石蠟切片(三)、染色(四)課件

實(shí)驗(yàn)三石蠟切片法(三)

——切片、貼片

一、實(shí)驗(yàn)原理

切片就是把包埋好的材料塊用切片機(jī)切成所需要的厚度的切片帶。貼片是用粘貼劑把切片平鋪貼在載玻片上，以便于染色。二、實(shí)驗(yàn)用品

(一)器材切片機(jī)，切片刀，磨刀機(jī)或磨刀石，單面刀片，展片臺(tái)，酒精燈，溫度計(jì)，蠟鏟，臺(tái)木，毛筆，蠟帶盤，載玻片，鑷子。(二)試劑粘片劑，氯仿。(三)材料已包埋好的蠟塊。三、實(shí)驗(yàn)程序

(一)切片(二)貼片附：常用的粘片劑1．蛋白甘油亦稱為梅氏蛋白(Mayer'salbumen)

蛋白50mL

甘油50mL

水楊酸鈉(防腐劑)lg2．郝普特氏明膠粘片劑(Haupt'sgelatinefixative)明膠lg蒸餾水100ml石炭酸2g甘油15mL實(shí)驗(yàn)四石蠟切片法(四)

——染色、封藏

一、實(shí)驗(yàn)原理1．染色的一般原理細(xì)胞和組織的不同結(jié)構(gòu)之所以能被染成各種不同顏色，是由于染料對(duì)它們所起的物理或化學(xué)的綜合作用。(1)物理作用：滲透、吸收、吸附(2)化學(xué)作用2．封藏的原理封藏是使已經(jīng)透明的材料，保存在適合折光率的封藏劑中(如封藏劑加拿大樹(shù)膠的折光率為1.52，它與玻璃的折光率1.51很接近)，使材料能在顯微鏡下清晰的顯示出來(lái)，并能長(zhǎng)期保存。下面以海登漢鐵礬蘇木精染色法為例介紹如下。

(1)將用二甲苯脫蠟的切片放入二甲苯和純酒精的混合液中浸10min。(2)用純酒精處理5～10min。(3)放入95％、90％、80％、70％、50％、30％的酒精中各2—5min。(4)水洗1min。(5)用2％或4％鐵明礬水溶液媒染0.5—2h。(6)水洗5min。(7)蒸餾水中更換數(shù)次約3～5min。(8)0.5％蘇木精中染色1-24h。附：常用的染料的性能及其配制方法

生物學(xué)上用的染料，按其來(lái)源可分為兩大類，一類是天然染料，一類是人工染料。天然染料是從動(dòng)植物體中提取出來(lái)的，日常用的有蘇木精、洋紅、地衣紅、靛青等。最早的人工染料是由苯胺制成的，所以常稱為苯胺染料。但以后多數(shù)的人工染料是由煤焦油中提取出來(lái)的。下面介紹常用的染料的性能及其配制方法。常用的蘇木精配方有：(1)海登漢(Heidenhain)氏鐵蘇木精甲液(媒染劑)鐵明礬(即硫酸鐵銨)2－4g蒸餾水100ml(甲液必須在用時(shí)配制，保持新鮮)乙液(染液)蘇木精0.5g純酒精或95％酒精10mL蒸餾水90mL蘇木精溶于酒精中，然后加蒸餾水混合，置于廣口瓶?jī)?nèi)，用紗布縛住瓶口，靜置使其氧化，4周成熟后使用。(2)埃利希(Ehrlich)氏蘇木精：蘇木精1g純酒精(或95％酒精)50ml冰醋酸5ml甘油50ml鉀礬(硫酸鋁鉀)約5g(飽和量)蒸餾水50ml配法：①將蘇木精溶于約15mL的純酒精中，再加冰醋酸后攪拌。②當(dāng)蘇木精溶解后即將甘油倒入并搖動(dòng)容器，同時(shí)加入其余的酒精。③將鉀礬在研缽中研碎并加熱，然后將它溶解于水中。④將溫?zé)岬拟浀\溶液一滴一滴地加入上述染液中，并隨時(shí)攪動(dòng)。⑤此液混合完畢，將瓶口用一層紗布包著小塊棉花塞起來(lái)，放在暗處通風(fēng)的地方成熟時(shí)間約3～4周。若加入0．2g碘酸鈉，可立刻成熟。此液穩(wěn)定而染色均勻，染核效果良好，不會(huì)發(fā)生沉淀，長(zhǎng)期貯備無(wú)妨。此液可分別與伊紅(enosin曙紅)，橙黃G，番紅進(jìn)行二重染色。(3)哈里斯(Harris)氏蘇木精：甲液：蘇木精0.5g95％酒精5ml

乙液：鉀礬或銨礬10g蒸餾水100ml氧化汞0.25g冰醋酸幾滴配法：①將0.5g蘇木精溶解于5ml95%酒精中。②溶解10g鉀礬或銨礬于100ml的蒸餾水中，并加熱煮沸。③將上述兩液混合煮沸0.5min，并加入氧化汞。④移入冷水中冷卻。⑤冷卻液過(guò)夜后用雙層濾紙過(guò)濾，并加入幾滴冰醋酸。2．洋紅(Carmine)

洋紅又稱卡紅。是從一種熱帶昆蟲(chóng)胭脂蟲(chóng)的雌性蟲(chóng)體中提取的。洋紅為核的優(yōu)良染料，染色標(biāo)本不易褪色，用作切片或組織塊染色均適宜，特別適宜于小形材料的整體染色。(2)明礬洋洋紅：洋紅lg銨明礬(硫酸鋁銨)10g蒸餾水100mL先將銨明礬溶于蒸餾水，再將洋紅加入銨明礬水中煮沸，用玻棒充分?jǐn)嚭褪寡蠹t溶解，冷卻過(guò)濾后，加入少許防腐劑。(3)醋酸洋紅

洋紅4～5g冰醋酸45ml蒸餾水55ml將洋紅粉加入水及醋酸中，在小火焰上加溫，煮沸用玻棒攪和使其溶解，冷卻后過(guò)濾，用時(shí)加入99ml蒸餾水稀釋。(2)堿性品紅(basicfuchsin)：堿性品紅為強(qiáng)力的細(xì)胞核染料，對(duì)粘液、彈性纖維、輪藻、原球藻及細(xì)菌等的染色都有較好的效果。堿性品紅可溶于酒精和水，在酒精中的溶解度大。(3)美藍(lán)(亞甲藍(lán)methyleneblue)：美藍(lán)的染色范圍很廣，是重要的生物染料之一，美藍(lán)可用于神經(jīng)組織和核仁的活體染色，也是最常用的血液染色劑。

(4)結(jié)晶紫(crystalviolet)：結(jié)晶紫應(yīng)用范圍較廣，動(dòng)物、植物、微生物方面的材料都可使用。結(jié)晶紫溶于水和酒精，配制方法可因用途而異。

(2)酸性品紅(acidfuchsin)：酸性品紅廣泛地應(yīng)用于動(dòng)物材料的染色，可染動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核。也可染植物組織，對(duì)髓部薄壁細(xì)胞的染色具有良好的作用。還可染胚囊、花粉以及寄生于動(dòng)、植物組織中的霉菌等。

(3)伊紅(曙紅)(eosin)：伊紅是最優(yōu)良的動(dòng)物細(xì)胞染料，常與蘇木精對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行對(duì)比染