結核分枝桿菌(1)課件

1、一、 生物學性狀 形態(tài)與染色結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，大小14X0.4m。牛分枝桿菌則比較粗短。分枝桿菌屬的細菌細胞壁脂質(zhì)含量較高，約占干重的60%，特別是有大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，可影響染料的穿入。 分群（Mitchson假說）A菌群：快速繁殖，巨噬細胞外和肺空洞干酪液化部分；B菌群：半靜止狀態(tài)，巨噬細胞內(nèi)和空洞璧壞死組織中；C菌群：半靜止狀態(tài)，可突然間歇生長。D菌群：休眠狀態(tài)，不繁殖，數(shù)量很少。染色分枝桿菌一般用齊尼（Ziehl- Neelsen)抗酸染色法，以5% 石炭酸復紅加溫染色后可以染上，但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍復染，則分枝桿菌呈紅色，而其他細菌和背

2、景中的物質(zhì)為藍色。 培養(yǎng)特性 專性需氧。最適溫度為37，低于30不生長。結核分枝桿菌細胞壁的脂質(zhì)含量較高，影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，故生長緩慢。在一般培養(yǎng)基中每分裂1代需時1824h，營養(yǎng)豐富時只需5h。常用的有羅氏（Lowenstein-Jensen）固體培養(yǎng)基，內(nèi)含蛋黃、甘油、馬鈴薯、無機鹽和孔雀綠等?？兹妇G可抑制雜菌生長，便于分離和長期培養(yǎng)。蛋黃含脂質(zhì)生長因子，能刺激生長。根據(jù)接種菌多少，一般24周可見菌落生長。菌落呈顆粒、結節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色，不透明。耐藥性在固體培養(yǎng)基中對常用的含異煙肼1mg、鏈霉素10mg、利福平50mg能生長的結核分枝桿菌為耐藥菌。耐藥菌株毒力有所減弱。異煙肼可

3、影響細胞壁中分枝菌酸的合成，誘導結核分枝桿菌成為L型,此可能是耐異煙肼的一種原因。藥物敏感試驗表明對異煙肼耐藥，而對利福平和鏈霉素大多仍敏感。二、致病性結核分枝桿菌不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素。其致病性可能與細菌在組織細胞內(nèi)大量繁殖引起的炎癥，菌體成分和代謝物質(zhì)的毒性以及機體對菌體成分產(chǎn)生的免疫損傷有關。致病物質(zhì)與莢膜、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)有關。故結核標本用4% NaOH消化時，一般細菌很快殺死，但結核分枝桿菌可耐受數(shù)十分鐘。結核分枝桿菌入侵后莢膜還可抑制吞噬體與溶酶體的融合。脂質(zhì) 據(jù)實驗研究細菌毒力可能與其所含復雜的脂質(zhì)成分有關，特別是糖脂更為重要。索狀因子 ： 是分枝菌酸和海藻糖結合的一種糖脂。能使細菌在液體

4、培養(yǎng)基中呈蜿蜒索狀排列。此因子與結核分枝桿菌毒力密切相關。它能破壞細胞線粒體膜，影響細胞呼吸，抑制白細胞游走和引起慢性肉芽腫。若將其從細菌中提出，則細菌喪失毒力。磷脂：能促使單核細胞增生，并使炎癥灶中的巨噬細胞轉變?yōu)轭惿掀ぜ毎?，從而形成結核結節(jié)。 硫酸腦苷脂：可抑制吞噬細胞中吞噬體與溶酶體的結合，使結核分枝桿菌能在吞噬細胞中長期存活。蠟質(zhì)D:是一種肽糖脂和分枝菌酸的復合物，可從有毒株或卡介苗中用甲醇提出，具有佐劑作用，可激發(fā)機體產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應。免疫性免疫機制結核分枝桿菌是胞內(nèi)感染菌，其免疫主要是以T細胞為主的細胞免疫。T細胞不能直接和胞內(nèi)菌作用，必須先與感染細胞反應，導致細胞崩潰，釋放出結

