糖類消化酶活性的測(cè)定方法及原理

1、糖類消化酶活性的測(cè)定方法及原理（以淀粉酶為例）資料查找：林俊鳳、羅雨涵、劉愷妍ppt制作：何葉 演講者：楊麒麟指酶催化特定化學(xué)反應(yīng)的能力，其大小可用一定條件下酶促反應(yīng)速度來表示，酶促反應(yīng)速度可用單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的增加量來表示。淀粉酶是水解淀粉的糖苷鍵的一類酶的總稱，按照其水解淀粉的作用方式，可分為-淀粉酶和-淀粉酶等。-淀粉酶和-淀粉酶是其中最主要的兩種，存在于禾谷類的種子中。-淀粉酶存在于休眠的種子中，而-淀粉酶是在種子萌發(fā)過程中形成的。淀粉酶的定義及分類：酶活性的定義：1、在最適溫度之前，淀粉酶的活性隨著溫度的升高而升高，達(dá)到最適溫度之后，淀粉酶的活性隨著溫度的升高而降低至失活

2、。 2、淀粉水解反應(yīng)：淀粉 藍(lán)糊精紫糊精紅糊精無色糊精麥芽糖 遇碘呈現(xiàn)顏色：藍(lán)色 藍(lán)色紫色紅色 無色無色課本提要實(shí)驗(yàn)原理：測(cè)定-淀粉酶活性的常用方法有：3,5-二硝基水楊酸比色法（DNS）、凝膠擴(kuò)散法、和降落值法目前,關(guān)于-淀粉酶活性的測(cè)定方法很多種,活力單位的定義也各不相同,國內(nèi)外測(cè)定-淀粉酶活性的方法常用的有凝膠擴(kuò)散法、3,5-二硝基水楊酸比色法和降落值法。這3種方法所用的材料分別是新鮮種子、萌動(dòng)種子和面粉,獲得的-淀粉酶活性應(yīng)該分別是延遲(內(nèi)源)-淀粉酶、萌動(dòng)種子-淀粉酶和后熟面粉的-淀粉酶活性。3,5-二硝基水楊酸比色法-淀粉酶：耐熱不耐酸，70加熱15min仍保持活性，pH3.6時(shí)鈍

3、化；-淀粉酶：耐酸不耐熱，70加熱15min即鈍化本實(shí)驗(yàn)采用加熱法鈍化-淀粉酶，測(cè)定-淀粉酶的活性。具體方法：利用3,5-二硝基水楊酸比色法來測(cè)定淀粉酶水解生成麥芽糖的含量，以單位時(shí)間內(nèi)淀粉酶分解生成麥芽糖的量來表示淀粉酶活性大小，再與非鈍化條件下的（）總活性進(jìn)行加減運(yùn)算得到另一個(gè)淀粉酶的活性（1）實(shí)驗(yàn)原理（2）實(shí)驗(yàn)材料淀粉酶液50ML、恒溫水浴鍋、刻度試管、0.4mol的NaOH、1%淀粉、3,5-二硝基水楊酸、麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/ml）、0.1molpH=5.6的檸檬酸緩沖液以1號(hào)管為空白調(diào)零點(diǎn)，在540nm波長下比色測(cè)定光密度，以麥芽糖濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，A540nm為縱坐標(biāo)

4、，用Excel繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線取兩只試管一只對(duì)照，一只測(cè)定各加淀粉酶原液1ml70加熱15min冷卻向?qū)φ展芗?ml0.4mol的NaOH，終止酶活性。向各管中各加入檸檬酸緩沖液1mL。將測(cè)定管與對(duì)照管于40中加熱15min各加入2mL40預(yù)熱的淀粉溶液將2管混合均勻后立即用40水浴5min取出后迅速向測(cè)定管加入4mLo0.4mol的NaOH取對(duì)照管和測(cè)定管中的溶液各2ml，分別加入刻度試管中分別向兩只試管加入2ml3,5-二硝基水楊酸沸水浴5min冷卻稀釋至20mL混勻以制作麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的1號(hào)試管為參比溶液，調(diào)零，測(cè)定540nm處吸光度記錄結(jié)果（3）實(shí)驗(yàn)操作通過標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得相應(yīng)的麥芽糖含量（mg/ml）按下列公式計(jì)算淀粉酶活性-淀粉酶活性=(A2-A1)*V*D/W其中：A1為對(duì)照管中麥芽糖的濃度（mg/ml） A2為測(cè)定管中-淀粉酶水解淀粉生成麥芽糖的濃度（mg/ml） V為酶促反應(yīng)體積 D為酶液總體積 W為樣品鮮重（）淀粉酶總活力=（B2-B1）*V*D/樣品鮮重其中：B2為()淀粉酶水解淀粉生成麥芽糖的濃度（mg/