醫(yī)學遺傳學課(診斷)8課件

1、遺傳病的診斷Diagnosis of Genetic Disease遺傳病的診斷是一項復雜的工作，需要各學科的密切配合常規(guī)診斷：即通過對病人的病史、癥狀、體征和實驗室、影像學等檢查建立初步診斷。特殊診斷：利用系譜分析、染色體和染色質(zhì)檢查、基因分析、特殊酶和蛋白質(zhì)生化分析等檢查進行診斷。臨床診斷癥狀前診斷出生前診斷一、病史、癥狀和體征病史采集：遵循準確、詳細的原則家族史婚姻史生育史臨床診斷癥狀和體征遺傳病特有的癥狀和體征：外貌特征、身體發(fā)育快慢、智力增進情況、性器官及第二性征發(fā)育是否異常系統(tǒng)、完整三代以上各個成員的資料死者的死因調(diào)查及核查近親婚配、死胎、流產(chǎn)和新生兒死亡等系譜分析去偽存真患者及家

2、屬提供資料遺傳咨詢醫(yī)師核實資料兩個DMD家系DMD家系1DMD家系2系譜分析孟德爾式遺傳病AD遺傳病外顯率：不完全外顯、延遲顯性表現(xiàn)度：不規(guī)則顯性性別影響：從性顯性、限性顯性基因多效性系譜分析孟德爾式遺傳病AR遺傳病遺傳異質(zhì)性系譜分析非孟德爾式遺傳病線粒體遺傳病母系遺傳晚發(fā)、進行性疾病系譜分析多基因病非孟德爾式遺傳病出生缺陷慢性晚發(fā)性疾病家族聚集性系譜分析動態(tài)突變特殊遺傳方式三、細胞遺傳學檢查即染色體檢查或稱核型分析智能發(fā)育不全、生長遲緩或伴有其他先天畸形者夫婦中有染色體異常，如平衡易位、嵌合體等家族中已發(fā)現(xiàn)染色體異?；蛳忍旎蝹€體多發(fā)性流產(chǎn)的婦女及其丈夫原發(fā)閉經(jīng)和女性不育癥者無精子癥和男性不

3、育癥者有兩性內(nèi)外生殖器畸形者疑為先天愚型的患兒及其父母原因不明的智力低下伴有大耳、大睪丸和多動癥者35歲以上的高齡孕婦染色體檢查的指征1、性染色質(zhì)檢查X性染色質(zhì)檢查Y性染色質(zhì)檢查2、染色體顯帶技術(shù)3、染色體熒光原位雜交(FISH)四、生物化學檢查苯丙酮尿癥, PKU酶活性檢查PAH肝臟血液濾片法Guthrie testFeCl3顯色反應苯丙酮酸綠色Guthrie test上海：19811987年對284 396名新生兒進行PKU篩查，查出PKU患兒15名，高苯丙氨酸血癥4名。（一）核酸分子雜交斑點雜交直接將待測DNA或RNA樣品固定于小孔徑硝酸纖維素膜或尼龍膜上，再與已標記的探針雜交South

4、ern印跡雜交斑點雜交（一）核酸分子雜交最經(jīng)典和應用最廣泛的雜交方法，用于分析DNASouthern印跡雜交斑點雜交Northern印跡雜交（一）核酸分子雜交用于分析mRNASouthern印跡雜交斑點雜交Northern印跡雜交原位雜交（一）核酸分子雜交（二）、聚合酶鏈式反應(PCR)PCR-ASO：PCR-等位基因特異性寡核苷酸探針雜交 使用只有幾十個核苷酸的探針，檢測被檢DNA中的同源序列。由于探針比較短，當被檢DNA序列與探針不完全互補，甚至只要有一個堿基的差異，雜交分子就不能穩(wěn)定形成，因此該方法的靈敏度非常高，特異性也非常好。PCR-ASO ASO斑點雜交PKU, AR正常探針突變探

5、針（二）、聚合酶鏈式反應(PCR)PCR-ASO：PCR-等位基因特異性寡核苷酸探針雜交PCR-RFLP：PCR-限制性片段長度多態(tài)性連鎖分析PCR 利用一對或數(shù)對特異性引物，將目標DNA擴增；酶切 利用某些限制性內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物;電泳 利用瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠分離酶切后的PCR產(chǎn)物，根據(jù)電泳圖譜判斷結(jié)果。PCR-RFLPRFLP連鎖分析PAHSph11.0 kbSphSph9.7 kbPAHSph11.0 kbSphSph7.0 kbSph2.7 kb正常突變RFLP連鎖分析PKU，AR1 21 2Sph11.0 Kb 9.7 Kb 7.0 Kb（二）、聚合酶鏈式反應PCR-ASO

