藥用動物學第五章1課件

1、第四章 動物藥的采制與活性成分的篩選1 動物藥的采集與炮制 2 活性篩選第一節(jié) 動植物藥的采制1中藥的采集與貯藏 采收原則如下 :（）全草、莖枝及葉類藥物 （）根和根莖類藥物 （）花類藥物 （）果實類藥物 （）種子類藥物 (）樹皮和根皮類藥物 動物藥，一般潛藏在地下的小動物，宜在夏秋季捕捉，如蚯蚓、蟋蟀等；大動物雖然四季皆可捕捉，但一般宜在秋冬季獵取，不過鹿茸必須在雄鹿幼角末角化時采取。注意下列幾點 （）留根保種 （）充分利用 （）適當種植 貯藏 1 藥物在采集以后，都應采取一定的加工處理，以便貯藏 。2 洗凈切斷 3 及時放在日光下曬干，或陰干，或烘干，分別保藏。 4 動物藥及臟器組織如蘄蛇

2、、烏梢蛇、蜈蚣、地鱉蟲、胎盤等，在烘干后，應放在貯有石灰的缸中，以保持干燥；并放在冷暗干燥的地方，以防蟲蛀或腐爛。5 劇毒藥物要另行貯藏保管，防止發(fā)生事故。 生半夏、生天南星有毒，用生姜、明礬脆制，可解除毒性；又如巴豆有劇毒，去油用霜，可減少毒性。 地黃生用性寒涼血，蒸制成熟地則微溫而補血；何首烏生用潤暢通便、解瘡毒，制熟能補肝腎、益精血。 將植物類藥物切碎，便于煎煮；礦物類藥物煅，便于研粉。又如某些生藥在采集后必須烘焙，使藥物充分干燥，以便貯藏。 藥物在采集后必須清除泥沙雜質(zhì)和非藥用的部分；有些海產(chǎn)品與動物類的藥物需要漂去咸味及腥味等。2炮制的方法 （1）洗 （2）漂 （3）泡 （4）漬 （

3、5）水飛 （6）煅 :直接火; 燜煅 （7）炒 :清炒;麩炒 ;炒炭 洗 是將原藥放在清水中，經(jīng)過洗滌去凈藥物表面的泥沙雜質(zhì)，從而達到潔凈衛(wèi)生的目的。應注意浸洗的時間不要太長，以防止有效成分溶于水中。漂 將有腥氣（如龜板、鱉甲、烏賊骨）或有咸味（如昆布、海藻）或有毒性（如烏頭、附子）的藥物，可利用多量清水反復浸漂，經(jīng)常換水，則能漂去這些氣味或減少毒性。 漬 在藥物上噴灑少量清水，讓水分漸漸滲透而使藥物柔軟，便于切片。某些藥物浸泡后藥性易于走失的，不宜用此法. 水飛 是研粉方法之一，適用于礦石和貝殼類不易溶解于水的藥物如朱砂(硫化汞)等，目的是使藥物粉碎得更加細膩，便于內(nèi)服和外用。在水飛前先將藥

4、物打成粗末，然后放在研缽內(nèi)和水同研，傾取上部的混懸液，然后再將沉于下部的粗末繼續(xù)研磨，這樣反復操作，研至將細粉放在舌上嘗之無渣為度。水飛并可防止粉末在研磨時飛揚，以減少損耗。煅 煅的作用主要是將藥物通過烈火直接或間接煅燒，使它質(zhì)地松脆，易于粉碎，充分發(fā)揮藥效。 直接火：適用于礦石和貝殼類不易碎裂的藥物如磁石、牡蠣等。將藥物放在鐵絲篩網(wǎng)上，置于無煙的烈火中煅燒，煅的程度視藥物性質(zhì)不同而定。礦石類藥物必須煅至紅色為度；貝殼類藥物則煅至微紅冷卻后呈灰白色。炒 炒是炮制加工中常用的一種加熱法，是將藥物放于鍋內(nèi)加熱，用鐵鏟不斷鏟動，炒至一定程度取出。 炒的方法 清炒：不加輔料，用文火將藥物炒至微焦發(fā)出焦

