抗體的測(cè)定及臨床意義

關(guān)于抗體的測(cè)定及臨床意義第1頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四梅毒螺旋體（蒼白密螺旋體）

梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。人體受感染后，螺旋體很快播散到全身，幾乎可侵犯全身各組織與器官，臨床表現(xiàn)多種多樣，且時(shí)顯時(shí)隱，病程較長(zhǎng)。

2005年國(guó)家衛(wèi)生部公布,在全國(guó)27種法定報(bào)告的甲、乙類(lèi)傳染病中,梅毒發(fā)病人數(shù)僅次于肺結(jié)核、乙型肝炎、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、淋病而高居第五位(2002

年為第七位)。二.傳播途徑

一.概況第2頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四1、性接觸傳播占95%。主要通過(guò)性交或其他性行為，如同性戀、接吻等。梅毒密螺旋體大量存在于一、二期梅毒患者的生殖器和其他部位的皮膚粘膜表面，也存在于唾液、精液、乳汁、尿液和血液等體液中。未經(jīng)治療的梅毒患者在感染1～2期內(nèi)最具傳染性。隨著病期延長(zhǎng)，傳染性越來(lái)越小，4年后通過(guò)性接觸無(wú)傳染性。第3頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四3、胎盤(pán)傳播

未經(jīng)治療的梅毒孕婦在整個(gè)病程都可經(jīng)胎盤(pán)傳播給胎兒。其中在一期或二期患者，血中螺旋體最多。如不治療造成流產(chǎn)或死胎的約為50%，發(fā)生胎傳播梅毒的危險(xiǎn)約50%，感染梅毒1年后的胎盤(pán)傳播的危險(xiǎn)性逐漸降為50%以下。病期超過(guò)4年雖通過(guò)性接觸無(wú)傳染性，但仍可傳給胎兒，病期越長(zhǎng)，傳染性越小。2、輸血傳染第4頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四4、產(chǎn)道傳播新生兒在出生時(shí)，頭部、肩部損傷或接觸了母體生殖器都能受母體陰部的螺旋體感染，而引起嬰兒的后天性梅毒。5、其他傳播哺乳、接觸梅毒患者污染的衣被、毛巾、食具或污染的醫(yī)療器械，都可引起梅毒的間接傳播。第5頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四人類(lèi)對(duì)梅毒無(wú)先天免疫性，尚無(wú)疫苗接種進(jìn)行人工免疫，僅能在受感染后產(chǎn)生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染三、梅毒的免疫性第6頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測(cè)出，早期梅毒抗梅治療3～9個(gè)月后或晚期梅毒治療2年后，大部分病人IgM可轉(zhuǎn)陰性，再感染時(shí)又出現(xiàn)陽(yáng)性，故IgM型抗體的存在是活動(dòng)性（現(xiàn)癥）梅毒的表現(xiàn)。感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長(zhǎng)時(shí)間，IgG抗體仍可通過(guò)記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測(cè)出。一種是梅毒特異性抗體IgM和IgG第7頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四胎兒在宮內(nèi)感染梅毒螺旋體后，胚胎晚期（6～9個(gè)月）已能合成IgM型抗體，出生后第3個(gè)月開(kāi)始形成IgG型抗體；IgM抗體不能通過(guò)胎盤(pán)，而IgG抗體能通過(guò)胎盤(pán)，如患兒血清中檢側(cè)出19S-IgM抗梅毒螺旋體抗體是診斷先天梅毒的有力證據(jù)一種是非特異性抗體---反應(yīng)素（reagin）是梅毒螺旋體破壞人體組織過(guò)程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機(jī)體所產(chǎn)生的抗體。一般在感染后5～7周（或下疳出現(xiàn)后2～3周）產(chǎn)生。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。第8頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四四.梅毒的診斷1、病史2、臨床表現(xiàn)3、實(shí)驗(yàn)室檢查。（1）血清學(xué)檢驗(yàn)(測(cè)抗體)（2）病原學(xué)檢查：直接查梅毒螺旋體(暗視野顯微鏡,直接熒光抗體法)（3）梅毒螺旋體核酸測(cè)定。第9頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四非特異性類(lèi)脂質(zhì)抗原血清試驗(yàn)：是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原檢查血清中的反應(yīng)素，用于初篩試驗(yàn)及療效觀(guān)察?？梢苑譃橐韵滤姆N試驗(yàn)，原理基本相同：

