最好有緩沖液存可使得反應最大課件

1、enzymeenzyme-Chymotrypsin catalyzed cleavage of the C-N bond has a maximum rate near pH 8 that is twice as great as the rate near pH 7 or pH 9.最好有緩衝液存可使得反應最大-Chymotrypsin catalyzed cleav細胞培養(yǎng)一般步驟，資列以Human fibroblasts作為例子Cultures for Human fibroblasts (HF, doubling time = 24 h)A. DMEM 培養(yǎng)液1. 5X DMEM me

2、dium 100 ml2. 100X Glutamic acid 5 ml3. 100X streptomycin / penicillium 5 ml4. 5.5% NaOHCO3 10-20 ml 5. Hyclone fetal calf serum (FCS, 56C, 30min ) 50 ml6. Hepes 緩衝液(1.5 M pH=7.4) 5 ml7. 加 ddH2O 至 500ml細胞培養(yǎng)一般步驟，資列以Human fibroblastThe Henderson-Hasselbalch Equation HA= H+ A- Ka=H+*A-/HA H+=Ka*HA/A- -

3、logH+=-logKa log( HA/A-) pH=pKa + log(A-/HAHenderson-Hasselbalch Equation for an acid 可應用在處理酸鹼平衡系統(tǒng)並用來配製緩衝溶液。當共軛酸鹼的濃度相同時，則pH=pKa The Henderson-Hasselbalch Equa緩衝溶液就是對於外界添加酸或鹹至溶液中，其pH值的變化量不大，而當溶液處於pKa時，則具大的緩衝能力。下圖胺基丙酸(alanine)水溶液在pKa值2.74及9.8時有最大的緩衝能力，在等電點(PI)時緩衝能力最低，溶於水時，胺基丙酸帶有未質(zhì)子化的羧基(-COO-)及質(zhì)子化的胺基(-

4、NH3+)，pH值等於6，約為兩者之pKa中間，其滴定曲線如圖。緩衝溶液就是對於外界添加酸或鹹至溶液中，其pH值的變化量不大最好有緩沖液存可使得反應最大課件The Henderson-Hasselbalch Equation for a base B + H2O = BH+ + OH- Kb=BH+*OH-/B log kb=log(BH+/B)+logOH- log Kw log Ka = log(BH+/B)+logOH-) pKa-log (BH+/B)= logOH-log Kw pKa+log(B/BH+)=-(- logOH-log Kw=-pOH+14 pH= pKa+log(B

5、/BH+) The Henderson-Hasselbalch Equa土壤的緩沖性能有哪些？土壤的緩衝性質(zhì)是指當外界環(huán)境產(chǎn)生巨大變動時，土壤仍能維持其大部分之原來性質(zhì)或只是略微變動而已，而土壤具緩衝能力的多寡主要與土壤的粘粒及有機質(zhì)含量有關，粘粒及有機質(zhì)含量越高者，其緩衝能力越高。此緩衝性質(zhì)可用來說明當添加大量石灰於土壤時，土壤的酸鹼性並不會造成巨大的改變，而施肥時也有類似的結(jié)果。土壤的緩沖性能有哪些？常用的緩衝劑叫tris依附錄B BH+的Ka=8.075Tris hydrochloride BH+Cl-BH+Cl-=BH+Cl- BH+=B+H+常用的緩衝劑叫trisNaOCl溶於水中調(diào)

6、緩衝至pH6.2,OCl-/HOCl=?HOCl=H+OCl-,pH=pKa+(OCl-/HOCl)6.2=7.53+log (OCl-/HOCl)OCl-/HOCl=10(6.2-7.53)=0.047NaOCl溶於水中調(diào)緩衝至pH6.2,溶解12.43克的tris(FM 121.136)及加4.67克的tris chloride (FM 157.597)於1升水中的pH12.43/21.36=0.01026 M=tris=B4.67/157.597=0.0296 M=BH+pH=pKa+log(B/BH+) =8.075+log(0.0126/0.0296) =8.61 溶解12.43克的

7、tris(FM 121.136)及加4.6加12mL 1.0 M HCl入前頁的溶液中，pH？當強酸加入弱鹼時，幾乎完全反應至BH+ B + H+ = BH+ tris From HClmoles 始0.1026 0.012(0.012L*1M) 末0.1026 0 0.0296 -00.012 +0.012 0.0906 0.0416 pH=pKa+log(0.0906/0.0416)=8.41若加入沒有緩衝能力的液體則pH=1.93加12mL 1.0 M HCl入前頁的溶液中，pH？最後體積為250毫升，pH 7.6，內(nèi)含10克的tris hydrchloride (BH+，F(xiàn)W=157.

8、597, BH+ 的pKa =8.075)，須添加多少毫升的0.5M NaOH。 10 /157.597=0.0635 mol BH+ + OH- = B始 0.0635 x 0末 0.0635-x 0 xpH=pKa + log (mol B/ mol BH+)7.6=8.075+log(x/(0.0635-x)10-0.475=x/(0.0635-x)=0.335 x=0.0159 mol0.0159/y=0.5 y=0.0318 L=31.8 mL 最後體積為250毫升，pH 7.6，內(nèi)含10克的tris hA buffer resists changes in pH because t

9、he added acid or base is consumed by the buffer. As the buffer is used up, it becomes less resistant to changes in pH. A buffer resists changes in pH最好有緩沖液存可使得反應最大課件pH=pKa maxmum buffer capacityThe useful pH range of a buffer is usually considered to be pKa1pH valuepH=pKa maxmum buffer capacityT練習 H

10、A=H+ + A-Ka=10-5 HA+A-=10.01 H+ OH- 加入 新的pH形成。 pH=pH的改變例如：混合0.0383mol 的A- 及 0.9617 mol的HA起始的pH3.6, 加人0.01 mol的OH- 則pH的改變 pH=3.7053.705-3.6=0.105練習 HA=H+ + 最好有緩沖液存可使得反應最大課件細胞培養(yǎng)一般步驟，資列以Human fibroblasts作為例子Cultures for Human fibroblasts (HF, doubling time = 24 h)A. DMEM 培養(yǎng)液1. 5X DMEM medium 100 ml2. 1

11、00X Glutamic acid 5 ml3. 100X streptomycin / penicillium 5 ml4. 5.5% NaOHCO3 10-20 ml 5. Hyclone fetal calf serum (FCS, 56C, 30min ) 50 ml6. Hepes 緩衝液(1.5 M pH=7.4) 5 ml7. 加 ddH2O 至 500ml細胞培養(yǎng)一般步驟，資列以Human fibroblast溴甲酚綠 在 pH小於4.7為黃色，大於4.7為藍色 acid-base indicator pH=pKa maxmum buffer capacity溴甲酚綠 在 pH小於4.7為黃色，大於瑞香草酚藍， pH小於1.7為紅色，1.7-8.9為黃色，大於8.9為藍色瑞香草酚藍， pH小於1.7為紅色，1.7-8.9為黃色，以Thymol blue 為例 Transition range Acid Base colorThymol blue 1