5、香氣味為度。 麩炒：將藥物（飲片）加蜜炙麩皮同炒，拌炒至片子呈微黃色為度。 以上兩種炒法，主要目的是緩和藥性。加其它輔料拌炒，按用藥的不同要求有酒炒、醋炒、姜汁炒等等。 炒炭：系用較旺火力，將藥勿炒至外焦似炭、內(nèi)里老黃色（或棕褐色）而又不灰化，俗稱為“炒炭存性”，大多為增加收澀作用。炮 炮與炒炭基本相同，但炮要求火力猛烈，操作動作要快，這樣可使藥物（一般須切成小塊）通過高熱，達到體積膨脹松胖，如干姜即用此法加工成為炮姜炭。 煨 煨的主要作用在于緩和藥性和減少副作用。 常用的簡易煨法是將藥物用草紙包裹二、三層，放在清水中浸濕，置文火上直接煨，煨至草紙焦黑內(nèi)熟取出，煨生姜就是用此法。炙 是將藥物加

6、熱拌炒的另一種方法。有蜜炙和砂炙 蜜炙：即加煉蜜拌炒。先將鐵鍋、鏟刀用清水洗凈拭干，燒熱鐵鍋，倒入煉蜜，待蜜化烊略加清水，然后放入藥片反復拌炒，炒至蜜汁吸盡，再噴灑少許清水炒干，使藥物不粘手為度。 例如炙紫苑、炙兜鈴、炙黃耆、炙甘草等。藥物用蜜炙，是取它潤肺、補中及矯味的作用。 砂炙：用鐵砂與藥物拌炒稱為砂炙。先將鐵砂炒熱呈青色，倒入藥物拌炒，至松胖為度，取出，篩去鐵砂。例如山甲片、龜板、鱉甲等經(jīng)過砂炙后變成松脆，易于煎取藥汁，或研粉制丸。 蒸 利用水蒸氣蒸制藥物稱為蒸。它與煮不同之點是須隔水加熱。蒸的作用，主要能使藥物改變其原有性能， 如生大黃有瀉下之功，經(jīng)蒸制成為熟大黃，在臨床上主要用它清

7、化濕熱、活血袪瘀的作用。 矯味作用，如女貞子、五味子經(jīng)過蒸制能減少其酸味。煮 將經(jīng)過整理及洗凈的原藥，放在鍋內(nèi)用清水與其它輔助藥料同煮至熟透。如附子、川烏與豆腐同煮可減少毒性 .第二節(jié) 活性篩選一、常用的篩選方法1抗菌活性篩選 生長抑制法 細胞水平的活性篩選 樣品可通過對各種細胞株的影響而得到評價。對某些腫瘤細胞株的抑制活性是最常用的評價內(nèi)容。細胞凋亡概念 細胞凋亡（apoptosis）又叫做程序性細胞死亡（programmed cell death，PCD）作為一種死亡方式，它是一種生理性、主動性的“自殺”行為，受到基因的調(diào)控。一些結構或器官在發(fā)育某個階段是必需的，隨著發(fā)育的進行不再是需要的

8、，或是個體發(fā)生過程中重演了種系發(fā)生現(xiàn)象，這些都依賴于程序化細胞凋亡過程。細胞凋亡與發(fā)育,疾病關系 蝌蚪變青蛙人的胚胎發(fā)育艾滋病與細胞凋亡癌癥與細胞凋亡細胞壞死與細胞凋亡的區(qū)別細胞檢測分子檢測中醫(yī)藥誘導腫瘤細胞凋亡中藥單劑誘導細胞調(diào)亡丹參: 對人腎成纖維細胞增殖有抑制作用，并能誘導細胞凋亡。天花粉蛋白: 通過干擾腫瘤細胞增殖及誘導腫瘤細胞調(diào)亡而對小鼠黑色素瘤細胞有抑制作用。欖香烯 是從中藥莪術中提取的有效抗癌成分，它通過誘導細胞調(diào)亡而顯示廣譜抗癌活性。槲皮素 是一種天然的黃酮類化合物，三七、銀杏、藏冬花、高良姜、側(cè)柏葉、桑寄生等許多中藥均含有該成分.槲皮素能通過信號傳導機制誘導細胞凋亡。毛柄三葉

9、槭提取物: 可誘導P388細胞凋亡。雄黃: 可以誘導NB4及K562細胞調(diào)亡。人參皂甙: 通過抑制bC12基因表達，降低bc1-2/bax比率，從而誘導T淋巴細胞株（6TCEM）細胞凋亡。大蒜素: 亦可誘導6TCET細胞凋亡，且有明顯的時間和劑量效應。甘草酸: 可誘導T淋巴細胞凋亡。雷公藤: 通過抑制血管平滑肌細胞中原癌基因的表達而抑制增殖，即具有誘導細胞調(diào)亡的作用。淫羊霍總黃酮制劑藿酮膠囊: 可誘導人體增生的血管平滑肌細胞凋亡，從而產(chǎn)生抗動脈硬化的作用。紫杉醇、丹參酮: 可誘導HL60細胞調(diào)亡。中華眼鏡蛇蛇毒組分C: 可使hcl2基因表達下調(diào)，誘導白血病細胞凋亡。白首烏甙 可誘導KB細胞凋亡

