食品微生物檢驗方法

食品微生物檢驗方法中國檢驗檢疫科學研究院北京陸橋技術有限有限責任公司何艷玲內(nèi)容提要要菌落總數(shù)數(shù)檢測大腸菌群群及大腸腸桿菌檢檢測金黃色葡葡萄球菌菌檢測沙門氏菌菌檢測單核細胞胞增生李李斯特氏氏菌檢測測菌落總數(shù)數(shù)測定——菌落總數(shù)數(shù)的概念念菌落總數(shù)數(shù)是指在在被檢樣樣品的單單位重量量（g）、容積（ml）或表面積積（cm2）內(nèi)，所含含能于某某種固體體培養(yǎng)基基上，在在一定條條件下培培養(yǎng)后所所生成的的菌落的的總數(shù)。。菌落總數(shù)數(shù)測定——衛(wèi)生學意意義判定食品品被細菌菌污染的的程度及及衛(wèi)生質(zhì)質(zhì)量。及時反映映食品加加工過程程是否符符合衛(wèi)生要求求，為被被檢食品品衛(wèi)生學學評價提供依依據(jù)。通常認為為，食品品中細菌菌數(shù)量越越多，則可考慮慮致病菌菌污染的的可能性性越大，菌落落總數(shù)的的多少在在一定程程度上標志著著食品衛(wèi)衛(wèi)生質(zhì)量量的優(yōu)劣劣。FDABAM菌落總數(shù)數(shù)測定流流程檢樣xg/mL+9xml稀稀釋液（（磷酸鹽緩緩沖液）適當十倍倍稀釋樣樣品選擇2~~3個連連續(xù)適宜宜稀釋度度各取1mL分別別加入滅滅菌平皿皿內(nèi)（每個稀稀釋度做做兩個平平行）每皿內(nèi)加加入適量量平板計計數(shù)瓊脂脂（PCA）35℃℃，48±±2h菌落計數(shù)數(shù)FDABAM菌落計數(shù)數(shù)方法選擇25~250CFU之間間的菌落落進行計計數(shù)，計計算公式式如下：：N=∑C/（1*n1+0.1*n2）*d所有平板板的菌落落數(shù)都不不足25CFU，報告告EAPC/ml（g）為＜＜25**1/d。EAPC：estimatedaerobicplatecount所有平板板的菌落落數(shù)都超超過250CFU，但但不足100//cm2，報告EAPC/ml（g））為最接接近250CFU的平平板菌落落數(shù)的估估計值，，乘以相相應的稀稀釋度。。所有平板板的菌落落數(shù)都超超過100/cm2，計算平平板的面面積（直直徑為90mm的平板板面積為為65cm2），估計計最高稀稀釋度每每cm2的菌落數(shù)數(shù)，乘以以相應平平板面積積作為該該稀釋度度的菌落落計數(shù)結(jié)結(jié)果，報報告EAPC//ml（（g）為為＞65*100*1/d。無法計數(shù)數(shù)的平板板報告LA（LaboratoryAccident）。最終結(jié)果果保留前前兩位有有效數(shù)字字。按照照4舍6入，5是奇進進偶不進進。ISO4833-2003菌落總數(shù)數(shù)測定流流程檢樣xg/mL+9xml稀稀釋液（（磷酸鹽緩緩沖液）適當十倍倍稀釋樣樣品選擇2~~3個連連續(xù)適宜宜稀釋度度各取1mL分別別加入滅滅菌平皿皿內(nèi)（每個稀稀釋度做做兩個平平行）每皿內(nèi)加加入適量量（12~15mL））平板計數(shù)數(shù)瓊脂（（PCA），30±1℃，，72±3h菌落計數(shù)數(shù)如果懷疑疑樣品中中含有在在培養(yǎng)基基表面蔓蔓延生長長的菌落落，待瓊瓊脂凝固固后，在在其上覆覆蓋一層層（4mL）水瓊脂。。