生長激素實驗室檢測

關于生長激素實驗室檢測第1頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五生長激素概述結構：含有191個氨基酸殘基的單鏈，由兩個二硫鍵連接的蛋白質(zhì)。分子量：22KD。分泌：垂體前葉(腺垂體)嗜酸細胞分泌,是腺垂體中含量最多的激素,約占腺垂體激素的50%。脈沖分泌，晝夜波動大，深睡眠分泌最旺盛。GH的半衰期為半小時左右；皮下注射和肌肉注射的半衰期分別為1.75和3.4小時。第2頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五生長激素概述第3頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五一、促進組織生長骨骼生長：GH及其介導IGF-1促進軟骨細胞增殖和代謝，促進線性增長。骨骺閉合后GH對維持骨礦物質(zhì)及骨密度仍然有重要作用。細胞生長：如骨骼肌細胞數(shù)量及其體積的增加，增加紅細胞數(shù)量。器官增長：增加內(nèi)臟器官的體積和功能。二、促進蛋白質(zhì)的合成GH促進蛋白質(zhì)合成，這體現(xiàn)在：細胞對氨基酸的攝取以及氮潴留的增加。生長激素的生理作用第4頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五三、促進脂肪燃燒GH對脂肪細胞溶脂速率有重要調(diào)節(jié)作用；體外研究表明，GH可提高脂解速率，抑制游離脂肪酸重新酯化。臨床上GH缺乏病人皮下脂肪增多，尤其在腹部。而GH治療后腹脂明顯減少。四、減少對葡萄糖的利用GH可減少外周組織對葡萄糖利用，亦可降低細胞對胰島素的敏感性，可致血糖上升。生長激素的生理作用第5頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五五、促進水、礦物質(zhì)代謝GH促進生長及合成代謝，使體內(nèi)鈉、鉀、磷酸鹽正平衡。GH參與對體液的調(diào)節(jié)，尤其對細胞外液，可促進腎小管鈉回吸收，激活腎上腺素、血管緊張素、醛固酮系統(tǒng)，引起水、鈉滯留增加。生長激素的生理作用六、其它：還有抗衰老、促進腦功能、增強心肌功能、提高免疫功能等作用。第6頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五高級神經(jīng)中樞下丘腦垂體前葉生長激素GHRH(+)SRIF(-)IGFs(亦稱生長介素)直接作用甲狀腺性腺生長激素的分泌、調(diào)節(jié)生長激素釋放激素

