高效液相色譜法的應(yīng)用

1、高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用與進展摘要：主要介紹了高效液相色譜法在藥物鑒別、藥物雜質(zhì)檢查、藥物含量測定等 方面具體應(yīng)用以及展望了高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；HPLC ；藥物分析；聯(lián)用技術(shù)Abstract: Mainly introduced the high performance liquid chromatography in drug discrimination, drug impurity test, determination of the content and concrete application and the prospect of

2、 the high performance liquid chromatography in pharmaceutical analysis application prospect.Keywords： high performance liquid chromatography , HPLC ,pharmaceutical analysis，hyphenated techniques 引言：高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography HPL0 又 稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色 譜”等。高效液相色譜是色

3、譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸 液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵 入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實 現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領(lǐng) 域中重要的分離分析技術(shù)。HPLC在國內(nèi)和國外的藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用范圍很廣， 發(fā)展速度也很快，尤其在我國，近十幾年來HPLC方法越來越受到重視。HPLC在 藥物的分析中的應(yīng)用主要是鑒別、有關(guān)物質(zhì)的檢查、有效成分及含量的測定 本文對高效液相色譜法（HPLC）技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用進行概述并展望其應(yīng)用 前景。1在藥物分析中的應(yīng)用 1.1在藥

4、物鑒別中的應(yīng)用在HPLC法中，藥物組分的保留時間與其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)有著直接的關(guān)系，不同 的藥物由于結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的差異在色譜圖上的出峰順序不同，是定性的重要參數(shù)， 可用于藥物的鑒別。如在中國藥典收載的藥物利福平的鑒別項下規(guī)定：在含量測 定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留 時間一致。如中國藥典收載的利福平的鑒別項下規(guī)定：在含量測定項下記錄的色 譜圖中，供試品主峰的保留時間應(yīng)與對照品主峰的保留時間一致。1.2在雜質(zhì)檢查中的應(yīng)用高效液相色譜法（HPLC）分離效能高，靈敏，在藥物的雜質(zhì)檢查中應(yīng)用廣 泛。主要用于藥物中有關(guān)物質(zhì)的檢查?！坝嘘P(guān)物質(zhì)”是指藥物中存在的合成原料、 中

5、間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物等物質(zhì)，這些物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與藥物相似，含量很 低，只有采用色譜的方法才能將其分離并檢測。若雜質(zhì)是已知的，又有雜質(zhì)的對 照品，可用雜質(zhì)對照品做對照進行檢查。若雜質(zhì)是未知的，可以采用主成分自身 對照法或峰面積歸一化法進行檢查。例如倪沖、廖玉山等利用高效液相色譜法 （HPLC）測定曲尼司特滴眼液中曲尼司特及其有關(guān)物質(zhì)的含量。李旭仁、李霞 等采用高效液相色譜法（HPLC）測定甲磺酸培氟沙星片含量及有關(guān)物質(zhì)。劉向 紅、冷曉燕等采用高效液相色譜法（HPLC）測定芐達賴氨酸滴眼液的有關(guān)物質(zhì)。 金鴿、李雪等采用高效液相色譜法（HPLC）測定芐達賴氨酸滴眼液的含量和有關(guān) 物質(zhì)。1.3在含

6、量測定中的應(yīng)用用高效液相色譜法測定含量可以消除藥物中的雜質(zhì)，制劑中的附加劑及共 存的藥物對測定的干擾。中藥材及其制劑組成復雜，基中不少有效成分的含量測 定也越來越多地采用了高效液相色譜法。趙龍、王增壽利用高效液相色譜法 （HPLC）測定貝特令中維生素A的含量.趙蕾鐘淮濱利用高效液相色譜法（HPLC） 測定安降片中葛根素的含量。此外，高效液相色譜法（HPLC）在農(nóng)藥檢測、中藥材指紋圖譜us以及藥物 代謝動力學等方面的研究也發(fā)揮著重要的作用。2應(yīng)用前景一一HPLC及其聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用近年來，HPLC儀的組成部件：輸液泵、色譜柱、檢測器都有新的發(fā)展 尤 其是檢測器方面的發(fā)展，如二極管陣列檢