平板疊放放不超過過6個ISO4833-2003菌落計數(shù)數(shù)方法選擇連續(xù)續(xù)2個稀稀釋度不不超過300CFU的的平板，，且一個個平板至至少含15CFU進行行計數(shù)，，計算公公式如下下：N=∑C/（n1+0.1*n2）*d所有平板板的菌落落數(shù)都不不足15CFU，計算算2平板板菌落的的算術平平均值m，液體體樣品：：NE=m固體樣品品：NE=m×d-1無菌生長長：液體體樣品：：lessthan1;;固固體樣品品：lessthan1×d-1最終結(jié)果果保留前前兩位有有效數(shù)字字。菌落總數(shù)數(shù)測定幾幾點說明明由于檢樣樣中采用用30/35℃有氧條件件下培養(yǎng)養(yǎng)，因而而并不是是樣品中中實際的的總活菌菌數(shù)，一一些特殊殊營養(yǎng)要要求的細細菌、厭厭氧菌、、微需氧氧菌、以以及非嗜嗜中溫細細菌，均均難以反反映出來來。鑒于食品品檢樣中中的細菌菌細胞是是以單個個、成雙雙、鏈狀狀、葡萄萄狀或成成堆的形形式存在在，因而而在平板板上出現(xiàn)現(xiàn)的菌落落可以來來源于細細胞塊，，也可以以來源于于單個細細胞，因因而平板板上所得得菌落的的數(shù)字不不應報告告活菌數(shù)數(shù)，而應應以單位位重量、、容積或或表面積積內(nèi)的菌菌落數(shù)或或菌落形形成單位位（colonyformingunits，CFU）報報告。菌落總數(shù)數(shù)測定幾幾點要求求每個樣品品從開始始稀釋到到傾注最最后一個個平皿所所用的時時間不得得超過15min，主主要為防防止細菌菌增殖和和產(chǎn)生片片狀菌落落。樣液液與瓊脂脂應充分分混合，，避免將將混合物物濺到平平皿壁和和皿蓋上上。皿內(nèi)內(nèi)瓊脂凝凝固后，，不要長長時間放放置，然然后倒置置培養(yǎng)，，可避免免菌落蔓蔓延生長長。檢樣過程程中應用用稀釋劑劑做空白白對照，，用以判判定稀釋釋液、培培養(yǎng)基、、平皿或或吸管可可能存在在的污染染。同時時，檢樣樣過程中中應在工工作臺上上打開一一塊空白白平板計計數(shù)瓊脂脂，其暴暴露時間間應與檢檢樣時間間相當，，以了解解檢樣在在檢驗操操作過程程中有無無受到來來自空氣氣的污染染。檢樣稀釋釋液有時時帶有食食品顆粒粒，為避避免與細細菌菌落落發(fā)生混混淆，可可作一檢檢樣稀釋釋液與平平板計數(shù)數(shù)瓊脂混混合的平平皿，不不經(jīng)培養(yǎng)養(yǎng)，于4℃放放置，以以便在計計數(shù)檢樣樣時用作作對照。。大腸菌群群的定義義大腸菌群群系指一一群能發(fā)發(fā)酵乳糖糖、產(chǎn)酸酸產(chǎn)氣、、需氧和和兼性厭厭氧的革革蘭氏陰陰性無芽芽孢桿菌菌。大腸菌群群不是細細菌學上上的分類類命名，，而是根根據(jù)衛(wèi)生生學方面面的要求求，提出出的與糞糞便污染染有關的的細菌，，即作為為食品、、水體等等是否受受過人畜畜糞便污污染的指指示菌，，這些細細菌在生生化及血血清學方方面并非非完全一一致。根根據(jù)進一一步的生生化試驗驗，可將將這群細細菌再分分為大腸腸艾希氏氏菌（俗俗稱大腸腸桿菌））、弗氏氏檸檬酸酸桿菌、、肺炎克克雷伯氏氏菌和陰陰溝腸桿桿菌等。。