10、。北野菊烯醇內(nèi)酯 可誘導U937白血病細胞凋亡。蟾蜍靈 可下調(diào)bcl-2基因表達而誘導U937與HL60細胞凋亡。方劑誘導細胞凋亡小柴胡湯的水溶性成分 有誘導癌細胞凋亡的作用。小柴胡湯中的黃芩甙亦有誘導細胞凋亡的作用。益髓靈 誘導HL60凋亡。 香龍散（含有燦白術、半夏、天龍、九香蟲等） 具有誘導人胃癌細胞凋亡的作用，并影響凋亡相關基因bcl2、bax、P16的表達，這與其抗腫瘤的作用密切相關。益肺抗瘤飲（由黃芪、女貞子、天門冬、七葉一枝花等組成） 可降低Lax-83人肺腺癌細胞p53和cmyc基因蛋白表達，從而抑制腫瘤細胞增殖。小柴胡湯 可誘導HIV感染細胞調(diào)亡。中藥抑制細胞凋亡枸杞中的枸杞

11、多糖: 可抑制地塞米松誘導的小鼠胸腺細胞凋亡。人參: 可防止小鼠體重及胸腺細胞的存活能力下降，抑制胸腺DNA降解和促凋亡蛋白bax的過量表達。棗總黃酮: 對地塞米松誘導的小鼠胸腺細胞凋亡有抑制作用。 茵陳蒿含有的9種化合物中茵陳炔烯、茵陳炔酮、茵陳色酮有較強的抑制細胞凋亡的活性。酶抑制劑篩選法(生物化學篩選) 應用酶抑制劑篩選法可獲得具有抗腫瘤、抗血栓、抗糖尿病、抗病毒、抗炎以及降血脂、降血壓等活性的代謝物。疾病與相關酶 抗腫瘤活性篩選的靶標酶有DNA拓撲異構酶、芳香酶、法尼基轉(zhuǎn)移酶、蛋白激酶等。 抗血栓形成活性篩選的靶標酶有凝血酶、血小板活化因子,?；D(zhuǎn)移酶等。 抗病毒活性篩選的靶標酶有蛋白

12、酶、復制有關的酶等。 抗糖尿病活性篩選的靶標酶有醛糖還原酶等。 抗炎活性篩選的靶標酶有溶磷脂酶、磷酸酯酶A2、脂氨酶等。 抗神經(jīng)退化活性篩選的靶標酶有乙酰膽堿酯酶（需要同時篩選對丁酰膽堿酯酶不抑制的活性）。 降血脂活性篩選的靶標酶有鯊烯合成酶、脂酰輔酶A轉(zhuǎn)移酶（A-CAT）、-羥基-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)等。 降血壓活性篩選靶標酶有腎上腺素合成酶、內(nèi)皮質(zhì)素轉(zhuǎn)換酶等。免疫調(diào)節(jié)活性代謝物的篩選法 免疫調(diào)節(jié)分為免疫活性增強和免疫活性抑制，在醫(yī)學上有其重要作用。可通過皮膚注射反應來觀察樣品對抗原免疫反應的增強或抑制作用，也可在體外應用淋巴細胞進行免疫試驗。高通量篩選（high throughput screening,HTS） 稱大規(guī)模集群式篩選，主要包括五個子系統(tǒng)：高容量的樣品庫，自動化的操作系統(tǒng)，高靈敏度的檢測系統(tǒng)，高效率的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)以及高特異性的藥物篩選系統(tǒng)。 現(xiàn)代應用的高通量篩選是一些有特定靶點的微量生物篩選方法，自動化/機器人技術和完整數(shù)據(jù)處理技術的有機結合，其篩選能力是每年對100萬化合物以上的樣品或化合物進行生物活性的篩選。環(huán)境安全性評價2對動物的影響活性（1）對動物幼體的定殖或變態(tài)的抑制 （2）對無脊椎動物運動的影響 （3）魚類毒性試驗 （4）通過器官和生理系統(tǒng)檢測 對動物幼體的定殖或變態(tài)的抑制 環(huán)節(jié)動物、鮑魚以及咸水蝦的幼體可用于檢測樣品對動物的毒性