基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)培訓(xùn)課件

1、基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)第一節(jié)基因診斷的概念及常用技術(shù)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)2第一節(jié)基因診斷的概念及常用技術(shù)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)2基因診斷利用分子生物學(xué)技術(shù)，從DNA/RNA水平檢測(cè)基因的存在,分析基因的結(jié)構(gòu)變異和表達(dá)狀態(tài)，從而對(duì)疾病作出診斷。一、基本概念基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)3基因診斷利用分子生物學(xué)技術(shù)，從DNA/RNA水平檢測(cè)基因二、基因診斷常用方法核酸分子雜交PCRDNA序列測(cè)定 DNA芯片技術(shù)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)4二、基因診斷常用方法核酸分子雜交基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)4(一)核酸雜交基本原理-核酸變性和復(fù)性理論 即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開(kāi)，而在條件恢復(fù)后又可

2、依堿基配對(duì)規(guī)律形成雙鏈結(jié)構(gòu)。因此應(yīng)用已知堿基序列的單鏈核苷酸片段作為探針，就可檢測(cè)樣本中是否存在與其互補(bǔ)的同源核苷酸序列?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)5(一)核酸雜交基本原理-核酸變性和復(fù)性理論基probeprobe基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)6probeprobe基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)6核酸雜交的關(guān)鍵要素probe DNAtarget DNAsignal detection基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)7核酸雜交的關(guān)鍵要素probe DNA基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)7核酸雜交方法分類(lèi)按作用環(huán)境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類(lèi)型。固相雜交是將參加反應(yīng)的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應(yīng)核酸游離在溶液中。液相雜交所參加反應(yīng)

3、的兩條核酸鏈都游離在溶液中。基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)8核酸雜交方法分類(lèi)按作用環(huán)境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類(lèi)型固相雜交分類(lèi)Southern 印記雜交Northern 印記雜交斑點(diǎn)雜交原位雜交基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)9固相雜交分類(lèi)Southern 印記雜交基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)9Southern blot是最經(jīng)典的基因分析方法，不但能檢出特異的DNA片段，而且能進(jìn)行定量和測(cè)定分子量，可用于基因的酶切圖譜分析、基因突變分析等?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)10Southern blot基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)10Northern雜交用于RNA的檢測(cè)，能對(duì)組織細(xì)胞中總RNA或mRNA進(jìn)行定性和定量分析?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)

4、培訓(xùn)11Northern雜交用于RNA的檢測(cè)，能對(duì)組織細(xì)胞中總RNA斑點(diǎn)雜交（Dot blot） 可用基因組中特定基因及其表達(dá)的定性及定量分析，方法簡(jiǎn)單、快速靈敏、樣品用量少；其缺點(diǎn)是不能鑒定所測(cè)基因的分子量，特異性不高，有一定比例的假陽(yáng)性?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)12斑點(diǎn)雜交（Dot blot） 可用基因組中特定基因及其表達(dá)原位雜交（Colony in situ hybridization） 可查明染色體中特定基因的位置，用于染色體疾病的診斷；原位雜交的結(jié)果是顯示有關(guān)核酸序列的空間位置情況，因此可檢出含核酸序列的具體細(xì)胞，細(xì)胞的具體定位，數(shù)目和類(lèi)型，可檢出基因和基因產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位?；蛟\療醫(yī)學(xué)

5、知識(shí)培訓(xùn)13原位雜交（Colony in situ hybridiza（二）利用PCR及結(jié)合其他技術(shù)進(jìn)行基因診斷直接采用PCR進(jìn)行基因診斷采用PCR產(chǎn)物的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（PCR-RFLPs）進(jìn)行基因診斷采用PCR結(jié)合等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）斑點(diǎn)雜交進(jìn)行基因診斷 *通過(guò)PCR產(chǎn)物的反相點(diǎn)雜交(RBD)進(jìn)行基因診斷采用PCR產(chǎn)物的單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析進(jìn)行基因診斷采用PCR技術(shù)對(duì)靶核酸進(jìn)行定量分析基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)14（二）利用PCR及結(jié)合其他技術(shù)進(jìn)行基因診斷直接采用PCR進(jìn)行寡核苷酸雜交分析SNP和等位基因特異寡核苷酸雜交 （ASO）#基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)15寡核

