馬拉色菌屬的分類(lèi)及其在幾種皮膚病的分布情況

1、馬拉色菌屬的分類(lèi)及其在幾種皮膚病的分布情況發(fā)表時(shí)間：2010-09-12發(fā)表者：皮膚科(訪問(wèn)人次：24)中華皮膚科雜志2000年第5期第33卷論著作者：熊琳冉玉平周光平代亞林單位：610041成都，華西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚性病科關(guān)鍵詞：馬拉色霉菌屬；分類(lèi)法；皮膚疾病【摘要】目的研究馬拉色菌屬的分類(lèi)及其在一些皮膚病的分布情況。方法以 標(biāo)準(zhǔn)株作對(duì)照，用生理生化學(xué)及形態(tài)學(xué)方法將150株來(lái)源于花斑癬(29株)、 馬拉色菌毛囊炎(16株)、脂溢性皮炎(49株)、甲真菌病(33株)及正常人 皮膚(23株)的馬拉色菌進(jìn)行分類(lèi)及描述，并分析了各菌種在一些皮膚病的分 布情況。結(jié)果共分離出4個(gè)菌種：合軸馬拉色

2、菌65株、糠秕馬拉色菌13株、 鈍形馬拉色菌1株、球形馬拉色菌71株。其中合軸馬拉色菌和球形馬拉色菌各 占43.3%和47.3%；馬拉色菌毛囊炎中全部 為球形馬拉色菌。結(jié)論此分類(lèi)系統(tǒng) 為經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便及可應(yīng)用的馬拉色菌屬分類(lèi)鑒定系統(tǒng)；球形馬拉色菌與馬拉色菌毛 囊炎密切相關(guān)。Study on Taxonomy of the Genus Malassezia and the Distribution of it in Some DermatosesXIONG Lin, RAN Yuping, ZHOU Guangping, et al.(Department of Dermato-venereolog

3、y, First Hospital, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041)Abstract Objective To study the taxonomy of Malassezia and distribution of the it in some dermatoses. Methods One hundred and fifty strains of Malassezia yeasts from pityriasis versicolor (29 strains), Malassezia folliculit

4、is (16 strains), seborrheic dermatitis (49 strains), onychomycosis (33 strains), and healthy individuals(23 strains) were studied, according to physiological and morphological features in culture, and compared to standard strains. Results 4 species of Malassezia yeasts including M.sympodialis (65 st

5、rains), M.furfur (13 strains), M.obtusa (1 strain) and M.globosa (71 strains) were found, and M.sympodialis and M.globosa were accounted for 43.3% and 47.3% respectively. M.globosa were found in Malassezia folliculitis only. Conclusion The methods described in this study represent an economical, sim

6、ple approach which is available for identification of Malassezia species. There is a close correlation between M.globosa and Malassezia folliculitis.【Key words Malassezia Classification Skin diseases馬拉色菌屬(Malassezia)是人類(lèi)及溫血?jiǎng)游锲つw的常駐菌群，與花斑癬、 馬拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎、特應(yīng)性皮炎及某些銀屑病有關(guān)。近年來(lái)還有引起 甲感染和系統(tǒng)感染的報(bào)道。該菌屬的多形性已為人所知。我

7、們以標(biāo)準(zhǔn)株作對(duì) 照，用生理生化學(xué)及形態(tài)學(xué)方法對(duì)150株臨床分離的馬拉色菌進(jìn)行分類(lèi)和描述， 并分析了各菌種在不同皮膚病的分布情況。材料和方法一、菌株臨床分離株：從本科真菌實(shí)驗(yàn)室選擇馬拉色菌150株，其來(lái)源分別為：花 斑癬29株、馬拉色菌毛囊炎16株、脂溢性皮炎49株、甲真菌病33株及正常人 23株。標(biāo)準(zhǔn)株：合軸馬拉色菌(M.sympodialis CBS 7222)、糠秕馬拉色菌(M.furfur CBS 1878、M.furfur CBS 7019)、斯洛菲馬拉色菌(M.slooffiae CBS 7956)、鈍形馬拉色菌(M.obtusa CBS 7876)、球形馬拉色菌(M.globosa

