COX2及VEGF在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

1、COX-2及VEGF在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義【摘要】目的討論環(huán)氧化酶2(x-2)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子vegf在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響(rt-pr)，檢測(cè)了96例乳腺癌患者癌組織及癌旁組織中x-2和vegf的表達(dá)。結(jié)果x-2rna和vegfrna分別在87.50%和83.33乳腺癌組織中表達(dá)，而僅在16.67%和31.25%癌旁組織中表達(dá)，癌組織與癌旁組織x-2rna和vegfrna的表達(dá)差異有顯著意義。結(jié)論x-2rna、vegfrna在乳腺癌組織中明顯增高。x-2的表達(dá)同vegf的表達(dá)親密相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】乳腺腫瘤theexpressinfylxygenase-2

2、andvegfinbreastaneranditssignifianeafei-lin,zhu-in,xieb-jian,etal.(taizhuhspitalfzhejiangprvine,linhai317000,hina)abstrat:purpsetinvestigatetheexpressinfylxygenase-2(x-2),vasularendthelialgrthfatr(vegf)inbreastaneranditslinialsignifiane.ethdstheexpressinfx-2andvegfin96asesfbreastanertissuesandanerad

3、jaenttissueseredetetedbyreversetransriptin-pr.resultsexpressinfx-2rnaandvegfrnaas87.50%and83.33%inbreastanertissues;16.67%and31.25%inaneradjaenttissuesrespetively.theexpressinfx-2rnaandvegfrnaassignifiantlydifferentbeteenanertissueandanersadjaenttissue.nlusinexpressinfx-2andvegfrnainbreastanerissign

4、ifiantlyinreased.expressinfx-2islselyrrelatedithexpressinfvegf.keyrds:breastneplass;ylxygenase-2;vegf;reversetransriptinplyerasehainreatin環(huán)氧合酶-2(ylxygenase-2，x-2)是一種多功能的蛋白質(zhì)，在多種惡性腫瘤組織中，x-2的表達(dá)增高,它與惡性腫瘤發(fā)生開展親密相關(guān)。我們采用rt-pr和免疫組化法檢測(cè)了96例乳腺癌組織中x-2和vegf的表達(dá)，討論x-2、vegf在乳腺癌中的表達(dá)情況及其相關(guān)性，以及x-2選擇性抑制劑用于乳腺癌高危人群化學(xué)預(yù)防和治療

5、的可能性。1材料與方法1.1研究對(duì)象搜集臺(tái)州醫(yī)院腫瘤外科2002年12月至2022年5月因患乳腺癌行根治性手術(shù)并經(jīng)病理證實(shí)的腫瘤標(biāo)本及配對(duì)的癌旁組織96例。同時(shí)留取石蠟標(biāo)本，行he及免疫組織化學(xué)染色。年齡2358歲，平均42.5歲。組織類型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌80例，髓樣癌8例，黏液腺癌4例，導(dǎo)管內(nèi)癌4例。腫瘤分期：期76例，期20例。1.2主要試劑trizl(invitrgen公司)，-ulv逆轉(zhuǎn)錄酶，rna酶抑制劑(bi，ferents)，taq酶generay公司x-2、vegf、-atin引物(上海生物工程公司合成)；鼠抗人x-2蛋白及vegf抗體的單克隆抗體購(gòu)自福建生物技術(shù)；x-2擴(kuò)增產(chǎn)物

6、為488bp，上游引物:5-taagttgagatta-3；下游引物:5-atttaaagaa-3；vegf引物序列：上游引物：5-gttataatga-3；下游引物：5-agtattttatgtg-3，-肌動(dòng)蛋白擴(kuò)增產(chǎn)物為619bp，上游引物:5-gtggtggtgtgaa-3；下游引物:5-gtagagatttgt-3。1.3實(shí)驗(yàn)方法rt-pr檢測(cè)x-2rna及vegfrna表達(dá)：(1)提取rna：取新穎乳腺癌組織50g100g在液氮中速凍，玻璃勻漿器中徹底勻漿，按trizl試劑盒說明書裂解抽提總rna，異丙醇沉淀，溶于dep水。紫外分光光度計(jì)測(cè)定a260/280比值均在1.752.0范圍