大腸桿菌菌的定義義大腸桿菌菌（也稱稱大腸埃埃希氏菌菌），分分類于腸腸桿菌科科，歸屬屬于埃希希氏菌屬屬。大腸桿菌菌指革蘭蘭氏陰性性無芽孢孢桿菌、、乳糖發(fā)發(fā)酵產(chǎn)酸酸產(chǎn)氣、、IMViC試試驗（靛靛基質(zhì)、、MR、、V-P、檸檬檬酸鹽試試驗）為為++---或--+---的細菌菌。與人類有有關的大大腸桿菌菌統(tǒng)稱為為致瀉性性大腸桿桿菌，包包括五種種：腸毒毒素性大大腸桿菌菌（ETEC））、致病病性大腸腸桿菌（（EPEC）、、出血性性大腸桿桿菌（EHEC）、侵侵襲性大大腸桿菌菌（EIEC））、黏附附性大腸腸桿菌（（EAEC）。。大腸菌群群和大腸腸桿菌的的關系耐熱大腸腸菌群的的定義：：能在液體體乳糖培培養(yǎng)基中中35//37℃℃培培養(yǎng)48h產(chǎn)酸酸產(chǎn)氣，，并在44.5℃培養(yǎng)養(yǎng)24h產(chǎn)酸產(chǎn)產(chǎn)氣的細細菌（依依據(jù)ISO標準準）衛(wèi)生學意意義大腸菌群群和大腸腸桿菌是是評價衛(wèi)衛(wèi)生質(zhì)量量的重要要指標，，作為食食品中的的糞便污污染指標標。食品中檢檢出大腸腸菌群，，表明該該食品有有糞便污污染，既既可能有有腸道致致病菌存存在，因因而也就就有可能能通過污污染的食食品引起起腸道傳傳染病的的流行。。大腸菌菌群數(shù)的的高低，，表明了了糞便污污染的程程度，也也反映了了對人體體健康危危害性的的大小。。大腸桿菌菌在外界界存活時時間與一一些主要要腸道致致病菌接接近，它它的出現(xiàn)現(xiàn)預示著著某些腸腸道病原原菌的存存在，因因此該菌菌是國際際上公認認的衛(wèi)生生監(jiān)測指指示菌。。近年來來，有些些國家在在執(zhí)行HACCP管理理中，將將大腸桿桿菌檢測測作為微微生物污污染狀況況的監(jiān)測測指標和和HACCP實實施效果果的評估估指標。。大腸桿菌菌的生物物學特性性基本形態(tài)態(tài)：此菌為兩兩端鈍圓圓的短小小桿菌，，一般約約0.5-0..8μm*1..0-3.0μμm，，多單獨獨存在或或成雙，，但不呈呈長鏈排排列。約約50%%的菌株株有周生生鞭毛，，但多數(shù)數(shù)只有1-4根根，一般般不超過過10根根，故菌菌體動力力弱。多多數(shù)菌株株有菌毛毛，有的的有莢膜膜或微莢莢膜，不不形成芽芽孢，對對普通堿堿性染料料著色良良好，革革蘭氏染染色陰性性。大腸桿菌菌的生物物學特性性培養(yǎng)特性性：大腸桿菌菌合成代代謝能力力強，在在含無機機鹽、銨銨鹽、葡葡萄糖的的普通培培養(yǎng)基上上生長良良好。最最適生長長溫度為為37℃℃，在42-44℃℃條件下下仍能生生長，生生長溫度度范圍15-46℃℃。在普通營營養(yǎng)瓊脂脂上有3中菌落落形態(tài)：：1）光滑滑型：菌菌落邊緣緣整齊，，表面有有光澤、、濕潤、、光滑、呈呈灰色，，在生理理鹽水中中易分散散；2）粗糙糙型：菌菌落扁平平、干澀澀、邊緣緣不整齊齊，易在生理鹽鹽水中自自凝；3）黏液液型：常常為含有有莢膜的的菌株。。