1、性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（VDRL)

：由于試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，故而國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室很少采用。但VDRL是唯一可用于神經(jīng)性梅毒診斷的血清學(xué)方法

2、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)：在特制的紙片上進(jìn)行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現(xiàn)凝集，用肉眼可觀(guān)察結(jié)果。

3、甲苯胺紅試驗(yàn)（TRUST)：在試劑中加入甲苯胺紅代替炭粉顆粒，使結(jié)果更易于觀(guān)察。

4、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR)梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)第10頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四非特異性類(lèi)脂質(zhì)抗原血清試驗(yàn)的缺陷：

1、特異性：不高。在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、麻風(fēng)病、靜脈吸毒者以及懷孕婦女中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以此類(lèi)試驗(yàn)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。用于初篩試驗(yàn)。

2、敏感性：不高?？贵w過(guò)量可引起前帶現(xiàn)象（1-2％二期梅毒病人）；由于感染梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體；晚期梅毒反應(yīng)素又可能轉(zhuǎn)陰--假陰性反應(yīng)，因此這類(lèi)試驗(yàn)不適于一、三期梅毒，對(duì)隱性梅毒和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此此類(lèi)試驗(yàn)做梅毒初篩時(shí)，存在一定數(shù)量的漏檢非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)：

1、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)表現(xiàn)為滴度隨治療逐漸下降，故可以作為療效觀(guān)察的指標(biāo)

2、此類(lèi)方法簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)第11頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四

梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：用梅毒螺旋體作為抗原檢測(cè)血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均較高。常用的有以下五種方法：

1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS)最敏感的方法技術(shù)操作上也是最困難的，故常不被臨床實(shí)驗(yàn)室作為首選方法

2、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）國(guó)內(nèi)使用的商品化

TPHA試劑盒均未通過(guò)國(guó)家的批批檢3、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA)確證試驗(yàn)方法4、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）

5、梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（TP-RT）未通過(guò)國(guó)家的批批檢梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)第12頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四

梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPAIgG）原理：用超聲裂解的梅毒螺旋體為抗原，致敏惰性明膠顆粒，此致敏明膠顆粒與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可觀(guān)察的凝集反應(yīng)。是TPHA

的升級(jí)產(chǎn)品。優(yōu)點(diǎn)：1、試劑穩(wěn)定，批間差小

2、結(jié)果判讀清晰明確

3、敏感性和特異性高不足：結(jié)果判定主觀(guān)，不易保存.

成本較高，不適合大批量檢測(cè)梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)第13頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四SerodiaTPPA的操作步驟6、結(jié)果判讀1、加入樣品稀釋液100μl25μl25μl25μl孔號(hào)143212、加入測(cè)試樣品25μl孔號(hào)14321致敏顆粒4、加入明膠顆粒最終稀釋倍數(shù)孔號(hào)143211:401:8025μl25μl未致敏顆粒5、混勻，加蓋，孵育2個(gè)小時(shí)3、樣品的倍比稀釋孔號(hào)14321最終稀釋倍數(shù)1:201:4025μl25μl25μl25μl棄去第14頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四SerodiaTPPA的結(jié)果判讀（定性試驗(yàn)）第15頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（TP-ELISA）

原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚丙乙烯板，再加入待檢血清以及酶標(biāo)抗原，形成雙抗原夾心，同時(shí)檢測(cè)IgG、IgM抗體。少數(shù)試劑采用間接法，檢測(cè)IgG

