溶血性貧血課件

1、第四篇 第二章 第二節(jié) 溶血性貧血的實驗室檢測溶血性貧血課件1第四篇 第二章 第二節(jié) 溶血性貧血的實驗室檢測溶血性貧血什么叫溶血性貧血？ 各種原因?qū)е录t細(xì)胞生存時間縮短、破壞增多或加速，骨髓代償造血功能不足時所發(fā)生的一類貧血叫溶血性貧血。什么叫溶血性疾??？ 指骨髓代償能力尚足以補償紅細(xì)胞的損耗而不出現(xiàn)貧血。溶血性貧血課件2什么叫溶血性貧血？溶血性貧血課件2溶血性貧血的分類按溶血發(fā)生部位分類（RBC破壞場所）血管內(nèi)溶血：RBC在血管內(nèi)破壞DIC、機(jī)械性微血管病變、燒傷、輸異型血、PNH血管外溶血：RBC在單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬或破壞AIHA、遺傳性球形細(xì)胞增多癥溶血性貧血課件3溶血性貧血的分類按

2、溶血發(fā)生部位分類（RBC破壞場所）溶血性貧溶血性貧血的分類 按病因及發(fā)病機(jī)制分類 RBC內(nèi)在因素（遺傳性/獲得性） RBC膜缺陷、RBC酶缺陷、珠蛋白異常（肽鏈不平衡） RBC外在因素（獲得性） 免疫性溶貧、機(jī)械損傷性、感染、物理因素、毒素、脾亢溶血性貧血課件4溶血性貧血的分類 按病因及發(fā)病機(jī)制分類溶血性貧血課件4溶血性貧血的診斷確定是否有溶血（篩查檢測）紅細(xì)胞破壞增加紅系代償性增生哪一類溶貧（病因檢測）溶血性貧血課件5溶血性貧血的診斷確定是否有溶血紅細(xì)胞破壞增加紅系代償性增生哪一、溶血性貧血的篩查檢測溶血性貧血課件6一、溶血性貧血的篩查檢測溶血性貧血課件6 珠蛋白 血紅素 鐵 +卟啉單核巨噬

3、系統(tǒng) 脾臟血管外溶血RBC血管內(nèi)溶血血漿游離Hb腎臟血紅蛋白尿游離膽紅素肝臟結(jié)合珠蛋白近曲小管上皮細(xì)胞腎閾結(jié)合膽紅素糞膽原的腸肝循環(huán)含鐵血黃素尿 Rous 實驗?zāi)懼S膽原腸道血液腎臟尿膽原高鐵血紅蛋白血紅素/清蛋白血管內(nèi)、外溶血示意圖1234567溶血性貧血課件7 珠蛋白 單核巨噬系統(tǒng) 血管外溶血RBC血管內(nèi)溶血血漿游離（一）紅細(xì)胞破壞增加RBC壽命測定 51Cr同位素標(biāo)記參考值：2532天半衰期15天，說明有溶血存在1溶血性貧血課件8（一）紅細(xì)胞破壞增加RBC壽命測定1溶血性貧血課件8 參考值：0.5%，完全溶血0.38%；主要見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥，遺傳性橢圓形細(xì)胞增多癥、溫抗體AIH

4、A也可增高。 脆性減低：主要見于海洋性貧血，也可見于缺鐵性貧血、某些肝硬化等。1. 紅細(xì)胞滲透脆性試驗溶血性貧血課件25 【臨床意義】1. 紅細(xì)胞滲透脆性試驗溶血性貧血課件25【原理】紅細(xì)胞在孵育過程中，葡萄糖的消耗增加，而使貯備的ATP減少，導(dǎo)致需要能量的紅細(xì)胞膜對陽離子的主動傳遞受阻，造成鈉離子在紅細(xì)胞內(nèi)積聚，細(xì)胞膨脹，孵育滲透脆性增加。【參考值】 未孵育 50%溶血4.04.45 g/L NaCl 37孵育24h 50%溶血4.655.9 g/L NaCl【意義】脆性增高 遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥 脆性減低 珠蛋白生成障礙性貧血 缺鐵性貧血 脾切除術(shù)后 2. 紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗溶血性貧