大腸菌群群及大腸腸桿菌測測定———MPN法法檢驗流流程（FDABAM）檢樣50g+450ml稀釋釋液適當十倍倍稀釋樣樣品選擇3個個適宜的的連續(xù)稀稀釋度的的樣品稀稀釋液，，每個稀釋釋度接種種三管LST肉肉湯（每每管9mlLST肉湯湯并加有有導管）），每管接種種1mL35℃，，24±2h~~48±2h沒有產(chǎn)氣氣管有有產(chǎn)產(chǎn)氣管報告陰性性接種BGLB肉肉湯管接接種EC肉湯湯35±±℃，，48±2h44..5±0.5℃℃（（水浴培培養(yǎng)）24±±2h~48±±2h查MPN表報告告結(jié)果產(chǎn)氣管接接種EMB平板板（35℃、18~24h））（大腸菌菌群）從EMB平板上上挑取5個可疑疑菌轉(zhuǎn)接接到PCA斜面，進行行革蘭氏氏染色、、IMVC生化化鑒定、、接種LST復檢產(chǎn)產(chǎn)氣查MPN表報告告結(jié)果（大腸桿桿菌）大腸菌群群測定———MPN法法檢驗幾幾點說明明MPN檢索表：：MPN為最大可可能數(shù)(MostProbableNumber))的簡稱。。這種方方法，對對樣品進進行連續(xù)續(xù)系列稀稀釋，加加入培養(yǎng)養(yǎng)基進行行培養(yǎng)，，從規(guī)定定的反應應呈陽性性管數(shù)的的出現(xiàn)率率，用概概率論來來推算樣樣品中菌菌數(shù)最近近似的數(shù)數(shù)值。MPN檢索表只只給了三三個稀釋釋度，如如改用不不同的稀稀釋度，，則表內(nèi)內(nèi)數(shù)字應應相應降降低或增增加10倍。初發(fā)酵和和證實試試驗：1）兩步法法進行了了兩次乳乳糖發(fā)酵酵試驗。。初發(fā)酵酵和證實實實驗所所用培養(yǎng)養(yǎng)基不同同，但都都是為了了證實培培養(yǎng)物是是否符合合大腸菌菌群的定定義，即即“在37℃分解乳糖糖產(chǎn)酸產(chǎn)產(chǎn)氣”。。LST中中提供了了磷酸鹽鹽緩沖體體系，氯氯化鈉可可維持滲滲透壓，，月桂基基硫酸鈉鈉可抑制制非大腸腸菌群的的生長，，這個緩緩沖蛋白白胨乳糖糖肉湯允允許“緩緩慢乳糖糖發(fā)酵（（Slowlactosefermentations））”來促促進菌體體產(chǎn)氣。。BGLB中膽膽鹽和煌煌綠可以以抑制革革蘭氏陽陽性細菌菌和除了了大腸菌菌群的很很多革蘭蘭氏陰性性細菌。。2）初發(fā)酵陽陽性管，，不能肯肯定就是是大腸菌菌群細菌菌，經(jīng)過過證實試試驗后，，有時可可能成為為陰性。。有數(shù)據(jù)表表明，食食品中大大腸菌群群檢驗步步驟的符符合率，，初發(fā)酵酵與證實實試驗相相差較大大。因此此，在實實際檢測測工作中中，證實實試驗是是必需的的。產(chǎn)氣量與與倒管：：在乳糖發(fā)發(fā)酵試驗驗工作中中，經(jīng)常常可以看看到在發(fā)發(fā)酵倒管管內(nèi)極微微少的氣氣泡（有有時比小小米粒還還?。?，，有時可可以遇到到在初發(fā)發(fā)酵時產(chǎn)產(chǎn)酸或沿沿管壁有有緩緩上上浮的小小氣泡。。實驗表表明，大大腸菌群群的產(chǎn)氣氣量，多多者可以以使發(fā)酵酵倒管全全部充滿滿氣體，，少者可可以產(chǎn)生生比小米米粒還小小的氣泡泡。如果果對產(chǎn)酸酸但未產(chǎn)產(chǎn)氣的乳乳糖發(fā)酵酵如有疑疑問時，，可以用用手輕輕輕打動試試管，如如有氣泡泡沿管壁壁上浮，，即應考考慮可能能有氣體體產(chǎn)生，，而應作作進一步步試驗。。