生長激素釋放抑制激素促進骨的縱向生長促進骨的成熟加速骨骺融合第7頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五生長激素的分泌、調(diào)節(jié)脈沖式分泌，晚9點至第二天凌晨1點，特別是晚上10點前后，生長激素的分泌量達到最高，可以達到白天的5-7倍。另外，早上6點前后的一兩個小時，生長激素也有一個分泌小高峰。與年齡相關，青春發(fā)育中期分泌脈沖幅度最大，分泌量最多。頻率：間隔約3～5小時第8頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五生長激素的分泌、調(diào)節(jié)一天中生長激素分泌的不平衡性。人體生長激素的分泌一天24小時內(nèi)是不平衡的，其分泌量睡眠時高于清醒時。80%的生長激素在人睡眠時分泌，特別是處于快速生長期的孩子，這個階段是生長激素分泌的高峰，晚上分泌的生長激素特別多。所以,才有“人在睡中長”的說法。夜間生長激素分泌的不平衡性。生長激素在前半夜分泌比較多，這時是“睡眠黃金期”，而到了后半夜，相對分泌要少些。生長激素分泌受睡眠質(zhì)量影響。生長激素在入睡初期的深度睡眠時分泌最多，血液中生長激素的濃度達到最高峰。如果睡眠受到干擾，睡眠質(zhì)量不高的話，生長激素的分泌就會減少，身高的增長也有可能受到影響。第9頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五生長激素的檢測隨機采血：GH不像甲狀腺激素，平時在血液中濃度是基本恒定的，隨時采血就可以檢查。它在體內(nèi)呈峰值分泌，基礎值很低（0～5ng/ml都是正常），主要在夜間深睡眠時出現(xiàn)3～5個較高的分泌峰，但是夜間采血孩子可能會醒，且時間長采血次數(shù)需更多，因而不采用。GH激發(fā)試驗：通過藥物促使GH分泌增加，以觀察血中GH動態(tài)變化，從而了解下丘腦、垂體合成和分泌GH的能力。第10頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五生長激素激發(fā)試驗以往曾應用的運動、睡眠等生理性篩查試驗，由于準確度低，目前已很少應用，多數(shù)都直接采用藥物刺激試驗：清晨不運動及空腹。激發(fā)實驗前一晚22點后開始禁食，可以適量喝水，但不能喝飲料，于第二天清晨8點前空腹進行化驗，全過程不能吃東西，可少喝水，最好孩子進入睡眠狀態(tài)。按照生長激素缺乏癥的診療規(guī)范，必須是分別做兩種藥物的生長激素激發(fā)試驗（避免一種藥物做激發(fā)試驗有15%的假陽性）。激發(fā)試驗藥物：胰島素、可樂定、精氨酸、左旋多巴、吡定斯的明、GHRH等藥物中選兩種。激發(fā)試驗給藥途徑:口服和靜脈，分別采用口服和靜脈兩種用藥方式，可減少因消化吸收原因影響口服藥迅速起作用的可能。衛(wèi)生部《矮小癥臨床路徑》中要求，靜脈用藥方式必選一種。取血時間：0min、30min、60min、90min、120min。第11頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五實驗室常用檢測方法化學發(fā)光免疫測定（CLIA）：采用一步酶免夾心法測定。將樣品添加到含有抗GH-堿性磷酸酶結合物、蛋白緩沖液和包被著抗GH單克隆抗體的順磁性磁珠的反應管中。樣品中的GH與固定在磁珠上的抗GH單克隆抗體結合，而抗GH-堿性磷酸酶結合物和GH上不同的抗原位點反應。將這種抗體-抗原-抗體復合物置于磁場內(nèi)，復合物被吸附住，而未結合的物質(zhì)被沖洗除去。隨后將化學發(fā)光底物添加到反應管中，它在ALP的作用下迅速發(fā)光，所產(chǎn)生的光的量與樣品中GH的濃度成正比，通過多點校準曲線確定樣品中GH的量。第12頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五電化學發(fā)光免疫測定（ECLIA）:是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學發(fā)光免疫測定以后的新一代標記免疫測定技術，是電化學發(fā)光（ECL）和免疫測定相結合的產(chǎn)物。其檢測原理：將待測樣品、釕復合體標記的抗GH單克隆抗體和生物素抗GH單克隆抗體同時加入一個反應杯中孵育,反應生成“三明治”樣抗原-抗體復合物。實驗室常用檢測方法第13頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五電化學發(fā)光法第14頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五將被鏈霉親和素包被的磁珠加入反應杯中，再次孵育，使生物素通過與親和素的結合將磁珠與反應復合物連接為一體。

電化學發(fā)光法第15頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五電化學發(fā)光法第16頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五蠕動泵將形成的釕標記抗體－GH－生物素化抗體－磁珠復合體吸入流動測量室，此時，磁珠被工作電極下面的磁鐵吸附于電極表面。同時，游離GH被吸出測量室。電化學發(fā)光法第17頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五電化學發(fā)光法第18頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五蠕動泵加入含三丙胺（TPA）的緩沖液，同時電極加電壓，啟動ECL反應過程。反應過程中產(chǎn)生許多光子，光強度與釕標記復合物的濃度呈線性關系,通過光電倍增管檢測光強度，可測出待測GH的含量。電化學發(fā)光法第19頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五電化學發(fā)光法第20頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五結果判斷生長激素激發(fā)試驗結果判斷：整個激發(fā)試驗過程中，只要有一次任一次生長激素（GH）峰值≥10ng/ml為正常；5ng/ml<GH峰值<10ng/ml為部分缺乏；GH峰值<5ng/ml為完全缺乏（不代表體內(nèi)完全沒有生長激素，主要是為了與部分性相區(qū)別）。第21頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五其他相關激素第22頁，共25頁，2022年，5月20日，9點8分，星期五生長激素通過直接作用于骨骼或通過IGF-1介導作用于骨骼，促進骨骼的線性增長?？笹H抗體阻礙GH與受體結合，從而抑制IGF-1的產(chǎn)生，進而抑制其促生長效果。Comparativestudyofbiosynthetichumangrowthhormoneimmunogenicityingrowthhormonedeficientchildren.RougeotC,MarchandP,DrayF,etal.HormRes.1991;35(1):76-81.生長激素作用機