8、 CBS 7966)、限制性馬拉色菌(M.restricta CBS 7877)由法國(guó)巴斯德研究所Gueho 教授惠贈(zèng)。二、培養(yǎng)基Leeming和Notman培養(yǎng)基：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%蛋白月東、0.5%葡萄糖、0.1% 酵母浸膏、0.4%牛膽鹽、0.1%甘油、0.05%單硬脂酸甘油脂、0.05%吐溫60、 1%全脂牛奶、2%橄欖油、1.2%瓊脂、0.5%放線菌酮、0.05%氯霉素。七葉苷(Esculin)瓊脂培養(yǎng)基：上述培養(yǎng)基加入0.2%枸櫞酸鐵、0.1%七 葉苷。沙堡培養(yǎng)基：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%蛋白東、4%葡萄糖、1.2%瓊脂、0.5%放 線菌酮、0.025%氯霉素。：3*1月品：也酒.有注財(cái)狀山煽的

9、劇即國(guó)秋仙裾，孔烈色提前尤步，fi 45 mn Im原段；擔(dān)電*I 5住邊我為嫁峭知暗隋此忡活們出 直徑4-3 e值 v：幃庠孔袖也為 *出逝狀必:毫夠 降建曹店M.相It.禮哽住.直捶工z 山非?S俄牲WL右徂迎狀 訕?biāo)觳┭叟f承浙跚.點(diǎn)tfiMa,lUS色.h 糜皿圖1馬拉色菌屬各菌種在Leeming和Notman培養(yǎng)基，32C培養(yǎng)10d后的菌落形態(tài), ； fr斌的抱也足制昨出Stn小，薄球.叩很 mi rJ r& r-購(gòu) 恥皿巧傳a我rft2蟲(chóng)匡儉；.,大小布等句起亍，iyiw.,，！旺I ； 麻色的.前培囪 5弛（-I：.耳.膨叫q %代喧;EMW圖2馬拉色菌屬各菌種細(xì)胞形態(tài)（50%派克

10、墨水染色，X1000）三、菌種分離、培養(yǎng)用刮屑法或膠帶法在患者典型皮損或正常人面部取材，接種于Leeming和 Notman培養(yǎng)基平板中，32C培養(yǎng)714d。將經(jīng)50%派克墨水染色后確定為馬拉 色菌的第一代培養(yǎng)物在同種培養(yǎng)基平板上畫(huà)線培養(yǎng)分離單菌落，取單菌落增菌保 存。四、菌種鑒定待鑒定菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株同時(shí)實(shí)驗(yàn)。鑒定前48h活化菌種。鑒定方法如下:將菌種接種于沙堡培養(yǎng)基上32C培養(yǎng)714d,能在沙堡培養(yǎng)基上生長(zhǎng)者 為厚皮馬拉色菌。過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)：用無(wú)菌棉簽挑一塊菌落置于無(wú)菌載玻片上，滴加3%過(guò) 氧化氫溶液，產(chǎn)生氣泡為陽(yáng)性?？设b定出限制性馬拉色菌。吐溫試驗(yàn)及PEG35蓖麻油(CremophorEL

11、)試驗(yàn)：取一環(huán)菌種與5mL生 理鹽水充分混合后，取2mL菌懸液與16mL沙堡培養(yǎng)基(溫度降至4045C)混 合制成含菌平板。用直徑3mm打孔器在平板上無(wú)菌打孔5個(gè)，分別加入100%吐 溫 20、100%吐溫 40、100%吐溫 60、100%吐溫 80 及 100%PEG35 蓖麻油， 32C培養(yǎng)714d。在以上5種脂源周?chē)寄苌L(zhǎng)的為糠秕馬拉色 菌；高濃度吐 溫20和PEG35蓖麻油周?chē)鸁o(wú)生長(zhǎng)者為合軸馬拉色菌；吐溫80周?chē)L(zhǎng)的面積 明顯小于其他吐溫，同時(shí)PEG35蓖麻油周?chē)鸁o(wú)生長(zhǎng)者為斯 洛菲馬拉色菌。吐 溫20、吐溫80周?chē)鸁o(wú)生長(zhǎng)者為鈍形、球形和限制性馬拉色菌。七葉苷分解試驗(yàn)：取一環(huán)菌種接