5、核分枝桿菌。機體對結核分枝桿菌雖能產(chǎn)生抗體，但抗體只能與釋出的細菌接觸起輔助作用。 結核分枝桿菌侵入呼吸道后，由于肺泡中80%90% 是巨噬細胞，10% 是淋巴細胞（T細胞占多數(shù)）；原肺泡中未活化的巨噬細胞抗菌活性弱，不能防止所吞噬的結核分枝桿菌生長，反可將結核分枝桿菌帶到他處。但可遞呈抗原，使周圍T淋巴細胞致敏。 結核的免疫屬于感染免疫(infection immunity)，又稱有菌免疫，即只有當結核分枝桿菌或其組分存在體內(nèi)時才有免疫力。一旦體內(nèi)的結核分枝桿菌或其組分全部消失，免疫也隨之不存在。隨著機體對結核分枝桿菌產(chǎn)生保護作用的同時，也可以看到有遲發(fā)型超敏反應的產(chǎn)生，二者均為T細胞介導。

6、近來研究表明結核分枝桿菌誘導機體產(chǎn)生免疫和超敏反應的物質(zhì)不同。超敏反應主要由結核菌素蛋白和蠟質(zhì)共同引起，而免疫則由結核分枝桿菌核糖體RNA引起。二種不同抗原成分激活不同的T細胞亞群釋放出不同的淋巴因子所致。結核菌素試驗結核菌素試驗是應用結核菌素進行皮膚試驗來測定機體對結核分枝桿菌是否能引起超敏反應的一種試驗。1.結核菌素試劑：舊結核菌素：系將結核分枝桿菌接種于甘油肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)48周后加熱濃縮過濾制成。稀釋2 000倍，每0.1ml含5u。目前都用純蛋白衍化物，PPD有二種：人結核分枝桿菌制成的PPD-C和卡介苗制成的BCG-PPD。每0.1ml含5u。2.試驗方法與意義：常規(guī)試驗分別取2種

7、PPD 5個單位注射兩前臂皮內(nèi)，4872h后: 硬結4mm者為陰性； 5-9mm為弱陽性； 10-19mm為陽性； 20mm或雖20mm，但局部出現(xiàn)水泡和淋巴管炎，為強陽性。 若PPD-C側紅腫大于BCG-PPD側為感染。反之，BCG-PPD側大于PPD-C側，可能系卡介苗接種所致。陰性反應表明未感染過結核分枝桿菌，但應考慮以下情況： 感染初期，因結核分枝桿菌感染后需4周以上才能出現(xiàn)超敏反應 老年人 嚴重結核患者或患有其他傳染病，如麻疹，水痘導致的細胞免疫低下 獲得性細胞免疫低下，如艾滋病或腫瘤等用過免疫抑制劑者。 涂片法抗酸桿菌（）：連續(xù)觀察300視野未發(fā)現(xiàn)；抗酸桿菌（）：連續(xù)觀察300視野發(fā)現(xiàn)1-3條;抗酸桿菌（1）：1-9條/100視野抗酸桿菌（2）：1-9條/10視野抗酸桿菌（3）：1-9條/1視野抗酸桿菌（4）：10條/1視野培養(yǎng)羅氏培養(yǎng)基，一般需2-6周，陽性結果隨時報告，8周無菌生長，報為陰性結果，陽性結果按生長菌落占斜面1/4,1/2,3/4和全部劃分1+到4+快速診斷一般涂片檢查菌數(shù)需5x1034/ml,培養(yǎng)需1x102/ml,標本中菌數(shù)少于此數(shù)時不易獲得陽性結果，且培養(yǎng)需時較長。目前已將多聚酶鏈反應（PCR）擴增技術應用于結核分枝桿菌DNA鑒定，每ml中只需