不適于用用大腸菌菌群作為為糞便污污染指示示菌的食食品冷凍食品品經(jīng)射線照照射處理理的食品品pH較高高的食品品在上述食食品中大大腸菌群群的細菌菌比許多多腸道病病原微生生物更易易死亡。。大腸桿菌菌測定———EMB選選擇性分分離鑒別別EMB平平板典型型大腸桿桿菌菌落特特征：中心黑色或紫紅色，有或無綠色金屬光澤澤大腸桿菌菌測定———EMB選選擇性分分離鑒別別EMB是是一種弱弱選擇性性培養(yǎng)基基，一些些球菌也也可在該該培養(yǎng)基基上生長長；高壓滅菌菌可使得得美藍還還原從而而使培養(yǎng)養(yǎng)基的顏顏色呈不不均一橘橘黃色，，輕輕搖搖動培養(yǎng)養(yǎng)基可以以恢復原原有的正正常紫色色，傾注注平板前前應先搖搖勻；大腸桿菌菌在該培培養(yǎng)基上上并不一一定總是是呈現(xiàn)綠綠色的金金屬光澤澤；該培養(yǎng)基基受可見見光易使使其中的的成分氧氧化，儲儲存及培培養(yǎng)細菌菌時都應應在避光光條件。。菌名菌落形態(tài)大腸埃希氏菌紫黑色，有綠色金屬光澤肺炎克雷伯氏菌粉色，中心色深陰溝腸桿菌粉色，中心色深弗氏志賀氏菌無色鼠傷寒沙門氏菌無色糞鏈球菌無色大腸桿菌菌測定——革蘭蘭氏染色色基本原理理：革蘭氏染染色法是是細菌學學中廣泛泛使用的的一種重重要的鑒鑒別染色色法。1884年由丹丹麥醫(yī)師師Gram創(chuàng)立立。此法法可將細細菌分為為革蘭氏氏陰性菌菌和革蘭蘭氏陽性性菌兩大大類。革蘭氏染染色的機機理主要要是利用用兩類細細菌的細細胞壁成成分和結(jié)結(jié)構的不不同。革蘭氏陰陰性菌的細胞胞壁中含含有較多多的類脂脂質(zhì)，而而肽聚糖糖的含量量較少。。當用酒酒精或丙丙酮酸脫脫色時，，類脂質(zhì)質(zhì)被溶解解，增加加了細胞胞壁的通通透性，，使初染染后的結(jié)結(jié)晶紫和和碘的復復合物易易于滲出出，結(jié)果果細胞被被脫色，，經(jīng)復染染后，又又染上復復染液的的顏色。。而革蘭氏陽陽性菌細胞壁壁中肽聚聚糖的含含量多而而且交聯(lián)聯(lián)度大，，類脂質(zhì)質(zhì)含量少少，經(jīng)乙乙醇或丙丙酮洗脫脫后，肽肽聚糖層層的孔徑徑變小，，通透性性降低，，因此細細胞仍保保留初染染時的顏顏色。大腸桿菌菌測定——革蘭蘭氏染色色GramnegativeGrampositiveGramstraining大腸桿菌菌測定——革蘭蘭氏染色色基本步驟驟：將涂片在在火焰上上固定，，滴加結(jié)結(jié)晶紫染染液，染染1min，水水洗；滴加革蘭蘭氏碘液液，作用用1min，水水洗；滴加95%乙醇醇脫色約約15～～30s,直至至染色液液被洗掉掉，不要要過分脫脫色，水水洗；滴加番紅紅復染液液，復染染1min，水水洗、待待干、鏡鏡檢。結(jié)果：革革蘭氏陽陽性菌呈呈紫色，革蘭氏氏陰性菌菌呈紅色。大腸桿菌菌測定——生化化鑒定Testpositivenegativebiotype1biotype2reagentIndole紅色環(huán)不變色+-Kovacs’MR紅色不變色++甲基紅V-P玫瑰紅色環(huán)不變色--V-P甲、乙液Citrate生長不生長---IMViC生化化試驗金黃色葡葡萄球菌菌——生物學特特性金黃色葡葡萄球菌菌呈球形形，直徑0.8μμm左右，排排列成葡葡萄串狀，，無芽孢孢，無莢莢膜。