LCMS及制備HPLC使用教程-課件

1、LCMS及制備HPLC操作教程Zewei WangLCMS及制備HPLC操作教程Zewei Wang流動相的準(zhǔn)備樣品的準(zhǔn)備日常維護常規(guī)LCMS操作數(shù)據(jù)分析注意事項流動相的準(zhǔn)備樣品的準(zhǔn)備日常維護常規(guī)LCMS操作數(shù)據(jù)分析注意事流動相的準(zhǔn)備常用流動相：水、乙腈、甲醇常用添加劑：甲酸、乙酸、三氟乙酸；醋酸銨；氨水溶劑必須為HPLC級，超純水（18 .m）；普通有機溶劑須過濾添加劑須為HPLC級，一般添加0.1%抽濾、超聲除氣泡濾膜： cancel Instrument turn off spray chamber清洗噴霧室前先關(guān)閉噴霧室，待溫度降下來后再操作MSD Tun清洗噴霧室，使用Agilent

2、提供的無紡布或棉簽擦洗擦洗時請勿碰到噴霧針針尖清洗噴霧室，使用Agilent提供的無紡布或棉簽擦洗擦洗時請為節(jié)約無紡布，每次擦洗時裁剪一小塊使用為節(jié)約無紡布，每次擦洗時裁剪一小塊使用Checktune前先更改打印機設(shè)置，F(xiàn)ile printer setup Checktune前先更改打印機設(shè)置，F(xiàn)ile prchecktune: MSD Tune OK Tune checktunechecktune: 常規(guī)LCMS操作單個樣品時，選方法 5-100% Common.M RunControl Sample Info，填好后待壓力平穩(wěn)再點擊開始。初始壓力100Bar左右，當(dāng)100% MeCN時，壓

3、力50Bar左右。常規(guī)LCMS操作單個樣品時，選方法 5-100% CommoLCMS及制備HPLC使用教程-課件多個樣品連續(xù)進樣選sequence：AAA.SSequence sequence parameters多個樣品連續(xù)進樣Sequence sequence Table無論是單個樣品還是多個，請估算好時間，做完后及時調(diào)回Flush模式以節(jié)約溶劑和氮氣！Sequence sequence Table無論是數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析LCMS及制備HPLC使用教程-課件LCMS及制備HPLC使用教程-課件LCMS及制備HPLC使用教程-課件File Extract IonsFile Extract I

4、onsEICEICMS中常見的加合離子Positive：M+H 1M+Na 23M+NH4 18M+K 39Dimer2M+H 12M+Na 232M+NH4 182M+K 39Negative:M-H -1M+Cl- 35.37M+HCOO- 45M+TFA- 113Dimer2M-H -12M+Cl- 35.372M+HCOO- 452M+TFA- 113MS中常見的加合離子Negative:注意事項樣品一定要用濾膜過濾，此外樣品中最好不要有三乙胺?。ㄈ野吩贚CMS中殘留嚴重），如果含有三乙胺，請先用酸處理下樣品再送樣。LCMS中的方法請不要隨意更改！液相小瓶蓋用過2-3次后及時更換新的

5、。樣品瓶請勿用洗衣粉、洗潔精等表面活性劑洗滌！清洗用乙醇或甲醇超聲清洗。請估算好做樣時間，做完樣后及時調(diào)回Flush的方法以節(jié)約溶劑和氮氣。若有人排隊等待做樣就通知下一個人來做樣。注意事項樣品一定要用濾膜過濾，此外樣品中最好不要有三乙胺！（制備HPLC使用教程流動相（水和乙腈）最好抽濾除氣泡，再超聲和LCMS不同，流動相中可添加非揮發(fā)性緩沖鹽如磷酸鹽、硼酸鹽，但用完后一定要用純水、純乙腈沖洗體系，防止鹽析出造成管路堵塞?。_洗先用50-50的比例沖洗3 CV，再用5-95沖洗2 CV）樣品最好用初始比例的流動相溶解，如不能溶可加入DMSO促溶，不要用純甲醇或純乙腈溶解樣品！樣品濃度一般在20-

6、30 mg/ml由于制備HPLC沒有脫氣機，使用前一定要purge除去管路氣泡制備HPLC使用教程流動相（水和乙腈）最好抽濾除氣泡，再超聲LCMS及制備HPLC使用教程-課件色譜柱的選擇Prep HPLC Column: Waters XTerra Prep MS C18 column, 10 m, 19x 250 mm, CV: 71 mL最好選擇與制備HPLC色譜柱相同孔徑的分析型色譜柱來摸索分離條件！色譜柱的選擇Prep HPLC Column: Waters制備HPLC方法的建立最好先用分析HPLC摸索一下流動相條件最佳：優(yōu)化出單一恒定的比例（省去平衡時間，樣品量大時可節(jié)省流動相，縮短時間）其次：直接建立一個梯度，確保沖洗體積有1 CV以上（樣品分的很開如兩個峰大于1 CV ）如何優(yōu)化：先走梯度，若A、B兩峰在流動相比例為60% B左右分開，則直接選擇60% B走。若此時兩峰分得更不開，就降低比例如55%、50%直到摸索出最優(yōu)條件，此條件可以作為分離條件。制備HPLC方法的建立最好先用分析HPLC摸索一下流動相條件Sample： 20mg/mLMobile phase：A, H2O + 0.1% HCOOH; B, ACN. 70%B, 10ml/minColumn: Waters XTerra Prep MS C18 column