杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥-課件

1、杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良(DMD)屬于X 連鎖隱性遺傳病,是男性中常見(jiàn)的遺傳性疾病。發(fā)病率約為1/3 500 活男嬰,女性多為致病基因攜帶者,發(fā)病者罕見(jiàn),且癥狀較輕。D M D 發(fā)病年齡偏小,起病隱襲,病程長(zhǎng),在男患中癥狀較重,且病死率高,患者常常以肌肉的進(jìn)行性萎縮無(wú)力并伴有腓腸肌假性肥大為特征,多在3,5歲發(fā)病,病程進(jìn)展快,大多在20歲左右死于心肺衰竭?；純河膳P到站立有特別的過(guò)程(Gower征),走路為鴨型步態(tài)。DMD-臨床表現(xiàn)杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良(DMD)屬于X 連鎖隱性遺傳病,是男性中常見(jiàn)藥物治療:糖皮質(zhì)激素治療是目前唯一被循證醫(yī)學(xué)證實(shí)有效,可延緩DMD病程的藥物。短期口

2、服激素治療可增強(qiáng)骨骼肌力量和功能,并估計(jì)在更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定骨骼肌力量和功能?；蛑委?利用不直截了當(dāng)引起人類疾病,免疫原性較小的腺相關(guān)病毒(AAV)為載體,導(dǎo)入人工剪裁的Dys基因?？祻?fù)治療、矯形治療、社會(huì)心理治療等。DMD-臨床治療藥物治療:糖皮質(zhì)激素治療是目前唯一被循證醫(yī)學(xué)證實(shí)有效,可延緩DMD-遺傳方式及特征DMD-遺傳方式及特征(1)系譜中常常只有男性患者(2)父母都無(wú)病時(shí),女兒則可不能發(fā)病,兒子估計(jì)發(fā)病;(3)由于交叉遺傳,患者的同胞、舅舅、姨表兄弟、外甥常常為本病患者;(4)由于男性患者的子女都正常,故可見(jiàn)隔代遺傳;(5)女性患者的父親一定是患者,母親一定是攜帶者。注:在XR病中,男

3、性的致病基因只能從母親傳來(lái),以后只能傳給女兒,不存在從男性向男性傳遞。即父?jìng)髋?母?jìng)髯?稱為交叉遺傳DMD-遺傳方式及特征(1)系譜中常常只有男性患者DMD-遺傳方式及特征 D M D 由抗肌萎縮蛋白(Dys)基因突變所致,屬于進(jìn) 行性肌營(yíng)養(yǎng)不良癥常見(jiàn)類型。已證實(shí)人類抗肌萎縮蛋白基因定位于X 染色體短臂上(Xp21、1 3),基因全長(zhǎng)約2 220kb,含79 個(gè)外顯子,cDNA 長(zhǎng)14kb,是目前已知的最大人類基因。DMD-分子遺傳及突變情況 D M D 由抗肌萎縮蛋白(Dys)基因突變Dys 和抗肌萎縮蛋白聚糖等蛋白裝配在一起形成抗肌萎縮蛋白的結(jié)合蛋白復(fù)合物(DAPC)。DAPC 形成了一個(gè)

4、穿過(guò)肌膜傳遞信號(hào),連接細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白骨架的重要結(jié)構(gòu)。Dys 基因表達(dá)的缺乏會(huì)影響DAPC 的形成,使分子橋中斷,至少導(dǎo)致兩個(gè)結(jié)果:第一,細(xì)胞膜變得更脆弱在肌肉離心性收縮的時(shí)候會(huì)被機(jī)械力破壞;第二,框架蛋白,尤其是對(duì)機(jī)械力敏感的離子通道將會(huì)失調(diào)。這就是導(dǎo)致疾病的發(fā)生機(jī)制。DMD-分子遺傳及突變情況Dys 和抗肌萎縮蛋白聚糖等蛋白裝配在一起形成抗肌萎縮蛋白的DMD 患者約3 0 % 為自發(fā)性突變,其余的為X染色體隱性遺傳。在各種類型突變中,單個(gè)或多個(gè)外顯子缺失突變患者占65% 70%;無(wú)意義或框移造成的點(diǎn)突變占30%,重復(fù)占5% 15%:故DMD 突變類型主要為缺失,其特點(diǎn)是Xp21

