸收波峰，用分光光度計測定該處的吸光度，再換算成每升血液中的血紅蛋白濃度，或制備標(biāo)準(zhǔn)曲線供查閱。2.其他測定法有疊氮高鐵血紅蛋白法、堿羥血紅蛋白法、沙利酸化血紅蛋白法等。1.氰化高鐵血紅蛋白測定法(HiCN)血液中，除了硫化血紅蛋[方法學(xué)評價]

自從1875年Gower設(shè)計了稀釋溶血液目測比色法以來，Hb測定方法大致分為4大類：1.根據(jù)Hb分子組成測定總Hb法（全血鐵法）；2.根據(jù)血液物理特性測定Hb（比重法、折射儀法）；3.根據(jù)Hb與O2可逆性結(jié)合的物性測定Hb（血氣分析儀法）4.根據(jù)Hb衍生物光譜特點定量測定Hb。其中沙利法簡單易行，得到長期廣泛應(yīng)用，但重復(fù)性差已被淘汰。為了統(tǒng)一Hb測定方法，1966年，國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦氰化高鐵血紅蛋白測定法作為Hb測定國際標(biāo)準(zhǔn)參考方法。[方法學(xué)評價]

自從1875年Gower設(shè)計了稀釋溶血液目測

氰化高鐵血紅蛋白測定法操作簡單、顯色快且結(jié)果穩(wěn)定可靠，可檢測除硫化血紅蛋白（SHB）外的各種血紅蛋白，但使用氰化高鐵血紅蛋白測定法時應(yīng)強(qiáng)調(diào)儀器、比色杯、試劑及操作的標(biāo)準(zhǔn)化。儀器的校正是測定的關(guān)鍵。在實際工作中，使用的分光光度計很難達(dá)到上述要求，往往采用氰化高鐵血紅蛋白參考液，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出K值來校正結(jié)果，故定期地檢查K值十分重要，氰化高鐵血紅蛋白測定法已在國內(nèi)普及，但并非理想的方法，其致命的弱點是試劑氰化鉀（KCN）有劇毒，使用、管理不當(dāng)可造成公害，此外，還存在高白細(xì)胞和高球蛋白血癥可致試劑混濁，以及HbCO轉(zhuǎn)化較慢等問題。

氰化高鐵血紅蛋白測定法操作簡單、顯色快且結(jié)果穩(wěn)定可靠，可檢實際工作中，多采用替代HiCN法的方法進(jìn)行Hb測定，再將其結(jié)果校正到HiCN法水平。國內(nèi)，多采用十二烷基硫酸鈉（SDS）血紅蛋白測定法，其原理是，除SHB外，血液中各種Hb均可與低濃度SDS作用，生成SDS-Hb棕紅色化合物。其吸收曲線波峰在538nm,波谷在500nm，肩峰在560nm。由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認(rèn)，因此不能用吸光度A直接計算Hb濃度。SDS可用HiCN法定值的抗凝血或溶血液，制備標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，間接計算血紅蛋白濃度。本法的優(yōu)點是操作簡單，呈色穩(wěn)定，準(zhǔn)確性和精確性符合要求，且無公害。在全國臨床檢驗方法學(xué)學(xué)術(shù)會議上，被推薦為次選方法。SDS本身質(zhì)量差異較大，且破壞白細(xì)胞，不適于同時用于有白細(xì)胞計數(shù)和Hb測定的血細(xì)胞分析儀上使用。

實際工作中，多采用替代HiCN法的方法進(jìn)行Hb測定，再將其結(jié)

疊氮高鐵血紅蛋白（HiN3）測定法具有與HiCN測定法相似的優(yōu)點，最大吸收峰在542nm，且峰值高度幾乎與HiCN者重合。測定時顯色快而穩(wěn)定，試劑毒性僅為HiCN者的1/7，但仍存在公害問題。Zander（1984）年提出堿羥血紅蛋白（AHD575）測定法，575nm為其檢出波長。該法試劑簡單，不含有毒劑，呈色穩(wěn)定，可用氯化血紅素作標(biāo)準(zhǔn)品，已被許多單位采用。但由于血液分析儀或血紅蛋白測定儀多采用540nm左右范圍濾光板，限制了此法在該類儀器的使用。沙利法為傳統(tǒng)的血紅蛋白測定法，雖然操作簡單但誤差比較大，已經(jīng)被列為縣以上醫(yī)院淘汰的實驗項目。疊氮高鐵血紅蛋白（HiN3）測定法具有與HiCN測定法相似