7、之內(nèi)。(2)逆轉(zhuǎn)錄合成dna：各取2g總rna，逆轉(zhuǎn)錄酶-ulv催化合成dna，再取dna0.1g作vegf和x-2的pr擴(kuò)增。3檢測(cè)x-2rna表達(dá)：以同一dna為模板，在25l反響體系內(nèi)擴(kuò)增x-2和-肌動(dòng)蛋白。循環(huán)條件：952in,9445s，53.245in，721in，循環(huán)35次。最后72延伸10in。取5lpr產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠電泳，eb溴化乙啶染色，凝膠成像分析。檢測(cè)vegfrna表達(dá)：循環(huán)條件:952in，9445s，51.545in，721in，循環(huán)35次。最后72延伸10in。取5lpr產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠電泳，eb溴化乙啶染色，凝膠成像分析。免疫組化染色及結(jié)果判斷：采用免

8、疫組sp法，按說明書操作。病理組織切片我院兩位病理學(xué)專家閱片作出病理診斷。rt-pr結(jié)果斷定：pr產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳，eb溴化乙啶染色，并用標(biāo)準(zhǔn)prarkerladder對(duì)照，電泳后凝膠成像分析。陽性結(jié)果為：在488bpx-2rna和619bp-atin和320bpvegfrna處出現(xiàn)條帶。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用卡方檢驗(yàn)和四格表確切概率法。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)=0.05。2結(jié)果2.1x-2和vegfrna及其蛋白表達(dá)情況96例癌組織中有84例檢測(cè)到了x-2rna的表達(dá)，陽性率是87.50%；而癌旁組織中只有16例x-2rna的表達(dá)，陽性率為16.67%。兩者比擬差異有顯著性。x-2的表達(dá)位于乳腺腫瘤上

9、皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，54.17%的腫瘤組織見陽性染色見圖1。6.25%(6/96)的癌旁組織見不同程度的陽性染色，兩者比擬差異有顯著性，見表1。vegfrna在乳腺癌中陽性率是83.33%(80/96)，而在癌旁組織中陽性率是31.25%(30/96)，兩者比擬差異有顯著性；vegf的表達(dá)位于乳腺腫瘤上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，75.0%72/96乳腺癌中存在vegf陽性表達(dá)圖2，與癌旁組織25.0%，24/96相比差異有顯著性表1。2.2x-2與vegfrna及其蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)的互相關(guān)系x-2rna及其蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)與vegfrna及其蛋白的陽性表達(dá)呈正相關(guān)p0.05，x-2

10、rna及其蛋白的陽性表達(dá)程度越高，其相應(yīng)的vegfrna及其蛋白的陽性也越高。見表2、3。3討論x-2是前列腺素合成過程中重要的限速酶。x-2表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和血管形成親密相關(guān)1。目前一系列研究發(fā)現(xiàn)x-2在人的很多癌前病變和惡性腫瘤中高表達(dá)，如胃腸上皮化生、bareet食管、胃癌、結(jié)腸癌、食管癌、肝癌、膀胱癌、口腔癌和非小細(xì)胞癌、前列腺癌、鼻咽癌和乳腺癌等。x-2選擇性抑制劑能抑制大鼠乳腺腫瘤的發(fā)生。liu等在轉(zhuǎn)基因小鼠模型中發(fā)現(xiàn)過度表達(dá)x-2的乳腺上皮細(xì)胞可發(fā)生癌變，說明x-2的過度表達(dá)足以誘導(dǎo)乳腺腫瘤的發(fā)生，因此，進(jìn)一步討論x-2在人乳腺癌發(fā)生開展中的作用具有重要意義。本研究顯示

11、，87.5乳腺癌x-2rna表達(dá)，54.2%x-2蛋白呈陽性表達(dá)，而在癌旁組織中僅有16.67可檢出x-2rna表達(dá)，6.25x-2蛋白呈陽性表達(dá)；兩者比擬差異有顯著性，提示x-2在乳腺癌的發(fā)生、開展中起著重要的作用。x-2的作用產(chǎn)物前列腺素可以促進(jìn)腫瘤的新生血管生成，刺激腫瘤細(xì)胞增殖，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，抑制機(jī)體的免疫反響。血管的生成在腫瘤的發(fā)生開展中起重要作用。目前的刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的因子有vegf、bfgf、pdgf等，其中血管內(nèi)皮生成因子(vegf)是一種高度特異性的有絲分裂原，能直接刺激新生血管的形成；被公認(rèn)為是最重要和最強(qiáng)的促血管生成因子。同時(shí)vegf也是一