優(yōu)點(diǎn)：1、敏感性和特異性較高

2、價(jià)格較低，適合于對(duì)大量樣品的篩查

3、可實(shí)現(xiàn)操作的自動(dòng)化、客觀(guān)化不足：各家ELISA試劑盒采用的抗原和工藝不同，使測(cè)定的敏感性和特異性產(chǎn)生較大的差異，臨床實(shí)驗(yàn)室在選用ELISA試劑前應(yīng)認(rèn)真進(jìn)行評(píng)估.基因重組抗原,假陰性.梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)第16頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四有研究表明:使用由rTP47,rTP17和rTP15這3種重組表達(dá)相關(guān)抗原包被的ELISA試劑盒,有非常好的敏感性和特異性.ELISA試劑對(duì)II期、潛伏期和療后梅毒的特異性和敏感性都較好，但對(duì)I期梅毒的敏感性尚有待提高。第17頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四樣品對(duì)ELISA及PA檢測(cè)結(jié)果的影響

X：假陽(yáng)性O(shè)加熱滅活

X：與底物有關(guān)O溶血O黃疸

O脂血OO血漿OO血清

ELISAPA樣品類(lèi)型O：無(wú)影響：部分有影響X：有影響第18頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四敏感性和特異性ELISA比TPPA法稍差。13736份標(biāo)本TPPA法陽(yáng)性214RPR法陽(yáng)性192(18例確診假陽(yáng)性

22例假陰性)ELISA法陽(yáng)性204(4例假陽(yáng)性)第19頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四

無(wú)償獻(xiàn)血者(18～55歲)中,ELISA法為0.58%。其中51～55歲陽(yáng)性率達(dá)2.14(9/421)無(wú)臨床癥狀，只有抗體陽(yáng)性。陽(yáng)性結(jié)果難以用正在或曾經(jīng)感染梅毒解釋。普通人群：陽(yáng)性率>1.5%(1.52%～1.61%)。其中>50歲53.3%～62.3%71～80歲27.7%～27.9%。ELISA或TPPA法假陽(yáng)性（老年人）第20頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)所測(cè)為抗T.pallidum的IgG/IgM類(lèi)抗體。試驗(yàn)中所用抗原FTA2ABS：T.pallidumsubsppallidum的Nichols株凍干懸液TPPA：Nichols株超聲處理ELISA：純化的/基因重組的分子量(MW)47000、45500、17000、15500的T.pallidum特異抗原梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的假陽(yáng)性生物學(xué)基礎(chǔ)第21頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四人類(lèi)共生的螺旋體很多，雖然有些螺旋體可能不致病,但可能參與齒齦類(lèi)、牙周病、腹瀉等的發(fā)病。已發(fā)現(xiàn)抗T.pallidumMW37000的鞭毛鞘蛋白的單克隆抗體和抗MW47000脂蛋白的單克隆抗體可與某些口腔螺旋體反應(yīng)。齒齦炎和牙周病患者常產(chǎn)生抗梅毒螺旋體(T.pallidumsubsp.pallidum)MW47000、37000、14000和12000抗原的IgG類(lèi)抗體。甚至少部分健康人也可測(cè)出抗MW47000和37000抗原的抗體。第22頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四如何解決假陽(yáng)性問(wèn)題？進(jìn)行梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)時(shí)，待測(cè)血清預(yù)先用非致病性密螺旋體T.phagedenis的Reiter株提取物吸收（或陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行吸收試驗(yàn)。即使如此,試驗(yàn)的特異性仍只能達(dá)99%左右,不能絕對(duì)排除假陽(yáng)性第23頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗(yàn)程序的探討（一）先以非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（RPR、TRUST等）進(jìn)行初篩，再以梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA、TPHA、ELISA等）進(jìn)行確認(rèn)。優(yōu)點(diǎn)：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)價(jià)格低廉，使梅毒檢測(cè)的成本可以保持在低水平缺點(diǎn)：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的敏感性較差，導(dǎo)致臨床上易出現(xiàn)漏檢的情況。

第24頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四先進(jìn)行梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，陽(yáng)性時(shí)再進(jìn)行非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)。關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗(yàn)程序的探討（二）第25頁(yè)，共29頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)45分，星期四關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗(yàn)程序的探討（二）

梅毒螺旋體抗原血