近年來，多參數(shù)血細(xì)胞分析儀的應(yīng)用，使Hb測定逐步以儀器法取代手工法，其優(yōu)點是操作簡單、快速，同時可以獲得多項紅細(xì)胞的參數(shù)，血液分析儀法測定血紅蛋白的原理與手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型號儀器使用的溶血劑不同，形成Hb的衍生物不同。某些溶血劑形成的衍生物穩(wěn)定性比較差，因此要嚴(yán)格控制溶血劑加入量以及溶血時間，特別是半自動血細(xì)胞分析儀應(yīng)嚴(yán)格控制實驗條件。有些溶血劑內(nèi)雖加入了KCN，但其衍生物并非是HiNC，儀器要經(jīng)過HiNC標(biāo)準(zhǔn)液校正后，才能進(jìn)行Hb測定。儀器法測定血紅蛋白精確度CV約為1%。近年來，多參數(shù)血細(xì)胞分析儀的應(yīng)用，使Hb測定逐步以儀器法取[質(zhì)量控制］１.血標(biāo)本異常血漿蛋白質(zhì)、高脂血癥、白細(xì)胞數(shù)超過30×109/L，脂滴等均可產(chǎn)生濁度，干擾Hb測定。２.方法HiNC是Hb測定的首選方法；采用血液分析儀可減少手工法諸多誤差。３.器材應(yīng)選用高精度的微量吸管、配套的比色杯；分光光度計需要定期校正。４.采血部位由于不同的采血部位取樣，其結(jié)果也有不同，靜脈血比毛細(xì)血管血的結(jié)果低10%--15%。５.結(jié)果分析引起測定值高低的常見誤差是稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，或因紅細(xì)胞溶解不當(dāng)引起標(biāo)本濁度增加，或血漿中脂質(zhì)或蛋白量增加。[質(zhì)量控制］[參考值]

成年：男性120-160g/L;女性：110-150g/L；2.新生兒：170-200g/L；3.老年：（70歲以上）：男性：94-122g/L；女性87-112g/L。

[參考值]

成年：男性120-160g/L;女性：110-1[臨床意義]

年齡隨著年齡增長血紅蛋白可以有增高或降低，這種生理變化和紅細(xì)胞相似。時間紅細(xì)胞和血紅蛋白量在一天中的時間內(nèi)也存在著波動。據(jù)報道，上午7時出現(xiàn)高峰，隨后下降，這一生理現(xiàn)象機(jī)智尚未闡明。.[臨床意義]

臨床應(yīng)用血紅蛋白測定的臨床意義和紅細(xì)胞計數(shù)相似，但對貧血程度的判斷上優(yōu)于紅細(xì)胞計數(shù)。需要注意的是：1.在某些病理情況下，血紅蛋白和紅細(xì)胞的濃度不一定能正確反映全身紅細(xì)胞總?cè)萘康亩嗌?。大量失血時，在補(bǔ)充液體之前，循環(huán)血液最重要的變化是血容量的縮小，但此時血濃度很少變化，以致從血紅蛋白濃度等數(shù)值來看，很難反映出貧血的存在，當(dāng)體內(nèi)發(fā)生水潴留時，血漿容量增大，此時即使紅細(xì)胞容量是正常的，但血液濃度已經(jīng)相對降低，因此從表面看來，存在貧血；相反，失水時，血漿容量縮小，血液濃度偏高，紅細(xì)胞容量即使減少、但根據(jù)血紅蛋白濃度等測定值，貧血仍可不明顯。2.發(fā)生大細(xì)胞貧血或小細(xì)胞低色素貧血時，紅細(xì)胞計數(shù)與血紅蛋白濃度不成比例。大細(xì)胞性貧血的血紅蛋白濃度相對偏高，小細(xì)胞低色素貧血的血紅蛋白雖然低于正常，而紅細(xì)胞計數(shù)也可正常。臨床應(yīng)用血紅蛋白測定的臨床意義和紅細(xì)胞計數(shù)相似，但對貧血程度三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查

各種病因可作用于紅細(xì)胞生理進(jìn)程的不同階段，從而引起紅細(xì)胞的病理變化，導(dǎo)致某些類型貧血的紅細(xì)胞產(chǎn)生特殊的形態(tài)變化。此種形態(tài)學(xué)改變包括紅細(xì)胞大小、形態(tài)、染色和內(nèi)涵物的異常。紅細(xì)胞形態(tài)檢查與血紅蛋白測定、紅細(xì)胞計數(shù)結(jié)果相結(jié)合可粗略地推斷貧血原因，對貧血的診斷和鑒別診斷有很重要的臨床價值。三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查