12、種血管通透性誘導(dǎo)因子，可增加微靜脈和小靜脈的通透性，是最強(qiáng)的血管通透劑。anthny等通過原位雜交法檢測(cè)46例乳腺癌活檢標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的vegf表達(dá)與組織分化、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移親密相關(guān)，與乳腺癌的vd呈顯著性相關(guān)，vegf蛋白在乳腺癌中高表達(dá)提示乳腺癌形成過程中伴隨vegf的高分泌，vegf與乳腺癌的發(fā)生及生長(zhǎng)有關(guān)。淋巴轉(zhuǎn)移的發(fā)生也有賴于原發(fā)腫瘤新生血管的形成。我們?cè)谌榘┫俳M織中也檢測(cè)到vegf蛋白和vegfrna都有高表達(dá)，其陽性率分別為75%和83.33，明顯高于癌旁正常組織，同以往報(bào)道相符。郭貴龍等2研究發(fā)現(xiàn)x-2的表達(dá)與vd明顯正相關(guān)，說明x-2可以促進(jìn)腫瘤新生血管的形成。機(jī)制可概括如下

13、：誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生vegf；腫瘤組織產(chǎn)生的pge2，pgf2及txa2等直接或間接促進(jìn)血管生成；促使基質(zhì)金屬蛋白酶ps表達(dá)激活血管生成素；刺激bl-2的表達(dá)來抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，促進(jìn)血管生成；缺氧誘導(dǎo)x-2促進(jìn)腫瘤血管的形成。我們研究發(fā)現(xiàn)x-2和vegf表達(dá)明顯相關(guān)，過度表達(dá)x-2的乳腺癌細(xì)胞可能誘導(dǎo)vegf產(chǎn)生，從而促進(jìn)腫瘤新生血管的形成。本研究中乳腺癌組織中的x-2表達(dá)與vegf的表達(dá)呈正相關(guān)，提示x-2參與血管形成，可能與誘導(dǎo)vegf的表達(dá)有關(guān)。因此，在乳腺癌中x-2和vegf共同參與乳腺癌的發(fā)生、開展及轉(zhuǎn)移。目前發(fā)現(xiàn)人類多種惡性腫瘤及癌前病變組織中有高表達(dá)的x-2，且陽性率較高，這為腫瘤

14、的化學(xué)預(yù)防和治療提供了新的思路和形式，學(xué)者們對(duì)nsaids用于化學(xué)預(yù)防乳腺癌也產(chǎn)生了極大的興趣。研究說明連續(xù)5年每日口服阿司匹林、優(yōu)布芬，乳腺癌的發(fā)生率下降約40%50%。harris等3研究發(fā)現(xiàn)選擇性x-2抑制劑elexib可以明顯延遲大鼠dba誘導(dǎo)的乳腺癌發(fā)生，并且較非選擇性x-2抑制劑優(yōu)布芬更為有效。目前，抗血管生成藥物bevaizuab已被美國(guó)fda批準(zhǔn)用作轉(zhuǎn)移性直腸癌的一線治療藥物，fairzf等在結(jié)合使用bevaizuab治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌后證實(shí)反響率、生存率及平均壽命延長(zhǎng)均較單獨(dú)使用flururail有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，進(jìn)一步討論x-2和vegf在人乳腺癌發(fā)生開展中的作用及其兩者間詳細(xì)的作用機(jī)制具有重要意義，或許應(yīng)用x-2抑制劑或用vegf抗體將有望成為預(yù)防與治療乳腺癌的新方法。【參考文獻(xiàn)】1ali-fehir,rrisrt,bandypadhyays,etal.expressinfylxygenase-2inadvanedstagevarianserusarina:rrelatinithturellprliferatin,apptsis,angigenesis,an