(整理)酶法拆分以及酶穩(wěn)定性的研究進展課件

1、(最新整理)酶法拆分以及酶穩(wěn)定性的研究進展2021/7/261(最新整理)酶法拆分以及酶穩(wěn)定性的研究進展2021/7/26酶法拆分以及酶穩(wěn)定性的研究進展20081406182021/7/262酶法拆分以及酶穩(wěn)定性的研究進展20081406182021/酶法拆分立體專一性強拆分效率高生產(chǎn)條件溫和無環(huán)境污染2021/7/263酶法拆分立體專一性強拆分效率高生產(chǎn)條件溫和無環(huán)境污染2021氨基酸：D-苯基甘氨酸是利用氨肽酶成功地進行了拆分。非甾體抗炎藥：Moreno等利用固定化脂肪酶(CCL)催化萘普生乙酯的不對稱水解,制備了光學(xué)純度為95%的(S)-萘普生。酶法拆分的研究進展2021/7/264酶法

2、拆分的研究進展2021/7/2645-羥色胺拮抗物和攝取抑制劑： 一種新的5-HT拮抗物MDL100907Margolin等利用脂肪酶(CCL)催化酯的水解制備了(R)-MDL100907,產(chǎn)品光學(xué)純度達99%。酶法拆分的研究進展2021/7/265酶法拆分的研究進展2021/7/265-阻斷劑： Bevinakatti等在有機溶劑中利用脂肪酶PS催化酯的不對稱水解,對現(xiàn)有外消旋普萘洛爾生產(chǎn)工藝的中間體1-氯-3-萘氧-2-丙醇進行了拆分,制備了(S)-普萘洛爾的合成子(S)-1-氯-3-萘氧-2-丙醇。酶法拆分的研究進展2021/7/266酶法拆分的研究進展2021/7/266酶穩(wěn)定性的研究

3、進展提高穩(wěn)定性2021/7/267酶穩(wěn)定性的研究進展提高穩(wěn)定性2021/7/267酶穩(wěn)定性的研究進展2021/7/268酶穩(wěn)定性的研究進展2021/7/2681、化學(xué)修飾法（1）交聯(lián)酶結(jié)晶法：多肽鏈內(nèi)部或分子間交聯(lián)，阻止分子的展開從而穩(wěn)定蛋白質(zhì)。主要有：脂肪酶、青霉素酞基轉(zhuǎn)移酶、枯草菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶。2021/7/2691、化學(xué)修飾法2021/7/2691、化學(xué)修飾法（2）多聚體的共價結(jié)合：把蛋白質(zhì)分子結(jié)合到可溶性多聚本的多個結(jié)合位點上，屬一種交聯(lián)方式。Bieniarz等人已經(jīng)把這種方法用于三種特定的蛋白質(zhì)：堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶和藻紅蛋白。并進行穩(wěn)定性測試，結(jié)果良好。2021/7/2

4、6101、化學(xué)修飾法2021/7/26101、化學(xué)修飾法(3)表面修飾：Khajeh等用甲基順丁烯二酸酐修飾兩種細菌的-淀粉酶的側(cè)鏈賴氨酸。這兩種細菌分別是嗜溫B淀粉稀釋細菌和地衣芽抱桿菌。結(jié)果顯示有較好構(gòu)象的穩(wěn)定性。2021/7/26111、化學(xué)修飾法2021/7/26112、添加穩(wěn)定劑 (1)鹽鹽類主要存在離子鍵作用，當(dāng)酶的活性中心含有離子作為配位體時，降低分子內(nèi)靜電排斥作用，增加酶的穩(wěn)定性。鹽可作為水分子的替代物占據(jù)水的位置，排除自由水對酶造成的不穩(wěn)定影響。專利EP 0758018 A1描述在用鹽來穩(wěn)定固態(tài)植酸酶時，發(fā)現(xiàn)二價陽離子效果最好而且無機鹽與酶的質(zhì)量比控制在5%90%效果較好。2

