顯微鏡使用-蚯蚓橫切片制作

蚯蚓橫切片的制作目的了解切片標(biāo)本制作的基本知識，學(xué)會幾種制作方法實驗前的思考制作切片標(biāo)木，步驟繁多，其中特別是脫水這一環(huán)節(jié)材料器具蚯蚓；剃刀(或雙面刀片)，玻璃缸，衛(wèi)生紙，吸水紙；瓊脂(洋菜)，70～100％等級乙醇，蒸餾水，自來水，0.1～0.2％氨水，1％鹽酸乙醇，二甲苯，蘇木精染色液，染色液，波因(Bouin)氏固定液*。步取一玻璃缸，缸底墊幾層濕衛(wèi)生紙，然后取較小的蚯蚓放入缸中，換一次濕草紙。泥沙排盡后身體顯現(xiàn)透明時，就可以固定。把培養(yǎng)的蚯蚓浸入波因氏固定液中固定 小時，然后用剃刀雙面刀片切取它身體中部的一段，再切成0.5厘米長的若干小段，接著繼續(xù)用波因氏固定液固定4～8小時。用70等級乙醇脫水→透明→透蠟→包埋→切片→貼片→烤干→溶蠟→*波因氏固定液的配制75毫升飽和水溶液中加入25毫升甲醛，在臨用時再加入5毫升冰乙酸。把切片從蒸餾水中取出后，投入德氏(Delafield’s)蘇木精中染5～10分鐘。蘇木精是專染細(xì)胞核用的。取出后切片是深紫紅色的，用自來水或弱堿性水浸10分鐘左右使切片堿化(藍(lán)化)，切片顏色呈深藍(lán)色。用1％鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘，再用自來水堿化切片1小時至數(shù)小時。這時，切片又恢復(fù)呈藍(lán)色。從染色液中取出后，需要先經(jīng)過蒸餾水迅速浸洗2次，以洗去玻片上多余的紅色(在蒸餾水中不能停留太久，否則會使組織上的紅色完全褪掉)。然后依次浸入乙醇液，第1瓶95％乙醇(2～5分鐘)→第295％乙醇(2～5分鐘)→第1瓶無水乙醇(2～5分鐘)瓶無水乙醇(2～5分鐘)→1∶6石碳酸二甲苯或1∶1的無水乙醇苯，脫水完經(jīng)脫水的切片，浸入第1瓶二甲苯中(5～10分鐘)，再浸入第瓶二甲苯(5～10分鐘)，使組織透明，置于載玻片上用吸水紙把組織四周多余的二甲苯擦去，滴一點樹膠在組織上，加蓋蓋玻片。注意事保存生物顯微玻片標(biāo)本不能把玻片標(biāo)本放在陽光下曝曬，以免褪色。玻片標(biāo)本互相放置，應(yīng)該隔開平放，以免粘連。最后放玻片標(biāo)本放在太熱和太潮濕的地方，更不要沾拭擦玻片標(biāo)本時，要輕輕擦，不要用力擦，否則因膠未完全干涸，會移動蓋玻片。分析用自來水堿化蘇木精染色的細(xì)胞主要是加強染色化合物固著的作用0.1～0.2％氨水，但是這樣堿化的切片，必須再用自來水充分浸洗。如果用的水溶液染色，須把切片從普通水中取出后，投入蒸餾水中浸洗片刻，然后投入的水溶液中染色5～10分鐘。如果用的乙醇溶液染色，須在切