5、上外顯子缺失的不均一性。DMD-分子遺傳及突變情況DMD 患者約3 0 % 為自發(fā)性突變,其余的為X染色體隱性細(xì)胞遺傳學(xué)檢查生物化學(xué)檢查基因診斷DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)胞遺傳學(xué)檢查DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷染色體檢查(X ,Y)X染色質(zhì)檢查 X染色質(zhì)的檢查可刮取口腔粘膜、陰道粘膜脫落上皮細(xì)胞,亦可采納絨毛或羊水中胎兒脫落細(xì)胞涂片,經(jīng)硫堇或甲苯胺藍(lán)染色,在光鏡下計(jì)數(shù)X染色質(zhì)數(shù)目。Y染色質(zhì)檢查 Y染色質(zhì)檢查適用于具有一個(gè)或一個(gè)以上Y染色體的個(gè)體或細(xì)胞群 。DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷染色體檢查(X ,Y)DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷生物化學(xué)診斷可對(duì)血清酶和蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。血清肌酸激酶(CK)含量在血清酶學(xué)檢查中最有價(jià)值

6、。DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷生物化學(xué)診斷DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷基因診斷DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷直截了當(dāng)診斷限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分子雜交：點(diǎn)印跡 (dot blot) 斑點(diǎn)雜交(dot and slot hybridization)等位基因特異性寡核苷酸雜交(ASO )Southern印跡法(Southern blot)Northern印跡法(Northern blot)Western印跡法(Western blot)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）間接診斷多態(tài)性連鎖分析（RFLP)變性梯度凝膠電泳（DGGE)單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（SSCP）DNA芯片(DNA chip)基因診斷DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷直截了當(dāng)診

7、斷限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)DMD-風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)DMD家系圖譜DMD為XR遺傳病女性攜帶者中約有1/3血清肌酐正常2為攜帶者,核型XAXa假設(shè)-1核型為XAXa-1核型為XAXA前概率1/21/2條件概率1/31聯(lián)合概率1/21/31/2后概率1/43/4DMD-風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)DMD家系圖譜DMD為XR遺傳病假設(shè)-產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選1012孕周采集絨毛;次選為1518孕周采集羊水。選擇絨毛進(jìn)行產(chǎn)前診斷的理由有3條:(1)防止母源污染:DMD和SMA以缺失型突變?yōu)橹?母源污染將導(dǎo)致診斷錯(cuò)誤,發(fā)生血性羊水時(shí)若不經(jīng)培養(yǎng)則直截了當(dāng)導(dǎo)致診斷錯(cuò)誤,而絨毛則可通過(guò)形態(tài)檢查準(zhǔn)確挑選。(2)早期診斷:如胎兒受累,處理比

8、較方便(夫婦的知情選擇),而且萬(wàn)一取材失敗或分析中出現(xiàn)問(wèn)題,還可在稍后時(shí)間取羊水;采集羊水在孕中期,萬(wàn)一發(fā)生血性污染則需進(jìn)行羊水培養(yǎng),回旋余地太小,重新取樣時(shí)間上比較困難。(3)成功率高:絨毛提取的DNA質(zhì)好量多,成功率高。 產(chǎn)前診斷-時(shí)機(jī)產(chǎn)前診斷有2個(gè)時(shí)間窗口:首選1012孕周采集絨毛;次選為1由于基因突變情況復(fù)雜,產(chǎn)前診斷前要進(jìn)行先證者預(yù)分析,以確定其基因突變細(xì)節(jié)及父母基因多態(tài)性標(biāo)記是否提供了雜合狀態(tài)的信息,以確定在該家系中實(shí)行產(chǎn)前診斷的途徑和策略。首先應(yīng)進(jìn)行家系成員21號(hào)染色體上STR標(biāo)記的分析。 該項(xiàng)檢測(cè)具備的優(yōu)點(diǎn):一是檢測(cè)21三體綜合征,因?yàn)樵诙紊龝r(shí)孕婦年齡普遍偏大,生育21三體