6、：PCR-等位基因特異性寡核苷酸探針雜交PCR-RFLP：PCR-限制性片段長度多態(tài)性連鎖分析可變數(shù)目串聯(lián)重復序列（VNTR）和短串聯(lián)重復序列（STR）多態(tài)性分析STR連鎖分析X R DXS84 geneABCDESTR連鎖分析XR DXS84 geneABCDESTR連鎖分析ABCDESTR連鎖分析ABCDE（二）、聚合酶鏈式反應PCR-ASO：PCR-等位基因特異性寡核苷酸探針雜交PCR-RFLP：PCR-限制性片段長度多態(tài)性連鎖分析可變數(shù)目串聯(lián)重復序列（VNTR）和短串聯(lián)重復序列（STR）多態(tài)性分析PCR-SSCP：PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性當雙鏈DNA變性為兩條單鏈后，各自會在中性條件下形

7、成各自特定的空間構(gòu)象，因而在電泳時將在不同的位置上出現(xiàn)各自電泳條帶。如果DNA序列發(fā)生變化，甚至只有一個堿基變化，空間構(gòu)象也有可能發(fā)生變化，電泳條帶也隨之變化。PCR-SSCP1989年，Orita等建立的PCR產(chǎn)物單鏈DNA凝膠電泳技術(shù)。（二）、聚合酶鏈式反應PCR-ASO：PCR-等位基因特異性寡核苷酸探針雜交PCR-RFLP：PCR-限制性片段長度多態(tài)性連鎖分析可變數(shù)目串聯(lián)重復序列（VNTR）和短串聯(lián)重復序列（STR）多態(tài)性分析PCR-SSCP：PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性PCR產(chǎn)物變性梯度凝膠電泳（DGGE）（二）、聚合酶鏈式反應PCR-ASO：PCR-等位基因特異性寡核苷酸探針雜交PCR-

8、RFLP：PCR-限制性片段長度多態(tài)性連鎖分析可變數(shù)目串聯(lián)重復序列（VNTR）和短串聯(lián)重復序列（STR）多態(tài)性分析PCR-SSCP：PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）PCR產(chǎn)物變性梯度凝膠電泳（DGGE） （三）、DNA測序 （四）、基因芯片技術(shù) 癥狀前診斷常染色體顯性遺傳病的雜合子個體往往發(fā)病年齡延遲，可通過系譜分析及DNA檢查作出癥狀前診斷出生前診斷在遺傳咨詢的基礎(chǔ)上，對有高風險的妊娠進行產(chǎn)前診斷，確認正常胎兒則繼續(xù)妊娠至足月生產(chǎn)，是預防遺傳病患兒出生的有效手段。需產(chǎn)前診斷的對象：夫婦之一有染色體畸變，特別是平衡易位攜帶者，或者染色體正常，但出生過染色體異?；純旱姆驄D；35

9、歲以上的高齡孕婦；夫婦之一有開放性神經(jīng)管畸形，或出生過這種畸形患兒的夫婦；夫婦之一有先天性代謝缺陷，或出生過這種患兒的夫婦；X連鎖遺傳病基因攜帶者孕婦；原因不明的習慣性流產(chǎn)的孕婦；羊水過多的孕婦；夫婦之一有致畸因素接觸史的孕婦；具有遺傳病家族史，又系近親婚配的孕婦。 雖然具備了上述條件，但如果出現(xiàn)先兆流產(chǎn)、妊娠時間過長、有出血傾向者，則不宜做有創(chuàng)性產(chǎn)前診斷，另外應拒絕僅要求做胎兒性別的檢查。注意：羊膜腔穿刺有創(chuàng)性檢查用注射器經(jīng)腹取羊水時間：妊娠1020周，最適宜時間1516周流產(chǎn)率：0.51%羊膜腔穿刺有創(chuàng)性檢查絨毛取樣經(jīng)宮頸或經(jīng)腹在絨毛區(qū)取絨毛作活檢時間：妊娠79周流產(chǎn)率：1%羊膜腔穿刺有創(chuàng)性檢查絨毛取樣臍靜脈穿刺超聲檢查有異常、羊水培養(yǎng)失敗時采用時間：妊娠1921周流產(chǎn)率：23%羊膜腔穿刺有創(chuàng)性檢查絨毛取樣臍靜脈穿刺胎兒鏡檢查無創(chuàng)性檢查母體血清三項篩查對具有較高妊娠風險的孕婦檢測血清AFP、uE3、HCG時間：妊娠1520周神經(jīng)管缺陷： AFPDown綜合征： A