革蘭氏染染色陽性性，但衰衰老、死亡或被被白細胞胞吞噬的的菌體，，常呈革蘭蘭氏陰性性。金黃色葡葡萄球菌菌——生長特性性金黃色葡葡萄球菌菌在肉湯湯中呈渾渾濁生長長，在胰胰酪胨大大豆肉湯湯內(nèi)有時時液體澄澄清，菌菌量多時時呈渾濁濁生長。。血平板上上金黃色色葡萄球球菌呈金金黃色，，有時也也為白色色，大而而突起、、圓形、、不透明明、表面面光滑，，周圍有有溶血圈圈。Baird-Parker平板上金金黃色葡葡萄球菌菌圓形突突起、光光滑、濕濕潤，顏色呈灰灰色到黑黑色，邊邊緣淡色色，周圍圍為一渾渾濁帶，，在其外外層有一一透明圈圈。用接接種針接接觸菌落落似有奶奶油樹膠膠的硬度度。金黃色葡葡萄球菌菌檢驗——方法適用用性MPN法：適用用于檢測測帶有大大量競爭爭菌的食食品及其其原料和和未經(jīng)處處理的含含少量金金黃色葡葡萄球菌菌的食品品。直接平板板計數(shù)法法：適用用于檢查查金黃色色葡萄球球菌數(shù)不不小于10/g（ml）的食品。。增菌培養(yǎng)養(yǎng)法：適適用于檢檢查含有有受損傷傷的金黃黃色葡萄萄球菌的的加工食食品。定量方法法定性方法法金黃色葡葡萄球菌菌檢驗——直接平板板計數(shù)法法檢樣（50g++450mL稀稀釋液））適當十倍倍稀釋樣樣品選擇2~~3個連連續(xù)適宜宜稀釋度度吸取1ml菌液液按照0.3mL、0.3mL、0.4mL分別別涂布于于3塊90mmBaird-Parker平平板上（做平行行試驗））35℃，，45~48h確證試驗驗報告或涂布于1塊140mm平板上FDABAM金黃色葡葡萄球菌菌檢驗——MPN法檢樣（50g++450mL稀稀釋液））適當十倍倍稀釋樣樣品選擇3個個適宜的的連續(xù)稀稀釋度的的樣品稀稀釋液，，每個稀釋釋度接種種三管10%NaClTSB肉肉湯，每管接種種1mL35℃，，48±2h從生長的的管中接接種1環(huán)環(huán)劃線于于Baird-Parker平板板上35℃，，48h確證試驗驗報告含1%丙酮酸鈉鈉FDABAM金黃色葡葡萄球菌菌確證試試驗1.凝固固酶試驗驗方法：從平板上上至少挑挑取1個可疑金金黃色葡葡萄球菌菌菌落，，移種到到TSB//BHI肉湯中，，置35℃培養(yǎng)18-24h。取肉湯培培養(yǎng)物0.3mL同0.5mL凝固酶試試驗兔血血漿充分分混合，，置35℃培養(yǎng)，定定時觀察察是否有有凝塊形形成，至至少觀察察6h。試驗中需需同時做做已知陽陽性和陰陰性對照照。結(jié)果判定定：以內(nèi)容物物完全凝凝固，使使試管倒倒置或傾傾斜時不不流動為為陽性。。部分凝凝固（2+和3+）的必須須進行生化鑒定定加以證實實。FDABAM金黃色葡葡萄球菌菌確證試試驗2.革蘭蘭氏染色色對所有的的可疑培培養(yǎng)物都都要進行行革蘭氏氏染色。。3.