5、021/7/26122、添加穩(wěn)定劑 2021/7/26122、添加穩(wěn)定劑 (2)多羥基化合物多羥基醇和糖類等多羥基化合物能形成氫鍵，通過氫鍵與酶蛋白表面分子相連接，使酶蛋白分子穩(wěn)定化；有助于形成可增加表面張力和溶液黏度的溶劑層，降低蛋白水解而起到穩(wěn)定酶的作用。還能夠通過填補酶空間結(jié)構(gòu)的空隙，降低由于加熱引起酶空間結(jié)構(gòu)改變而導(dǎo)致的酶活損失。專利WO 93/16175描述用尿素、甘油或山梨醇等來穩(wěn)定液態(tài)植酸酶。2021/7/26132、添加穩(wěn)定劑 2021/7/26132、添加穩(wěn)定劑 (3)其他穩(wěn)定劑Chang Chih Chen等（2001）研究發(fā)現(xiàn)，在植酸酶溶液中加入可溶性淀粉和高粱糖漿廢棄液

6、可提高植酸酶的熱穩(wěn)定性。一些小分子量的添加劑通過誘導(dǎo)蛋白質(zhì)優(yōu)先水合作用而增加其穩(wěn)定性，即添加劑防止其它物質(zhì)與蛋白質(zhì)分子結(jié)合，添加劑和膚骨架之間的相互反應(yīng)對其穩(wěn)定性不利。2021/7/26142、添加穩(wěn)定劑 2021/7/26143、固定化酶酶的固定化就是通過化學(xué)或物理的處理方法,使原來水溶性的酶與固態(tài)的水不溶性支持物相結(jié)合或被載體包埋。優(yōu)點: (1) 對熱、pH等的穩(wěn)定性提高,對抑制劑的敏感性降低,有的酶具有了抗蛋白酶分解的特性; (2) 酶就可以回收, 且酶活力降低較少 (3) 適合于連續(xù)化、自動化生產(chǎn),催化過程容易控制,且產(chǎn)品中不會帶進酶蛋白或細胞,改善了后處理過程,提高了酶的利用效率,降

7、低了生產(chǎn)成本。2021/7/26153、固定化酶2021/7/26154、其他直接用戊二醛交聯(lián)產(chǎn)該酶的大腸桿菌,也有用ABSE-交聯(lián)瓊脂糖與青霉素酰化酶直接偶聯(lián),還有的利用三醋酸纖維素包埋和戊二醛交聯(lián)相結(jié)合固定青霉素?；父弋a(chǎn)菌,這些試驗的結(jié)果都顯示各種固定化方法均可在很大程度上提高酶的穩(wěn)定性、增加酶的轉(zhuǎn)化率。某制藥公司用聚丙烯酰胺凝膠包埋含有高活力天冬氨酸酶的大腸桿菌,用于工業(yè)上利用延胡索酸轉(zhuǎn)化為L-天冬氨酸。上海生化所用固定化的3-核糖核酸酶從RNA中生產(chǎn)3-核苷酸,使酶的利用率提高了10倍;袁中一等將ABSE-纖維素固定的5-磷酸二酯酶用來生產(chǎn)5-核苷酸。固定化谷氨酸脫羧酶可以生產(chǎn)-氨基丁酸,制成了CO2電極,可用于測定谷氨酸的含量。2021/7/26164、其他直接用戊二醛交聯(lián)產(chǎn)該酶的大腸桿菌,也有用ABSE-交結(jié)語現(xiàn)在對于催化劑的立體選擇性、催化活性等有較多研究，但是在其穩(wěn)定性方面的研究甚少。酶作為一種生物催化劑具有優(yōu)良的催化性能,與化學(xué)催化劑相比，具有高度選擇性，反應(yīng)條件溫和以及催化效率高等優(yōu)點。然而在將