各種病因可作用于紅細(xì)胞生理進(jìn)程的不同階臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件[檢測原理]將細(xì)胞分布均勻的血涂片，進(jìn)行染色（如瑞氏染色），由于不同的細(xì)胞及其不同成分對酸性及堿性染料的結(jié)合的多少不同，從而使各種細(xì)胞呈現(xiàn)出各自的染色特點。一般由人工在顯微鏡下進(jìn)行識別。[檢測原理]將細(xì)胞分布均勻的血涂片，進(jìn)行染色（如瑞氏染色），[方法學(xué)評價]近年來，血細(xì)胞分析儀廣泛用于全血細(xì)胞計數(shù)，而觀察血涂片可用于估計相應(yīng)血細(xì)胞數(shù)量，因而顯微鏡細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)的觀察現(xiàn)常作為對儀器分析質(zhì)控的參考對照，但如果血片制作不良和染色不佳，常使細(xì)胞鑒別發(fā)生困難，甚至導(dǎo)致錯誤結(jié)論。[方法學(xué)評價][質(zhì)量控制]1.選擇細(xì)胞分布均勻的區(qū)域：在整張血涂片上紅細(xì)胞通常不是均勻分布的，一般理想的紅細(xì)胞形態(tài)應(yīng)在紅細(xì)胞緊密排列但不重疊的區(qū)域。要從血涂片對異常紅細(xì)胞定量比較困難。紅細(xì)胞分布太少或太多都會受人為影響。有時在血涂片可見紅細(xì)胞堆積在一起呈穿線狀，往往是由于正常血液標(biāo)本中紅細(xì)胞過于密集造成的，但如果在血涂片比較薄的區(qū)域出現(xiàn)此現(xiàn)象，則可能是紅細(xì)胞外附有過量球蛋白，使紅細(xì)胞間正常的電荷排斥減少而引起凝集。2.注意完整的檢查順序：檢查血涂片，應(yīng)先在低倍鏡下估計細(xì)胞的分布和染色情況，再用油鏡觀察血膜體尾交界處的細(xì)胞形態(tài)。同時瀏覽是否存在其他異常細(xì)胞如幼稚或有核紅細(xì)胞等。瀏覽全片尤其重要，因異常成分集中在血片的邊緣，容易漏檢；應(yīng)按規(guī)范步驟，系統(tǒng)地分析血涂片上的各類細(xì)胞。[質(zhì)量控制]1.選擇細(xì)胞分布均勻的區(qū)域：在整張血涂片上紅細(xì)胞[參考值]瑞氏染色血涂片成熟紅細(xì)胞形態(tài)：雙凹圓盤形，細(xì)胞大小相似，平均直徑7.2um（直徑范圍6-9.5um）；淡粉紅色，中央1/3為生理性淡染區(qū)；胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)構(gòu)。[參考值]臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件臨床意義紅細(xì)胞形態(tài)變化主要包括以下4個方面：1、紅細(xì)胞大小不一在分析貧血原因時，術(shù)語小紅細(xì)胞和大紅細(xì)胞等描述細(xì)胞大小，其實際含義是指細(xì)胞體積而不只是指直徑大小，故可從血片直接感知直徑而推知細(xì)胞及血紅蛋白的容積。臨床意義紅細(xì)胞形態(tài)變化主要包括以下4個方面：（1）小紅細(xì)胞：指直徑小于6UM的紅細(xì)胞。正常人偶見。血涂片中出現(xiàn)較多染色過淺的小紅細(xì)胞，提示HB合成障礙，見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血。而遺傳性球性細(xì)胞增多癥的小紅細(xì)胞，其HB充盈良好，生理性中心淺染區(qū)卻消失。（1）小紅細(xì)胞：指直徑小于6UM的紅細(xì)胞。正常人偶見。血涂片臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件（2）大紅細(xì)胞：指直徑大于10μm的紅細(xì)胞。