5、血課件26【原理】紅細(xì)胞在孵育過程中，葡萄糖的消耗增加，而使貯備的AT3. PNH相關(guān)檢測陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）：獲得性紅細(xì)胞膜缺陷的克隆性疾病，常在睡眠時加重，臨床上可表現(xiàn)血管內(nèi)溶血、栓塞、全血細(xì)胞減少等，有時可出現(xiàn)骨髓衰竭。PNH患者紅細(xì)胞膜表面缺乏加速衰變因子（DAF，CD55）反應(yīng)性溶血的膜抑制物（MIRL，CD59）等，使紅細(xì)胞對補體敏感而溶血。溶血性貧血課件273. PNH相關(guān)檢測陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）：獲得1）蔗糖溶血試驗【原理】 蔗糖離子濃度低，增強補體與紅細(xì)胞結(jié)合，使紅細(xì)胞膜上形成小孔，蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞而致溶血?！緟⒖贾怠筷幮浴九R床意義】PNH本試驗常為

6、陽性?？勺鳛镻NH篩選試驗，陰性可排除，陽性應(yīng)作Ham 試驗。3. PNH相關(guān)檢測溶血性貧血課件281）蔗糖溶血試驗【原理】 蔗糖離子濃度低，增強補體與紅細(xì)胞結(jié)2）蛇毒因子溶血試驗【原理】 蛇毒因子是種溶血因子，能直接激活補體C3，激活補體系統(tǒng)，造成溶血?！緟⒖贾怠?溶血度5%【臨床意義】 特異性PNH試驗。3. PNH相關(guān)檢測溶血性貧血課件292）蛇毒因子溶血試驗【原理】 蛇毒因子是種溶血因子，能直接激3）酸溶血試驗 （Ham試驗）【原理】膜蛋白缺陷的紅細(xì)胞對補體敏感增加，在弱酸血清（pH6.66.8）中，經(jīng)37 孵育后紅細(xì)胞發(fā)生溶血?！緟⒖贾怠筷幮??！九R床意義】酸溶血試驗是診斷PNH的主要

7、確診試驗。3. PNH相關(guān)檢測溶血性貧血課件303）酸溶血試驗 （Ham試驗）【原理】膜蛋白缺陷的紅細(xì)胞對補Ham試驗溶血性貧血課件31Ham試驗溶血性貧血課件31PNH患者不同時間尿樣溶血性貧血課件32PNH患者不同時間尿樣溶血性貧血課件324）CD55 CD59檢測 【原理】CD55，CD59是補體調(diào)節(jié)蛋白，具有GPI錨定蛋白作用。PNH患者紅細(xì)胞和粒細(xì)胞上GPI錨缺陷，無法結(jié)合在細(xì)胞膜上，導(dǎo)致對補體敏感，容易發(fā)生溶血。 【參考范圍】外周血中CD55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均10， 主要確診試驗3. PNH相關(guān)檢測溶血性貧血課件334）CD55 CD59檢測 【原理】CD55，CD

8、59是補PNH診斷1.初篩試驗血管內(nèi)溶血的特點血漿游離血紅蛋白增高，結(jié)合珠蛋白(Hp)降低，血紅蛋白尿、尿中出現(xiàn)含鐵血黃素、蔗糖溶血試驗等。2.診斷試驗 酸化血清溶血試驗(Hams試驗)、蛇毒因子溶血試驗、CD55和CD59檢測。溶血性貧血課件34PNH診斷1.初篩試驗溶血性貧血課件34（二）紅細(xì)胞酶缺陷的檢測 自身溶血試驗及糾正試驗 高鐵血紅蛋白還原試驗 氰化物-抗壞血酸試驗 變性珠蛋白小體生成試驗 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）活性檢測 丙酮酸激酶熒光篩選試驗和活性測定溶血性貧血課件35（二）紅細(xì)胞酶缺陷的檢測 自身溶血試驗及糾正試驗溶血性貧血課1. 自身溶血試驗及糾正試驗【原理】細(xì)胞

9、內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶 G-6-PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。在溫育過程中分別加入葡萄糖和ATP作糾正物，看溶血能否糾正。溶血性貧血課件361. 自身溶血試驗及糾正試驗溶血性貧血課件36【參考值】正常人輕微溶血，溶血度 3.5%；加葡萄糖、ATP溶血明顯糾正， 溶血度1%?！九R床意義】 遺傳球、遺傳性非球形細(xì)胞溶血的鑒別 遺傳性球形細(xì)胞增多癥遺傳性非球形細(xì)胞性溶貧（型）葡萄糖6磷酸脫氫酶缺陷癥（型）丙酮酸激酶缺陷癥孵育48h后溶血增強增強增