9、綜合征患兒的風(fēng)險(xiǎn)大為提高;二是判斷是否有母源污染及污染程度,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“胎兒材料”完全是母源的情況;三是核對(duì)所分析的DNA材料是否存在混亂。后兩點(diǎn)是導(dǎo)致產(chǎn)前診斷差錯(cuò)的主要原因。產(chǎn)前診斷-策略由于基因突變情況復(fù)雜,產(chǎn)前診斷前要進(jìn)行先證者預(yù)分析,以確定其確定胎兒性別 如胎兒為男性,則應(yīng)針對(duì)先證者的基因突變或多態(tài)性標(biāo)記進(jìn)行分析,確定胎兒是否獲得突變等位基因;如為女性,則可停止基因診斷,因?yàn)榕噪s合子通常不患病。產(chǎn)前診斷-策略確定胎兒性別產(chǎn)前診斷-策略多重PCRSTR-PCR探針連接多重?cái)U(kuò)增(MLPA)變性高效液相色譜(DHPLC)抗肌萎縮蛋白的免疫組化DMD-產(chǎn)前基因診斷方法多重PCRDMD-產(chǎn)前基

10、因診斷方法DMD是以缺失型突變占基因的突變55%65%,主要分布5端和中央2個(gè)缺失熱點(diǎn)區(qū),在對(duì)其缺失突變熱點(diǎn)區(qū)進(jìn)行基因檢測(cè)時(shí),可檢出至少一半患者。它是目前用于缺失型DMD診斷最簡(jiǎn)便最有效的方法,已成為D/BMD患者基因診斷及產(chǎn)前基因診斷的首選技術(shù),而且此技術(shù)可依照檢出缺失外顯子是整碼依然移碼來(lái)判斷患者的預(yù)后。產(chǎn)前診斷-缺失型突變檢測(cè)方法多重PCRDMD是以缺失型突變占基因的突變55%65%,主要分布5多重PCR方法可檢測(cè)到缺失型男性患者,對(duì)女性攜帶者及非缺失型突變患者無(wú)能為力。目前應(yīng)用STR-PCR技術(shù)進(jìn)行連鎖分析已成為非缺失型DMD家系連鎖分析的首選技術(shù)。此方法在有先證者的家系或先證者已故但

11、有肯定攜帶者的家系中較有價(jià)值,而先證者已故的散發(fā)病例意義不大,是一種概率性診斷,只有選擇的STR位點(diǎn)越多,其分析結(jié)果越可靠。聯(lián)合多重PCR和STR多態(tài)單體型連鎖分析是缺失和重復(fù)型檢測(cè)的理想方法,可對(duì)胎兒進(jìn)行初步的產(chǎn)前基因診斷,但對(duì)由新生突變所致的散發(fā)型DMD者不能作出檢測(cè),可用其他方法解決。產(chǎn)前診斷-非缺失型突變檢測(cè)方法STR-PCR多重PCR方法可檢測(cè)到缺失型男性患者,對(duì)女性攜帶者及非缺失型目前MLPA是檢測(cè)缺失和重復(fù)突變的新方法,尤其對(duì)受累者致病性突變未知的女性攜帶者基因突變的篩查更為重要。它可全面分析DMD基因的79個(gè)外顯子的缺失或重復(fù)突變,擴(kuò)大傳統(tǒng)mPCR方法檢測(cè)缺失的范圍,簡(jiǎn)便、高效,但技術(shù)條件要求高,成本大。產(chǎn)前診斷-探針連接多重?cái)U(kuò)增(MLPA)目前MLPA是檢