7、測器已普遍應(yīng)用，蒸發(fā)光散射檢測器對 無近紫外吸收的藥物，提供了一種有效的高靈敏度的方法。隨著各個部件的改進, 也出現(xiàn)了多種聯(lián)用技術(shù)。譬如，有人曾用HPLC2示差折光檢測法(RID)分析了麥 芽糖等7種糖類及軟飲料中果糖、葡萄糖、檸檬酸等成分。而RID靈敏度較 低，受溫度影響較大。GAMES等3曾用HPLC2熱噴霧(TS)2質(zhì)譜(MS),同時分離 和測定了前列腺素D2 , beclomethasone diproinate , ranitididine2N2oxide 三個藥物的相對分子質(zhì)量。小角度激光散射檢測器(LALLSPD)是近代HPLC領(lǐng)域 中出現(xiàn)的一種新型檢測技術(shù)。HPLC2LALLS

8、PD可以快速檢測多糖、蛋白質(zhì)類高聚 物的相對分子質(zhì)量及相對分子質(zhì)量分布參數(shù)，可不需要標準品或外標要求10。 在藥物雜質(zhì)檢測中，HPLC2MS測定和HPLC2核磁共振(NMR)測定都是簡便、快速 的方法，但HPLC2NMR聯(lián)用技術(shù)中NMR測定不受HPLC分離過程中使用的緩沖鹽溶 液的限制，并可以提供大量的結(jié)構(gòu)信息。楊春等10用HPLC2NMR聯(lián)用技術(shù)中的連 續(xù)流動和停止流動兩種模式對萘哌地爾中雜質(zhì)進行檢測，根據(jù)HNRM, H2HCOSY譜 完成了主要雜質(zhì)12萘環(huán)2丙三醇結(jié)構(gòu)鑒定HPLC2NMR是解決合成藥物中雜質(zhì)結(jié)構(gòu) 確證的簡便、快速方法。楊鳳仙等uh應(yīng)用HPLC2電噴霧(ESI)2MS法，分析

9、了水和 土壤中有機磷酸化合物異丙基磷酸和異丙基磷酸丙酯。采用了選擇離子監(jiān)測(SIR) 技術(shù)，排除了基質(zhì)干擾，回收率分別為100 %和90 %,靈敏度1 ng -uL HPLC2MS聯(lián)用在體內(nèi)藥物代謝研究、臨床藥物檢測和生物大分子測定有著廣泛的 用途。微柱液相色譜的研究也十分活躍，由于分析所需的樣品量及流動相的消耗 大大下降，檢測的靈敏度又大大提高，使HPLC分析更加靈敏準確、簡便快速。 特別是聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，使之在藥物分析生命科學領(lǐng)域的應(yīng)用更具重要意義。小結(jié)綜上所述，HPLC具有專屬性強、靈敏度高等特點，既可用于分離也可用于 定量分析，適用于各種各樣的有機化合物。因此在藥物成分的分離與測定方面

10、能 夠充分發(fā)揮其它分析方法無與倫比的優(yōu)勢。而且隨著計算機軟件的開發(fā)、專家系 統(tǒng)的應(yīng)用、檢測手段的進步、各種聯(lián)用技術(shù)的出現(xiàn)以及其他一些相關(guān)問題的解決， HPLC在醫(yī)藥研究中將會發(fā)揮越來越重要的作用。參考文獻1國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.北京：化學工業(yè)出版社，2010.2中國藥典，1990,二部.3倪沖，繆玉山2陳國明，王晨霞.高效液相色譜法測定曲尼司特滴眼液中曲2008, Sep;尼司特及其有關(guān)物質(zhì)的含量J.東南大學學報（醫(yī)學版） 27（ 5） : 2008, Sep;李緒倫，李霞，曾杰，劉映倩.HPLC法測定甲磺酸培氟沙星片含量及有關(guān)物質(zhì)J.兒科藥學雜志，2009,15（3）:49-50.劉向紅、冷曉燕，許靖.高效液相色譜法（HPLC）測定芐達賴氨酸滴眼液的 有關(guān)物質(zhì)J.石油化工應(yīng)用，2008,27（2）:65-67.金鴿,李雪,王曉明，方成玲,金描真.高效液相色譜法測定芐達賴氨酸滴眼液 的含量和有關(guān)物質(zhì)J.安徽醫(yī)藥，2010（1）:41-42.高珣陳曉輝韓木南畢開順.高效液相色譜法測定肌肽滴眼液中L-肌肽的含 量及有關(guān)物質(zhì)J.現(xiàn)代生 物醫(yī)學進展，2009（9） :2345-2346.顏素華，李健和，曹俊華.高效液相色譜法測定法莫替丁注射液中的有關(guān)物 質(zhì)和含量J.中國現(xiàn)代醫(yī) 學雜志，2010，20（11）:1661-1668.趙龍,王