12、種于七葉苷瓊脂培養(yǎng)基上32C培養(yǎng)2 3d。能使培養(yǎng)基變黑至少1/3的為合軸馬拉色菌和鈍形馬拉色菌，只能使培養(yǎng) 基頂端變黑的為糠秕馬拉色菌，可疑陽(yáng)性可為厚皮馬拉色菌和糠秕馬拉色菌，陰 性可為糠秕馬拉色菌、斯洛菲馬拉色菌、球形馬拉色菌和限制性馬拉色菌。形態(tài)學(xué)鑒定：主要用于區(qū)分鈍形馬拉色菌和球形馬拉色菌。孢子為球形者 鑒定為球形馬拉色菌，孢子為筒形者鑒定為鈍形馬拉色菌。形態(tài)學(xué)觀察：將所得各種馬拉色菌在Leeming和Notman培養(yǎng)基平板上畫(huà) 線分離出單菌落，32C培養(yǎng)10d，觀察菌落形態(tài)；用無(wú)菌接種針挑取單菌落涂片， 用50%派克墨水染色后觀察孢子形態(tài)并照相；用2.5%戊二醛固定，按常規(guī)方法 處理

13、標(biāo)本后在掃描電鏡(AMRAY1000 B型)和透射電鏡(JEM100SX型)下觀 察并照相。結(jié)果一、150株馬拉色菌的鑒定結(jié)果經(jīng)生理生化學(xué)及形態(tài)學(xué)方法鑒定出合軸馬拉色菌65株、糠秕馬拉色菌13 株、鈍形馬拉色菌1株、球形馬拉色菌71株，未發(fā)現(xiàn)厚皮馬拉色菌、斯洛菲馬 拉色菌和限制性馬拉色菌。馬拉色菌屬各菌種吐溫試驗(yàn)和PEG 35蓖麻油試驗(yàn)沙 堡培養(yǎng)基上32C培養(yǎng)10d，合軸馬拉色 菌在高濃度吐溫20和PEG35篦麻油周 圍無(wú)生長(zhǎng)，其余吐溫周?chē)L(zhǎng)良好；糠秕馬拉色菌在所有脂源周?chē)L(zhǎng)均良好； 鈍形馬拉色菌僅在吐溫60周?chē)L(zhǎng)，其余脂源周?chē)鸁o(wú)生長(zhǎng)；球形馬拉色菌在所 有脂源周?chē)鶡o(wú)生長(zhǎng)。馬拉色菌屬各菌

14、種七葉苷分解試驗(yàn)：七葉苷瓊脂培養(yǎng)基上 32C培養(yǎng)72h，合軸馬拉色菌和鈍形馬拉色菌使培養(yǎng)基完全變黑，糠秕馬拉色 菌使培養(yǎng)基輕微變黑；球形馬拉色菌使培養(yǎng)基不變色。二、各菌種形態(tài)學(xué)特征觀察圖3馬拉色菌屬各菌種細(xì)胞形態(tài)（掃描電鏡，X10000）3a:合軸馬拉色菌，卵形孢子，可見(jiàn)合軸出芽方式3b:鈍形馬拉色菌，筒形的孢子3c:糠秕馬拉色菌，卵形孢子3d:球形馬拉色菌，球形孢子圖4馬拉色菌屬各菌種細(xì)胞形態(tài)（透射電鏡，X10000）各菌種均有典型的內(nèi)壁鋸齒狀結(jié)構(gòu)4a：合軸馬拉色菌外：糠秕馬拉色菌如：鈍形馬拉色菌4d:球形馬拉色菌馬拉色菌各菌種菌落形態(tài)見(jiàn)圖1，鏡下各菌種孢子形態(tài)見(jiàn)圖2,掃描電鏡圖 象見(jiàn)圖3,

