選修實驗：細菌培養(yǎng)技術(shù)

實驗三：學(xué)習(xí)細菌培養(yǎng)的基本技術(shù)實驗原理：①要根據(jù)微生物的營養(yǎng)需要，采用相應(yīng)的配方配制培養(yǎng)基。②培養(yǎng)基除滿足微生物所需各種營養(yǎng)外，還要適宜的pH值。本實驗所用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基應(yīng)用廣泛，適于多種細菌的培養(yǎng)。④配置好的培養(yǎng)基必須經(jīng)過滅菌，一般采用高壓蒸汽滅菌。在整個細菌接種培養(yǎng)過程中，一般要求無菌操作。方法步驟：棉塞能防止雜菌污一、培養(yǎng)基的配制染,保證通氣良好稱量溶化調(diào)pH值培養(yǎng)基的分裝加棉塞趁熱分裝棉塞長度2/3在內(nèi)外加牛皮紙培養(yǎng)基高度為1/5掛上標簽高壓蒸汽滅菌的效果是細菌培養(yǎng)的關(guān)鍵。包扎加水加熱邊滴邊攪拌隨時用測pH值二、滅菌滅菌原理:依據(jù)高壓升溫使菌體細胞蛋白質(zhì)凝固變性失去生命力,將0.11MPa121C,維持30min徹底滅菌o、操作：加水、裝料加開水適當,試管口向上,不能太擠三、擱置斜面加熱、排氣升壓、保壓降壓、排氣,加熱至沸騰壓力至0.11MPa,T為121C壓力降至0,o排氣5～10min,關(guān)閉控制熱源，保壓30minT<100C開閥o當T接近50C，將試管擺在一根木棒上。培養(yǎng)基形成的斜面不超過試管總長度的一半。o四、接種①設(shè)備的準備和消毒：設(shè)備：無菌操作箱(無條件可直接在在酒精燈上)，接種環(huán)雙手75％酒精消毒熏蒸法或紫外燈滅菌灼燒法消毒微生物接種的各項操作要求必須在無菌條件下進行。用左手并排拿起有菌種的試管和培養(yǎng)試管靠近酒精燈火焰,旋松棉塞右手拿接種環(huán),在火焰上燒紅滅菌取下棉塞，并灼燒試管口一周接種環(huán)伸入試管，挑去少量菌體，立即抽出③接種：迅速將接種環(huán)插入培養(yǎng)試管中在斜面上由管底向管口連續(xù)輕劃幾道蛇形曲線（畫線要求：線要劃密一些,不要劃破培養(yǎng)基,不要使接種環(huán)接觸到管壁或管口,不重復(fù)劃）及時抽出接種環(huán)將試管口在火焰上灼燒，塞上棉塞熄滅酒精燈,菌種加熱倒掉五、保溫培養(yǎng)接種后，試管放在保溫箱中，25C下培養(yǎng)5～7(37C下培養(yǎng)24h)oo練習(xí)：一、選擇題1、下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是（）、防止雜菌污染2、制作細菌培養(yǎng)基時，pH值應(yīng)調(diào)為（、4.5～6B、7.4～7.63、下面的資料表明在各種培養(yǎng)基中細菌的生長（、C、M為簡單培養(yǎng)基，U、V、X、、Z代表加入培養(yǎng)培養(yǎng)基SCMSCM+V+ZSCM+U+YSCM+Z+XSCM+V+YSCM+U+XSCM+Y+ZB、消滅雜菌、培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D、滅菌必須在接種前）C、7.88D2～4）、、－、、－、、＋、、－、、＋、、－、、＋生長狀況、UBVC、YD、Z4、細菌培養(yǎng)基常在121C壓力鍋中滅菌，如果只是在100C的溫度下降細菌培養(yǎng)基滅菌，以下哪一種生oo物仍會存活（）、大腸桿菌、一種青霉C、枯草芽孢桿菌D、沙門氏菌5、下列操作與滅菌無關(guān)的是（、接種前用火焰灼燒接種環(huán)）B、接種前用酒精擦拭雙手C、培養(yǎng)基在50C時擱置斜面D、接種在酒精燈的火焰旁完成o6、培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口上加一棉塞，下圖中哪種加棉塞的操作是正確的（7、在用高壓蒸汽鍋滅菌時，其滅菌的正常壓力為（49KPaB98KPaC9800KPa8、高溫滅菌的原理是（））D9.8KPa）、每種微生物生長的最適溫度是一定的B、微生物對于高溫環(huán)境部適應(yīng)C、高溫破壞了細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸，影響其生命活動D、高溫降低了環(huán)境中氧的濃度9、在培養(yǎng)基的配制過程中，下列哪項操作是不正確的（）、趁熱降培養(yǎng)基分裝到潔凈的試管中，培養(yǎng)基高度為試管長度的1/5B、在溶化過程的最后要補加蒸餾水至100mLC、在調(diào)pH值時要隨時用pH試紙測pHD、試管加塞后，每10支用繩扎捆，在試管外掛上標簽，注明培養(yǎng)基名稱、配制日期和制作者姓名，就可以進行滅菌10、在斜面培養(yǎng)基上接種時，其正確的操作順序是（）①用左手大拇指、食指和無名指夾住菌種試管和待接種的斜面試管，管口并齊，使斜面向上成水平狀態(tài)②右手擰送棉塞，但不取下③在火焰邊用右手無名指和小指夾兩個棉塞，將它們?nèi)∠?