10、強加葡萄糖后溶血明顯糾正部分糾正不能糾正加ATP后溶血明顯糾正部分糾正糾正1. 自身溶血試驗及糾正試驗溶血性貧血課件37【參考值】正常人輕微溶血，溶血度 75%；高鐵血紅蛋白0.3-1.3g/L。 【臨床意義】G-6-PD缺陷，還原率顯著降低。本試驗是反映紅細(xì)胞對高鐵血紅蛋白的還原能力，特異性較低，可用作G-6-PD缺乏的篩選試驗。溶血性貧血課件382. 高鐵血紅蛋白還原試驗 【原理】在有足量的NADPH存在【原理】抗壞血酸鈉與HbO2反應(yīng)生成H2O2，氰化鈉能抑制過氧化氫酶使H2O2不受影響，從而使H2O2與GSH發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生氧化型谷光氨肽，后者需要NADPH使其再還原為GSH。 如紅細(xì)胞

11、內(nèi)缺乏催化NAPDH形成的酶（G-6-PD），GSH產(chǎn)生減少，H2O2蓄積，HbO2被氧化成為棕色的高鐵血紅蛋白。【臨床意義】正常血液幾小時后才變?yōu)榘瞪?；G-6-PD缺乏癥患者血液呈棕色（陽性反應(yīng)），純合子2h，雜合子3-4h?？勺鰹樵\斷G-6-PD缺乏癥的一種過篩試驗。3. 氰化物-抗壞血酸試驗溶血性貧血課件39【原理】抗壞血酸鈉與HbO2反應(yīng)生成H2O2，氰化鈉能抑制過4. 變性珠蛋白小體生成試驗 【原理】G-6-PD缺乏可致紅細(xì)胞內(nèi)的GSH含量減少 ，隨之出現(xiàn)高鐵血紅蛋白增高，最后形成變性珠蛋白小體（Heinz bodies）。取G6PD缺陷患者血液，加乙酰苯肼，37溫育2-4h，推薄血

12、片，1%煌焦油藍(lán)染色，計算含5個或更多珠蛋白小體的紅細(xì)胞百分率。 【參考值】30% 【臨床意義】G6PD缺陷癥，不穩(wěn)定Hb、HbH病等常高于45%。溶血性貧血課件404. 變性珠蛋白小體生成試驗 【原理】G-6-PD缺乏可致紅5. 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）活性檢測 【原理】在G6PD和NADP存在下，G6PD能使NADP還原成NADPH，后者在紫外線照射下會發(fā)出熒光。進(jìn)一步可用紫外線分光光度測量法，對G-6-PD活性作定量測定。 【參考值】正常人有甚強熒光。 【臨床意義】G6PD缺陷者常延遲出現(xiàn)或不出現(xiàn)熒光點。可作G-6-PD較特異的篩選試驗。溶血性貧血課件415. 葡萄糖-6-磷酸

13、脫氫酶（G6PD）活性檢測 【原理】在6. 丙酮酸激酶熒光篩選試驗和活性測定 【原理】在ADP存在下，PK催化烯醇式磷酸丙酮酸變?yōu)楸幔谳o酶I還原型（NADH）存在下，丙酮酸被乳酸脫氫酶作用變?yōu)槿樗幔魺晒鈽?biāo)記于NADH上，此時有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD。進(jìn)一步可用紫外分光光度測量法，對丙酮酸激酶活性作定量測定。 【參考值】正常PK活性熒光在20min內(nèi)消失。 【臨床意義】丙酮酸激酶缺乏時，常延遲消失或達(dá)60min仍不消失，可作丙酮酸激酶較特異的篩選試驗。溶血性貧血課件426. 丙酮酸激酶熒光篩選試驗和活性測定 【原理】在ADP存在（三）珠蛋白生成異常的檢測 血紅蛋白電泳 胎兒血紅

14、蛋白酸洗脫試驗 胎兒血紅蛋白測定或HbF堿變性試驗 HbA2 定量測定 限制性內(nèi)切酶譜分析溶血性貧血課件43（三）珠蛋白生成異常的檢測 血紅蛋白電泳溶血性貧血課件43【原理】利用各種血紅蛋白的等電點不同的特點，在一定pH緩沖液中所帶的正、負(fù)電荷不同，經(jīng)電泳后各血紅蛋白的移動方向和速度不同，既可將它們分開。【參考值】瓊脂膠電泳 血紅蛋白A 95 血紅蛋白A2 1.63.5 血紅蛋白F 0.21.0 1. 血紅蛋白電泳溶血性貧血課件44【原理】利用各種血紅蛋白的等電點不同的特點，在一定pH緩沖液【臨床意義】該試驗是為了確診是否有異常血紅蛋白存在，以及各種血紅蛋白的比例。 HbA2增高：診斷-輕型珠