15、透射電鏡圖象見(jiàn)圖4。三、各菌種在幾種皮膚病的分布來(lái)源于花斑癬的29株中，合軸馬拉色菌14株（48.3%）、糠秕馬拉色菌2 株（6.9%）、球形馬拉色菌13株（44.8%）；來(lái)源于馬拉色菌毛囊炎中的16 株全部為球形馬拉色菌；來(lái)源于脂溢性皮炎的49株中，合軸馬拉色菌14株 （28.6%）、糠秕馬拉色菌4株（8.2%）、鈍形馬拉色菌1株（2.0%）、球 形馬拉色菌30株（61.2%）；來(lái)源于甲真菌病的33株中，合軸馬拉色菌22株 （66.6%）、糠秕 馬拉色菌5株（15.2%）、球形馬拉色菌6株（18.2%）； 來(lái)源于正常人的23株中，合軸馬拉色菌15株（65.2%）、糠秕馬拉色菌2株 （8.7%

16、）、球形馬拉色菌6株（26.1%）。討論自1846年花斑癬的病原體被認(rèn)識(shí)后，其命名及分類(lèi)一直比較混亂。通過(guò)對(duì) 各菌種形態(tài)學(xué)和生理生化學(xué)特性的研究以及隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA分析等的應(yīng)用， 該菌迄今被分為7個(gè)種。本文應(yīng)用Guillot等6的方法，以標(biāo)準(zhǔn)株為對(duì)照， 對(duì)馬拉色菌進(jìn)行生理生化學(xué)及形態(tài)學(xué)分類(lèi)，得到4個(gè)種：合軸馬拉色菌、糠秕馬 拉色菌、鈍形馬拉色菌及球形馬拉色菌，所占比例分別為43.3%、8.7%、0.7% 和47.3%。由此發(fā)現(xiàn)從本實(shí)驗(yàn)室分離的菌種主要為合軸馬拉色菌和球形馬拉色 菌。從形態(tài)學(xué)觀察來(lái)看，各菌種菌落形態(tài)不同，特別是鈍形馬拉色菌和球形馬 拉色菌菌落形態(tài)特征明顯，可作為鑒定指標(biāo)之一；

17、各菌種生長(zhǎng)10d后，其孢子形 態(tài)具有特征性，容易鑒別。掃描電鏡觀察顯示形態(tài)上的差異與光學(xué)顯微鏡下基 本相同，特別是球形馬拉色菌的形態(tài)與冉玉平等的報(bào)道完全相同。馬拉色菌各菌種在皮膚病中的分布：甲真菌病及正常人中2/3為合軸馬拉色 菌；花斑癬中主要為合軸馬拉色菌和球形馬拉色菌；脂溢性皮炎中3/5為球形馬 拉色菌；馬拉色菌毛囊炎中全部為球形馬拉色菌。提示球形馬拉色菌與馬拉色菌 毛囊炎密切相關(guān)。志謝法國(guó)巴斯德研究所Gueho教授為本研究提供標(biāo)準(zhǔn)菌株并指導(dǎo)；我科李薇 醫(yī)師、法醫(yī)系彭雪梅老師和病理科張杰老師對(duì)本文的支持四川省學(xué)術(shù)和技術(shù)帶頭人培養(yǎng)基金資助參考文獻(xiàn)冉玉平，周光平，李薇，等從一例甲真菌病患者病甲

18、中分離出糠秕孢 子菌臨床和實(shí)驗(yàn)研究報(bào)告.中華皮膚科雜志，1998，31： 276-279.李薇綜述.糠秕馬拉色菌的系統(tǒng)感染.國(guó)外醫(yī)學(xué)皮膚性病學(xué)分冊(cè)，1997, 23：263-265.van Belkum A, Boekhout T, Bosboom R.Monitoring spread of Malassezia infections in a neonatal intensive care unit by PCR- mediated genetic typing. J Clin Microbiol, 1994， 32:2528- 2532.Gueho E, Midgley G, Guillot J. The genus Malassezia with descr, + iption of four new species. Antonie Van Leeuwenhoek, 1996， 69:337 - 355.Guillot J, Gueho E, Lesourd M, et al. Identification of Malassezia speci