生化鑒定定過氧化氫氫酶試驗驗葡萄糖厭厭氧利用用試驗甘露醇厭厭氧利用用試驗金葡溶菌菌酶敏感感性試驗驗耐熱核酸酸酶試驗驗（輔助助）StaphylococcusaureusonDNaseAgarFDABAM2種葡萄球菌菌和微球球菌的典典型特性性特性S.aureusS.epidermidisMicrococci過氧化氫酶+++凝固酶+--耐熱核酸酶+--溶菌酶++-厭氧利用葡萄糖++-甘露醇+--ISO金黃色葡葡萄球菌菌檢驗——MPN法檢樣（xg+9xmL稀釋液液）適當十倍倍稀釋樣樣品選擇3個個適宜的的連續(xù)稀稀釋度的的樣品稀稀釋液，，每個稀釋釋度接種種三管modifiedGiolittiandCantonibroth，37℃，，24~48h從變黑或或出現(xiàn)黑黑色沉淀淀的管中中接種1環(huán)環(huán)培養(yǎng)物物于Baird-Parker平平板上37℃，，48h確證試驗驗報告接種10mL于10mL雙料肉湯湯，接種種1mL于9mL單料肉湯湯。小心的于于接種管管中培養(yǎng)養(yǎng)基頂部部傾注一一定量的的水瓊脂脂，使其其凝固形形成密封封塞。ISO金黃色葡葡萄球菌菌確證試試驗凝固酶試試驗結(jié)果判定定：-1+2+3+4+negativepositive沙門氏菌菌屬簡介介1880年E.Berth首先發(fā)現(xiàn)現(xiàn)傷寒沙沙門氏菌菌，1885年Salmon與Smith又分離出出豬霍亂亂沙門氏氏菌，以以后取Salmon氏之名為為本菌屬屬之名。。沙門氏菌菌屬是一一群符合合腸桿菌菌科定義義并與其其血清學學相關的的革蘭氏氏陰性、、需氧性性、無芽芽孢桿菌菌。本菌菌屬種類類繁多，，抗原結(jié)結(jié)構復雜雜，現(xiàn)已已發(fā)現(xiàn)2000多個血清型型，我國國已發(fā)現(xiàn)現(xiàn)血清型型近200個。沙門氏菌菌屬———生物學特特性形態(tài)特征征：革蘭氏陰陰性，大大小為1~3××0.4~0..9μm的兩端端鈍圓的的短桿菌菌，無芽芽孢，一一般無莢莢膜，除除雞沙門門氏菌和和雛沙門門氏菌以以外，都都有周身身鞭毛，，運動力力強。培養(yǎng)特性性：沙門氏菌菌需氧或或兼性厭厭氧，10-42℃℃都可生生長，最最適生長長溫度為為37℃℃，最適適pH為為6.8~7..8。營養(yǎng)瓊脂脂平板上上：35~37℃培養(yǎng)養(yǎng)18~~24h，其菌菌落大小小一般為為2~3mm，，光滑、、濕潤、、無色、、半透明明、邊緣緣整齊。。血平板上上：中等等大小的的灰白色色菌落。。生化特性性：絕大多數(shù)數(shù)沙門氏氏菌有規(guī)規(guī)律的發(fā)發(fā)酵葡萄萄糖產(chǎn)酸酸產(chǎn)氣，，但也有有不產(chǎn)氣氣者，不不發(fā)酵蔗蔗糖和側(cè)側(cè)金盞花花醇、不不產(chǎn)生吲吲哚、不不分解尿尿素。沙門氏菌菌屬——生物學特特性沙門氏菌菌屬的抗抗原菌體抗原原（O抗抗原）表面抗原原（K抗抗原）：：Vi抗抗原和M抗原鞭毛抗原原（H抗抗原）纖毛抗原原FDABAM沙門氏氏菌檢驗驗流程前增菌25g樣樣+225mL乳糖肉肉湯（肉制品品、肉副副產(chǎn)品、、動物產(chǎn)產(chǎn)品）勻質(zhì)2min，，室溫放放置60±5min混合均勻勻，測定定調(diào)節(jié)PH6..8±±0.235℃、、24±±2h選擇性增增菌0.1ml+10mlMM（（RV））1ml++10mlTTB42℃、、24h（水浴培培養(yǎng)）35℃、、24h43℃、、24h（水浴培培養(yǎng)）含菌量高高含含菌菌量低分離培養(yǎng)養(yǎng)劃線接種種選擇擇性培養(yǎng)養(yǎng)基（BS、XLD、、HE））35℃、、