15、蛋白合成障礙性貧血最重要的診斷依據(jù)，此外個別惡性貧血、葉酸缺乏所致巨幼細(xì)胞貧血、某些不穩(wěn)定血紅蛋白病也可增高。 HbA2減低：缺鐵性貧血、鐵粒幼細(xì)胞貧血。1. 血紅蛋白電泳溶血性貧血課件45【臨床意義】該試驗是為了確診是否有異常血紅蛋白存在，以及各種HbA2 HbF-珠蛋白合成障礙性貧血 （地中海貧血）1. 血紅蛋白電泳溶血性貧血課件46HbA2 -珠蛋白合成障礙性貧血1. 血紅蛋白電泳溶血性2. 胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗 【原理】HbF抗酸能力較HbA強。固定后的血片，置酸性緩沖液中保濕一定時間，只有含HbF的紅細(xì)胞不被洗脫，再用伊紅染色而呈鮮紅色。 【臨床意義】臍帶血、新生兒、嬰兒陽性，成人

16、小于1%。地中海貧血患者輕型者僅少數(shù)紅細(xì)胞呈陽性；重型者陽性紅細(xì)胞明顯增多。溶血性貧血課件472. 胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗 【原理】HbF抗酸能力較HbA3. 胎兒血紅蛋白測定或HbF堿變性試驗 【原理】在堿性溶液中，HbF不易變性沉淀，其他Hb可變性沉淀，測定其濾液中Hb含量，即HbF含量。 【參考值】成人2% 新生兒55%-85%，1歲左右同成人 【臨床意義】-珠蛋白合成障礙性貧血患者明顯增高，AL、AA、紅白血病、淋巴瘤等也可輕度增高。溶血性貧血課件483. 胎兒血紅蛋白測定或HbF堿變性試驗 【原理】在堿性溶液4. HbA2 定量測定 【參考值】1.1%-3.2%。 【臨床意義】同血紅

17、蛋白電泳。5. 限制性內(nèi)切酶譜分析 是否存在珠蛋白基因突變、缺失等缺陷，Hb病的基因診斷。溶血性貧血課件494. HbA2 定量測定 【參考值】1.1%-3.2%。 5（四）自身免疫性溶血性貧血檢測 體內(nèi)免疫發(fā)生異常，產(chǎn)生自身抗體或補體，結(jié)合在紅細(xì)胞膜上，紅細(xì)胞破壞加速而引起的一組溶血性貧血。 抗人球蛋白試驗 ( Coombs test) 冷凝集試驗 冷熱雙相溶血試驗溶血性貧血課件50（四）自身免疫性溶血性貧血檢測 體內(nèi)免疫發(fā)生異常，產(chǎn)生1. 抗人球蛋白試驗 ( Coombs test) 【原理】紅細(xì)胞的膜電位使兩個紅細(xì)胞間保持一定距離。不完全抗體IgG分子較小，無法連接兩個鄰近的紅細(xì)胞而只能

18、和一個紅細(xì)胞抗原相結(jié)合?？谷饲虻鞍资峭耆贵w，可與多個紅細(xì)胞表面不完全抗體的Fc段結(jié)合，使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為抗人球蛋白試驗陽性。 直接抗人球蛋白試驗：紅細(xì)胞表面有不完全抗體。 間接抗人球蛋白試驗 ：血清中有不完全抗體。溶血性貧血課件511. 抗人球蛋白試驗 ( Coombs test) 將病人血清和正常RBC混合，再加入抗IgG試劑 病人血清 RBC 抗IgG溶血性貧血課件52將病人血清和正常RBC混合，再加入抗IgG試劑病人 RBC 溶血性貧血課件53溶血性貧血課件53【參考值】正常人直接、間接抗人球蛋白試驗均陰性【臨床意義】 1）陽性見于AIHA， 新生兒溶血病，SLE等 2）AIHA大多為溫抗體型（37條件下作用最強，主要為IgG ），少數(shù)為IgM （冷抗體型 4條件下進(jìn)行試驗） 3）AIHA除了有IgG外，還有IgG+C3、C3、極少數(shù)IgG亞型，IgA、IgM型。 4）間接試驗主要見于Rh或ABO妊娠免疫性新生兒溶血病母體血清中不完全抗體檢測。1. 抗人球蛋白試驗 ( Coombs test) 溶血性貧血課件54【參考值】正常人直接、間接抗人球蛋白試驗均陰性1. 抗人球蛋