革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范培訓(xùn)課件

革蘭氏染色及鏡檢

操作規(guī)范培訓(xùn)質(zhì)量管理部目錄一、革蘭氏染色法二、革蘭氏染色原理三、儀器設(shè)備、試劑四、操作方法五、鏡檢及結(jié)果判定六、革蘭氏染色圖片七、革蘭氏染色注意事項(xiàng)八、革蘭氏染色小結(jié)一、革蘭氏染色法革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。

有芽胞的桿菌和絕大多數(shù)的球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏陽性反應(yīng)；弧菌，螺旋體和大多數(shù)致病性的無芽胞桿菌都呈現(xiàn)陰性反應(yīng)。

G+和G-生物學(xué)特性的差異

比較項(xiàng)目G+細(xì)菌G-細(xì)菌革蘭氏染色反應(yīng)能阻留結(jié)晶紫而染成紫色可經(jīng)脫色而復(fù)染成紅色肽聚糖厚，層次多薄，一般單層磷壁酸多數(shù)含有無外膜無有脂多糖（LPS）無有類脂和脂蛋白含量低（僅抗酸性細(xì)菌含有類脂）高鞭毛結(jié)構(gòu)基體上著生2個(gè)環(huán)基體上著生4個(gè)環(huán)產(chǎn)毒素以外毒素為主以內(nèi)毒素為主對(duì)機(jī)械力的抗性強(qiáng)弱陰性菌陽性菌二、革蘭氏染色原理G+菌由于其細(xì)胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層次多且交聯(lián)程度大，故經(jīng)酒精脫色，失水而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故酒精處理，能把結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其保持紫色。三、儀器設(shè)備、試劑生物顯微鏡載玻片草酸銨結(jié)晶紫染色液革蘭氏碘液沙黃復(fù)染液或番紅染色液95%乙醇5.2碘液配制

碘片1g，

碘化鉀2g

，蒸餾水300mL

配制方法：先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀溶液中，待碘全溶后，加夠蒸餾水即可。四、操作方法1、制片在干凈的載玻片上滴上一滴蒸餾水。用接種環(huán)進(jìn)行無菌操作，挑取培養(yǎng)物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成懸液并涂成直徑約1厘米的薄層。為避免因菌數(shù)過多聚成團(tuán)，不利觀察個(gè)體形態(tài)，可在載玻片之一側(cè)再加一滴水，從已涂布的菌液中再取一環(huán)于此水滴中進(jìn)行稀釋，涂布成薄層。若材料為液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物沖洗下制備的菌液，則直接涂布于載玻片上即可2、自然干燥涂片最好在室溫下使其自然干燥。有時(shí)為了使之干得更快些，可將標(biāo)本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時(shí)間過長(zhǎng)，以防標(biāo)本烤枯而變形。3、固定標(biāo)本干燥后即進(jìn)行固定，固定的目的：１）殺死微生物，固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。２）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標(biāo)本被水沖洗掉。３）改變?nèi)玖蠈?duì)細(xì)胞的通透性，因?yàn)樗赖脑|(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。手執(zhí)載玻片的一端（涂有標(biāo)本的遠(yuǎn)端），標(biāo)本向上。在酒精燈外焰盡快的來回通過3—4次，共約2—3秒鐘，并不時(shí)以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60℃）,放置待冷后，進(jìn)行染色。5、媒染加革蘭氏碘液染1分鐘蒸餾水沖洗，用吸水紙吸去水分。6、脫色加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后立即用蒸餾水沖洗。用吸水紙吸去水分。五、鏡檢及結(jié)果判定接通顯微鏡的電源，調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)度。將載玻片放在載物臺(tái)上，調(diào)節(jié)鏡頭至油鏡鏡頭處，調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋至清晰為止。觀察菌落形態(tài)及菌體的顏色。革蘭氏陽性菌染色呈紫色，革蘭氏陰性菌染色呈紅色。

六、革蘭氏染色圖片革蘭染色的傷寒沙門菌革蘭染色的福氏志賀菌七、革蘭氏染色注意事項(xiàng)標(biāo)本涂片不能太厚，若涂片較厚，應(yīng)延長(zhǎng)脫色時(shí)間，直至不在出現(xiàn)紫色為止。染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水。選用培養(yǎng)物