為未完全成熟的紅細(xì)胞，體積較大，因殘留脫氧核糖核酸，經(jīng)瑞氏染色后而呈嗜多色或含有嗜堿性點彩。常鑒于巨幼細(xì)胞性貧血，也可見于溶血性貧血、惡性貧血等。（2）大紅細(xì)胞：指直徑大于10μm的紅細(xì)胞。為未完全成熟的紅臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件（3）巨紅細(xì)胞：指直徑大于15μm的紅細(xì)胞。最常見于葉酸及VitB12缺乏所致的巨幼細(xì)胞性貧血。由于缺乏上述因子，幼稚紅細(xì)胞內(nèi)DNA合成不足，不能按時分裂，當(dāng)這種幼稚紅細(xì)胞脫核之后，便成巨大的成熟紅細(xì)胞。血涂片如同時存在分葉過多的中性粒細(xì)胞則更有助于診斷。（3）巨紅細(xì)胞：指直徑大于15μm的紅細(xì)胞。最常見于葉酸及V臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件（4）紅細(xì)胞大小不均：是指同一患者的紅細(xì)胞之間直徑相差一倍以上而言。大者紅細(xì)胞直徑可達(dá)12μm，小者直徑僅2.5μm。常見于嚴(yán)重的增生性貧血，巨幼細(xì)胞性貧血時尤為明顯，可能與骨髓粗制濫造紅細(xì)胞有關(guān)。（4）紅細(xì)胞大小不均：是指同一患者的紅細(xì)胞之間直徑相差一倍以臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件2.紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量改變（1）正常色素性：紅細(xì)胞著色的深淺取決于血紅蛋白含量的多少，含量多者著色深，含量少者著色淡。正常紅細(xì)胞在瑞氏染色的血片中為淡紅色圓盤狀，中央有生理性淡染區(qū)，通常稱正常色素性。除見于正常人外，還見于急性失血、再生障礙性貧血和白血病等。2.紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量改變臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件（2）低色素性：紅細(xì)胞的生理性中心淺染區(qū)擴(kuò)大，甚至有的紅細(xì)胞僅于其周邊著色，中央不著色，成為環(huán)形紅細(xì)胞，提示其血紅蛋白含量明顯減少。常見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、某些血紅蛋白病。（2）低色素性：紅細(xì)胞的生理性中心淺染區(qū)擴(kuò)大，甚至有的紅細(xì)胞臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件（3）高色素性：紅細(xì)胞中心淡染區(qū)消失，細(xì)胞著色比較深，整個紅細(xì)胞均染成紅色，而且胞體也大。其平均紅細(xì)胞血紅蛋白的含量增高，而平均血紅蛋白濃度多正常。最常見于巨幼細(xì)胞性貧血。（3）高色素性：紅細(xì)胞中心淡染區(qū)消失，細(xì)胞著色比較深，整個紅臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件（4）多色性：它是剛脫核而尚未完全成熟的紅細(xì)胞，故其細(xì)胞體積較大。由于胞質(zhì)內(nèi)尚存有少量嗜堿性物質(zhì)（RNA），因而紅細(xì)胞被染成灰紅色或淡灰藍(lán)色。正常人外周血中此種細(xì)胞占1%左右。多色性紅細(xì)胞增多提示骨髓造紅細(xì)胞功能活躍。尤見于溶血性或急性失血性貧血。（５）細(xì)胞著色不一：指同一血涂片中，同時出現(xiàn)低色素性和正常色素性兩種形態(tài)細(xì)胞，有時又稱雙形性貧血，多見于鐵粒幼紅細(xì)胞性貧血。