，同時左腕轉(zhuǎn)動，燒灼管口一周。④將接種環(huán)伸入管內(nèi)，讓環(huán)先接觸培養(yǎng)基上未長菌的部位，使環(huán)冷卻，然后輕輕挑取少量菌體，立即將接種環(huán)抽出。⑤右手拿接種環(huán)，在火焰上灼燒滅菌。⑥在火焰旁迅速將沾有菌體的接種環(huán)伸到培養(yǎng)基的底部，由里向外輕輕畫蛇形細線。⑦抽出接種環(huán)，再用火焰燒灼管口，并在火焰上方將棉塞塞上。、①②③④⑤⑥⑦、①②⑤③④⑥⑦C、①③②④⑤⑥⑦D、②③①④⑤⑥⑦11、下列有關(guān)碳源的敘述不正確的是（）、碳源主要用于構(gòu)成微生物的細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物B、某些碳源可以作為微生物的主要能源物質(zhì)C、蛋白質(zhì)一定不能做碳源D、不同種類的微生物的碳源可能不同12、細菌數(shù)目上升的最快時期和活菌數(shù)目的高峰期分別是（）、對數(shù)期、穩(wěn)定期B、穩(wěn)定期、穩(wěn)定期C、對數(shù)期、對數(shù)期D、穩(wěn)定期、對數(shù)期13、菌種鑒定的重要依據(jù)是（）、細菌的大小、性狀顏色B、菌落的大小、形狀、顏色C、有無鞭毛D、培養(yǎng)基的不同二、簡答題1、為使培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)，需要配置好的各營養(yǎng)液成分的液體里加入，溶化冷卻即可。溶液進行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值，用濃度為1mol/L的2、擱置斜面時培養(yǎng)基溫度不能或，否則培養(yǎng)基會變成。應(yīng)趁熱將試管放置成斜面形，使管內(nèi)培養(yǎng)基形成斜面的長度不超過試管總長的。3、微生物接種時各項操作必須在上用灼燒法滅菌，雙手用條件下進行。因此必須在中操作。接種環(huán)要在％的酒精消毒。接種時將滅菌的接種環(huán)挑去一點，迅速插入培養(yǎng)基試管里，在斜面上由向連續(xù)劃幾道箱中在線，然后將試管口在火焰上下培養(yǎng)，即可見灼燒，塞上斜面上出現(xiàn)。接種后的試管要放入。45mL1～3號試管中。再各滴加幾滴0.01%亞甲基藍溶液。把上述試管在溫暖環(huán)境中放置40min1號試管內(nèi)水樣由藍色變?yōu)闊o色，2號試管內(nèi)水樣變?yōu)闇\藍色，3號試管內(nèi)水樣的顏色無變化。請回答：（11號、2號試管內(nèi)水樣中大量繁殖的生物是（2）上述生物的數(shù)量與水樣中的（3）12號試管內(nèi)水樣變色的原因是。。含量成正比。5、以下是一個證明食物腐敗是由細菌引起的實驗，閱讀材料和圖示，回答相關(guān)的問題。②在3只三角燒瓶里各注入50mL肉（豆）湯。第1個瓶不同瓶塞，第2個瓶用藥棉塞緊，第3個瓶用緊有S形彎玻③把3只燒瓶放入盛水的鍋子里隔水加熱，使鍋子里的水沸騰5min3o平均溫度在20C以上）④以后，逐天觀察肉（豆）湯的變化。結(jié)果，一天后，不加塞燒瓶里的肉湯已渾濁，液面有一層薄膜，這是細菌的群體，叫做菌落。瓶內(nèi)可以有臭味，說明肉湯已腐敗。加藥棉瓶塞燒瓶的肉湯幾天后也開始腐敗。加藥棉塞和S型玻管的燒瓶維持時間最長，但肉湯也將終將腐敗。（1）本實驗采用的是什么實驗法？（2）不加塞的瓶內(nèi)肉湯為什么會腐?。浚?）加藥棉瓶塞燒瓶內(nèi)的肉湯幾天為什么也開始腐?。浚?）實驗操作的第③步是起作用。答案：一、選擇題1、B2、B9、B3、C4、C5、C6、A7D8、B10、C11、C12、A13、B二、簡答題1、瓊脂2、太低3、無菌棉塞NaOH固定HCl1/2酒精燈無菌箱恒溫755－7菌落菌落管底管口曲2541）