24~~48h（BS）生化鑒定定每個平板板挑取至至少2個個可疑菌菌（包括括典型和和非典型型各2個個）接種TSI三糖糖鐵、LIA賴賴氨酸鐵鐵高層斜斜面（LIA高層深深4cm）（松蓋以以保持有有氧條件件防止產(chǎn)產(chǎn)生過多多H2S）35℃、、24±±2h棄去尿尿素酶試試驗衛(wèi)衛(wèi)矛醇醇、氰氰化鉀鉀、丙二二酸鈉、、吲哚試試驗陽性陰性血清學血清學試試驗——沙門門氏菌的的分類報告結(jié)果果生鮮食物物、嚴重重污染的的食品和和動物飼飼料ISO6579沙門氏氏菌檢驗驗流程前增菌25g樣樣+225mLBPW勻質(zhì)37±1℃、18±±2h選擇性增增菌0.1ml+10mlRVS1ml++10mlMKTTn41.5±1℃、、24±±3h37±1℃、、24±±3h（水浴培培養(yǎng)）分離培養(yǎng)養(yǎng)劃線接種種選擇性性培養(yǎng)基基（XLD和第第二種選選擇性培培養(yǎng)基，，如BS）37℃、、24~~48h（BS）每個平板板挑取至至少5個個可疑菌菌進行純培養(yǎng)和確認試試驗37℃、、24±±3h生化鑒定定TSI、、尿素酶酶、賴氨氨酸脫羧羧酶、ββ-牛乳乳糖、V-P、、吲哚哚試驗血清學血清學試試驗——沙門門氏菌的的分類報告結(jié)果果ISO6579沙門氏氏菌生化化試驗表表試驗沙門氏菌屬傷寒A型副傷寒B型副傷寒C型副傷寒其他菌屬反應%b反應%b反應%c反應%c反應%bTSI葡萄糖產(chǎn)酸+100+100+++100TSI葡萄糖產(chǎn)氣-d0+100+++92TSI乳糖產(chǎn)酸-2-100---1TSI蔗糖產(chǎn)酸-0-0---1TSI硫化氫產(chǎn)生+97-10+++92尿素水解-0-0---1賴氨酸脫羧酶+98-0+++95β-牛乳糖反應-0-0---2eV-P反應-0-0---0吲哚反應-0-0---1b：百分率表明并不是所有分離到的沙門氏菌血清型都會顯示+或-的結(jié)果。c：這些百分率不能從現(xiàn)有的文獻中獲得。d：傷寒沙門氏菌不產(chǎn)氣e：亞利桑那亞型腸炎沙門氏菌為乳糖陽性或陰性反應，但通常β-牛乳糖反應陽性。沙門氏菌菌檢驗選選擇性分分離培養(yǎng)養(yǎng)XLD瓊瓊脂：FDABAM——典典型菌落落：粉色色菌落，，帶或不不帶黑色色中心。。許多沙沙門氏菌菌培養(yǎng)物物可呈現(xiàn)大的具具光澤的的黑色中中心或幾幾乎為全全部黑色色的菌落落?！堑涞湫途渎洌狐S色色帶或不不帶黑色色中心。。ISO———中心心黑色、、周圍由由于指示示劑顏色色的改變變而出現(xiàn)現(xiàn)紅色的的輕微透透明帶。。菌名菌落形態(tài)鼠傷寒沙門氏菌紅色，有黑心傷寒沙門氏菌紅色，有黑心弗氏志賀氏菌紅色大腸埃希氏菌黃色，有膽鹽沉淀環(huán)糞鏈球菌-沙門氏菌菌檢驗選選擇性分分離培養(yǎng)養(yǎng)BS瓊脂脂：FDABAM——典典型菌落落：產(chǎn)硫硫化氫菌菌落黑色色有金屬屬光澤、、棕褐色色或灰色色，菌落落周圍的培養(yǎng)養(yǎng)基通常常開始呈呈褐色，，但伴隨隨培養(yǎng)時時間的延延長而變?yōu)楹谏⒂杏袝灜h(huán)效效應；——非典典型菌落落：有些些菌株不不產(chǎn)生硫硫化氫，，形成灰灰綠色菌菌落，周周圍