（4）多色性：它是剛脫核而尚未完全成熟的紅細(xì)胞，故其細(xì)胞體積臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件3.紅細(xì)胞形狀改變

（1）球形細(xì)胞：該細(xì)胞在血液中為球形，而在涂片上則顯示細(xì)胞中心著色比較深，體積比較小，有球形之立體感。其主要變化為細(xì)胞厚徑加大，使細(xì)胞的直徑與厚度之比減少至2.4：1或更小。球形紅細(xì)胞的氣體交換功能較正常紅細(xì)胞為弱，且容易招致破壞和溶解。主要見于遺傳和獲得性球形細(xì)胞增多癥（如自身免疫溶血性貧血或直接理化損傷如燒傷等),偶爾見于小兒,但無臨床意義。3.紅細(xì)胞形狀改變

臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件(2)橢圓形細(xì)胞(elliptocyte):

紅細(xì)胞呈橢圓形、桿形,兩端鈍圓,長軸增大,短軸縮短。長度可大于寬度3~4倍,最大直徑可達(dá)12.5um,橫徑可為2.5um。這種紅細(xì)胞生存時間一般正常,有時可縮短,但血紅蛋白并無異常。其形成機(jī)制可能與遺傳所致的細(xì)胞膜異?；蛴嘘P(guān),因為細(xì)胞只有成熟后才會呈現(xiàn)橢圓形,且將此種紅細(xì)胞置于高滲、等滲、低滲溶液或正常人血清內(nèi),其橢圓形保持不變,而幼紅細(xì)胞,即使是網(wǎng)織紅細(xì)胞,均不呈橢圓形。見于遺傳性橢圓形細(xì)胞增多癥(可達(dá)25%至高達(dá)75%)、大細(xì)胞性貧血(可達(dá)25%偶見于缺鐵性貧血、骨髓纖維化、巨幼細(xì)胞貧血、鐮形細(xì)胞性貧血。正常人血液中約占1%,但不超過15%。(2)橢圓形細(xì)胞(elliptocyte): 臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件(3)靶形細(xì)胞(targetcell):紅細(xì)胞中心部位染色較深,其外圍為蒼白區(qū)域,而細(xì)胞邊緣又深染,形如射擊之靶。有的中心深染區(qū)呈紅細(xì)胞邊緣延伸的半島狀或柄狀而成為不典型的靶形細(xì)胞。靶形細(xì)胞直徑可比正常紅細(xì)胞大,但厚度變薄,因此體積可正常。近來研究證明,此種細(xì)胞的出現(xiàn)主要是由于紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白的化學(xué)成分發(fā)生變異,以及鐵代謝異常所致。其形成過程是:紅細(xì)胞中的血紅蛋白首先溶解成二鐮狀或弓形空白區(qū),其后弓形空白區(qū)的兩端繼續(xù)向內(nèi)彎曲延伸,以至連接成一環(huán)形透明帶。此種細(xì)胞的生存時間約僅為正常紅細(xì)胞的一半或更短。常見于各種低色素性貧血,尤見于珠蛋白生成障礙性貧血、HbC病,也見于阻塞性黃疸、脾切除后狀態(tài)。應(yīng)注意與血涂片制作中未及時固定而引起的紅細(xì)胞形態(tài)改變相區(qū)別。

(3)靶形細(xì)胞(targetcell):紅細(xì)胞中心部位染色臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件（4）口形細(xì)胞(stomatocytΘ:紅細(xì)胞中央有裂縫,中心蒼白區(qū)呈扁平狀,頗似張開的口形或魚口。此種紅細(xì)胞有膜異常,使Na+透過性增加,細(xì)胞膜變硬,因而脆性增加,致使細(xì)胞生存時間縮短。常見于口形紅細(xì)胞增多癥,小兒消化系統(tǒng)疾患引起的貧血,也可見于乙醇中毒、某些溶血性貧血及肝病患者等。正常人偶見((4%)。（4）口形細(xì)胞(stomatocytΘ:紅細(xì)胞中央有裂縫,中臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件(5)鐮形細(xì)胞(SIcklecell):紅細(xì)胞外形呈鐮刀狀、線條狀,或呈L、S、V形等。主要原因是含有的異常HBS的紅細(xì)胞，在缺氧情況下溶解度降低,形成長形或尖形的結(jié)晶體,使細(xì)胞膜發(fā)生變形。因此,檢查鐮形細(xì)胞需將血液制成濕片,然后加入還原劑如偏亞硫酸鈉后觀察。普通血片中呈現(xiàn)的鐮狀紅細(xì)胞可能是在脾:骨髓或其他臟器的毛細(xì)血管中因缺氧而致變形的紅細(xì)胞。鐮狀細(xì)胞貧血(Hbs-S,HbS-O和鐮狀細(xì)胞特性(HbA-s)的血標(biāo)本,在缺氧的條件下,可有大量鐮狀細(xì)胞。(5)鐮形細(xì)胞(SIcklecell):臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件(6)棘形細(xì)胞(anthocyt):紅細(xì)胞表面有針尖狀突起,其間距不規(guī)則,突起的長度和寬度可不一。多見于遺傳性或獲得性β脂蛋白缺乏癥,可高達(dá)70%—80%;也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥。棘紅細(xì)胞應(yīng)與皺縮紅細(xì)胞區(qū)別。皺縮紅細(xì)胞,也稱鋸齒狀紅細(xì)胞(crenatedcell,echinocytΦ,可因制片不當(dāng)、高滲等原因引起,紅細(xì)胞周邊呈鋸齒形,排列緊密、大小相等,外端較尖。。(6)棘形細(xì)胞(anthocyt):臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件臨床檢驗學(xué)基礎(chǔ)課件(7)新月形紅細(xì)胞(meniscocyte):紅細(xì)胞殘缺不全,體積大,狀如新月形,直徑約20um。此種紅細(xì)