血清成分分析

血清膽固醇的定量測定血清清蛋白(dànbái)與γ-球蛋白(dànbái)的別離與鑒定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的鑒定及活力測定實驗(shíyàn)內(nèi)容第一頁，共二十頁。血清膽固醇的定量(dìngliàng)測定〔鄰苯二甲醛法〕膽固醇及其酯在硫酸存在下與鄰苯二甲醛作用，產(chǎn)生(chǎnshēng)的紫紅色物質(zhì)對550nm波長的光有最大吸收。100ml樣品中膽固醇含量在400mg之內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。第二頁，共二十頁。實驗(shíyàn)數(shù)據(jù)編號01234吸光度值00.1770.4050.6040.745對照家雞血清對照烏雞血清吸光度值00.03700.053第三頁，共二十頁。第四頁，共二十頁。實驗(shíyàn)結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0019x

家雞的血清(xuèqīng)總膽固醇含量：19.47mg/100ml

烏雞的血清總膽固醇含量：27.89mg/ml

查資料得：雞的血清膽固醇含量在51—196mg/100ml之間是在可信范圍。第五頁，共二十頁。分析(fēnxī)與討論

實驗所得的數(shù)據(jù)偏低，可能的原因：1.試管未枯燥，沾有較多的水分，使得標(biāo)準(zhǔn)膽固醇應(yīng)用液被稀釋(xīshì)，濃度偏低。2.此次所用的血清本身膽固醇含量比一般的個體偏低。3.取血清的過程中，有些殘留在試管壁上。第六頁，共二十頁。血清清蛋白(dànbái)與γ-球蛋白(dànbái)的鹽析、透析與濃縮↗上清液〔主要(zhǔyào)是清蛋白〕→離心→血清離心取沉淀↘沉淀〔主要是γ-球蛋白〕→離心→取沉淀

將得到的樣品裝入透析袋中，置于燒杯中，用流水沖刷一小時。第七頁，共二十頁。血清(xuèqīng)清蛋白與γ-球蛋白的鑒定〔醋酸纖維素薄膜電泳法〕

醋酸纖維素薄膜是用二乙酸纖維素制成的，它具有均一的泡沫樣的結(jié)構(gòu)，厚度僅為120μm，有強(qiáng)滲透性，對分子移動無阻力。浸泡→點樣→電泳→染色(rǎnsè)→漂洗第八頁，共二十頁。實驗結(jié)果(jiēguǒ)〔家雞血清電泳圖譜〕第九頁，共二十頁。分析(fēnxī)與討論

查資料得：電泳圖譜中，清蛋白(dànbái)與點樣線的距離比γ—球蛋白(dànbái)遠(yuǎn)。

1.條帶的顏色較深，是因為漂洗不夠徹底。

2.全血清條帶有多條重疊，是因為血清中有多種蛋白。

3.血清清蛋白條帶出現(xiàn)兩條線，可能是因為鹽析時，γ—球蛋白中摻有其它蛋白。第十頁，共二十頁。谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的鑒定(jiàndìng)

觀察肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶所催化的氨基移換反響。通過紙層析法檢查(jiǎnchá)底物谷氨酸的減少和產(chǎn)物丙氨酸的生成。第十一頁，共二十頁。實驗結(jié)果〔家雞(jiājī)肝臟〕第十二頁，共二十頁。分析(fēnxī)與討論

酶液處有兩個條帶，離圓心較近的為谷氨酸，較遠(yuǎn)的為丙氨酸，而且與另一端的谷氨酸相比，量較少。煮沸的酶液只有一個條帶，是因為谷丙轉(zhuǎn)氨酶已失活，無法將谷氨酸轉(zhuǎn)換為丙氨酸。條帶附近還是有淺色的痕跡(hénjì)，可能是因為點樣時，不小心碰到了別處。第十三頁，共二十頁。血清(xuèqīng)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力單位測定本實驗用丙氨酸和α-酮戊二酸為底物，經(jīng)轉(zhuǎn)氨作用生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸與2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙，此物質(zhì)堿性(jiǎnxìnɡ)條件下呈棕紅色，其顏色的深淺與丙酮酸的含量成正比，可用比色法進(jìn)行定量測定。通過與標(biāo)準(zhǔn)溶液的比較，即可計算出酶的活力單位數(shù)。第十四頁，共二十頁。實驗(shíyàn)數(shù)據(jù)012345吸光度值00.4250.6510.6220.7170.866家雞對照管烏雞對照管吸光度值0.01900.0300第十五頁，共二十頁。第十六頁，共二十頁。實驗(shíyàn)結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)曲線(qūxiàn)：y=0.0019x

家雞的GPT活力單位數(shù)：10

烏雞的GPT活力單位數(shù)：30

第十七頁，共二十頁。分析(fēnxī)與討論查資料知道實驗所得的數(shù)據(jù)偏低，可能(kěnéng)的原因：1.試管未枯燥，導(dǎo)致待測液濃度降低。2.靜置前，未將待測液充分搖勻，導(dǎo)致待測液濃度分布不均。3.可能保溫時間不夠，導(dǎo)致反響不夠充分。第十八頁，共二十頁。謝謝(xièxie)觀看第十九頁，共二十頁。內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)血清膽固醇的定量測定。血清清蛋白與γ-球蛋白的別離與鑒定。膽固醇及其酯在硫酸存在下與鄰苯二甲醛作用，產(chǎn)生(chǎnshēng)的紫紅色物質(zhì)對550nm波長的光有最大吸收。查資料得：雞的血清膽固醇含量在51—196