神經(jīng)通路追蹤技術(shù)課件

1、神經(jīng)通路追蹤技術(shù)PPT制作人：舒洪玲材料查找與修改：楊君嬋、李夢(mèng)嫻、舒洪玲、黃艷雙班級(jí)：11級(jí)生物科學(xué)1班什么是神經(jīng)通路？ 神經(jīng)通路是從感受器到大腦皮質(zhì)或從大腦皮質(zhì)至效應(yīng)器的神經(jīng)元鏈，作為神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)的通路，稱(chēng)神經(jīng)通路。神經(jīng)傳 感覺(jué)傳導(dǎo)通路（上行傳導(dǎo)通路）：從感受導(dǎo)通路 器到大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元鏈。 運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)道（下行傳導(dǎo)通路）：從大腦皮 皮質(zhì)到效應(yīng)器的神經(jīng)元鏈。 那么，傳導(dǎo)速度這樣快，科學(xué)家們是通過(guò)什么技術(shù)來(lái)研究的呢？研究一般思路給與神經(jīng)元以某種物質(zhì)，追蹤它的輸送及其輸送后在神經(jīng)元其它部分的定位。應(yīng)用一些組織化學(xué)方法來(lái)顯示中樞神經(jīng)通路-如熒光法。Golgi染色法 方法:將動(dòng)物灌注固定后取腦并將全腦

2、浸于Golgi染液中2周,然后浸于30%蔗糖中;經(jīng)過(guò)蒸餾水洗滌、氨化、酸性堅(jiān)膜定影液反應(yīng)、蒸餾水再洗滌,然后切片，采用100微米厚的震動(dòng)切片。經(jīng)上升梯度酒精脫水、透明,裱片后觀(guān)察。 目的：研究神經(jīng)元之間的鄰近關(guān)系以及樹(shù)突、軸突的配布。HRP法的基本用法：識(shí)別突觸傳入沖動(dòng)的來(lái)源 將HRP注入軸突終末某區(qū)，它即被攝取，并經(jīng)軸突逆行送到神經(jīng)胞體，從而追蹤突觸傳入沖動(dòng)的來(lái)源和去處。確定傳出投射 注射HRP到灰質(zhì)區(qū)，可使注射區(qū)的神經(jīng)元胞體攝取示蹤劑并經(jīng)軸索順行輸送到突觸終末。神經(jīng)元的Golgi樣染色。Methods rely on a substances incorporation into the

3、neuron, its transport, and its subsequent localization in other part of the neuron;Histochemical methods.注意事項(xiàng)給藥 加壓注射、離子投入和軸索損傷后標(biāo)記。動(dòng)物存活時(shí)間 逆行輸送速度：50-120mm/天，胞體內(nèi)活性：2-4天。 順行輸送速度：100-300mm/天。固定和切片 1%多聚甲醛于1.5戊二醛，一般為冰凍切片。HRP的選擇 游離HRP; 結(jié)合HRP(氨基酸、凝集素、某些細(xì)菌毒素等可提高其靈敏度數(shù)十倍）。常見(jiàn)神經(jīng)元被HRP標(biāo)記程度 1977年Kuypers等利用軸漿流逆向輸送，將熒

4、光素作為示蹤劑，用不同的熒光素分別注入兩個(gè)不同部位雙標(biāo)記神經(jīng)元，可在不同波長(zhǎng)的激發(fā)光照射下，使神經(jīng)元胞體顯示出兩種不同顏色的熒光。常用的熒光素有：FITC(綠色), TRITC(紅色)熒光素逆行標(biāo)記法熒光逆行標(biāo)記法簡(jiǎn)單、靈敏，可研究神經(jīng)元的側(cè)枝投射。但切片易褪色，不易控制注射范圍和避免過(guò)路纖維的攝取。放射性核素示蹤法 放射性核素示蹤法是一種利用神經(jīng)元軸漿運(yùn)輸現(xiàn)象進(jìn)行放射性示蹤劑標(biāo)記，用自顯影方法顯示神經(jīng)元與終末或神經(jīng)元間聯(lián)系的方法。 它的一個(gè)突出優(yōu)點(diǎn)是過(guò)路神經(jīng)纖維幾乎無(wú)標(biāo)記，而過(guò)路纖維問(wèn)題正是辣根過(guò)氧化物酶軸突逆行追蹤法所難以避免的。放射性核素示蹤法的主要步驟放射性示蹤溶液的配置（3H-氨基酸） 放射性示蹤劑引入（注射法、電泳法） 存活期、固定（10%甲醛溶液）、切片、貼片 涂布原子核乳膠或感光材料 曝光（密閉的暗盒中進(jìn)行） 顯影、定影、染色（Nissl染液） 放射自顯