6、苷酸雜交分析SNP和等位基因特異寡核苷酸雜交 （ASO）（三） DNA序列測(cè)定 DNA序列測(cè)定是進(jìn)行基因突變檢測(cè)的最直接、最準(zhǔn)確的方法，可以確定突變的部位，突變的性質(zhì)?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)16（三） DNA序列測(cè)定 DNA序列測(cè)定是進(jìn)行基因突變檢（四 ） DNA芯片技術(shù) 應(yīng)用DNA芯片，可以檢測(cè)基因的結(jié)構(gòu)及其突變多態(tài)性，對(duì)基因表達(dá)的情況進(jìn)行分析?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)17（四 ） DNA芯片技術(shù) 應(yīng)用DNA芯片，可以檢測(cè)基因的二 基因診斷的特點(diǎn)高特異性高靈敏度獲得穩(wěn)定的結(jié)果早期快速適用性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)18二 基因診斷的特點(diǎn)高特異性基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)18第二節(jié) 遺傳病的基因診

7、斷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)19第二節(jié) 遺傳病的基因診斷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)19一、概述 人類(lèi)的遺傳病達(dá)數(shù)千種地中海貧血在意大利等國(guó)家發(fā)病率達(dá)10鐮狀細(xì)胞貧血在美國(guó)黑人中發(fā)病率達(dá)14我國(guó)常見(jiàn)的遺傳性疾病有地中海貧血、異常血紅蛋白病和血友病。有效治療難；通過(guò)基因診斷進(jìn)行攜帶者篩查，產(chǎn)前早期診斷，降低發(fā)病率?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)20一、概述 人類(lèi)的遺傳病達(dá)數(shù)千種基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)20二、鐮狀細(xì)胞貧血血紅蛋白?。ó惓Ｑt蛋白?。┘t細(xì)胞呈鐮刀狀，壽命短，引起溶血性貧血?；颊叨嘣诔赡暌郧八劳龌蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)21二、鐮狀細(xì)胞貧血基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)21Mst酶切位點(diǎn)(CCTNAGG)53正?；?3突變基

8、因1.15kb1.35kb（一）鐮狀紅細(xì)胞貧血分子機(jī)制5 67-Pro GluGlu-CCT GAG GAG-5 67-Pro AlaGlu-CCT GTG GAG-基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)22Mst酶切位點(diǎn)(CCTNAGG)53正常基因53（二）鐮狀細(xì)胞貧血的基因診斷方法限制性?xún)?nèi)切酶/Southern blot采集制備血液DNA內(nèi)切酶Mst消化電泳轉(zhuǎn)膜32P標(biāo)記的珠蛋白cDNA雜交放射自顯影基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)23（二）鐮狀細(xì)胞貧血的基因診斷方法限制性?xún)?nèi)切酶/Souther+0.2kb1.15kb1.35kb正常人突變攜帶著患者鐮狀紅細(xì)胞貧血患者基因組的限制性酶切分析基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)24+0

9、.2kb1.15kb1.35kb正常人突變攜帶著患者鐮PCR/限制性?xún)?nèi)切酶設(shè)計(jì)引物PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行限制性?xún)?nèi)切酶酶切電泳EB染色直接觀察例：引物1：5-GGG CTG GGC ATA AAA GTCA-3引物2：5-AAT AGA CCA ATA GGC AGAG-3擴(kuò)增產(chǎn)物294bp鐮狀細(xì)胞貧血的基因診斷方法基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)25PCR/限制性?xún)?nèi)切酶鐮狀細(xì)胞貧血的基因診斷方法基因診療醫(yī)學(xué)知引物1CCT GAG GAGCCT GTG GAG引物1引物2引物2294bp103bp191bpMst酶切位點(diǎn)(CCTNAGG)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)26引物1CCT GAG GAGCCT GTG GAG

10、引+103bp191bp294bp正常人突變攜帶著患者鐮狀紅細(xì)胞貧血患者PCR產(chǎn)物的限制性酶切分析基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)27+103bp191bp294bp正常人突變攜帶著患者鐮狀紅RT-PCR/序列分析采集制備血液RNART-PCR產(chǎn)物測(cè)序推測(cè)氨基酸序列進(jìn)行診斷鐮狀細(xì)胞貧血的基因診斷方法基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)28RT-PCR/序列分析鐮狀細(xì)胞貧血的基因診斷方法基因診療醫(yī)學(xué)二、地中海貧血(Thalassaemia,簡(jiǎn)寫(xiě)thal或T)珠蛋白基因突變導(dǎo)致該多肽鏈的合成大為減少（）或完全缺失（0）珠蛋白合成速率降低，導(dǎo)致鏈和鏈合成的不平衡多余的珠蛋白鏈沉積在紅細(xì)胞膜上改變了膜的通透性和硬度導(dǎo)致溶血性貧血

11、。高危人群地中海人、中東人、印度人、中國(guó)人；中國(guó)人群中又一廣東、廣西、四川、貴州等省發(fā)病率最高。缺乏有效治療措施。基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)29二、地中海貧血(Thalassaemia,簡(jiǎn)寫(xiě)t（一） 地貧病的分子基礎(chǔ)珠蛋白基因全長(zhǎng)2053bp，含2個(gè)內(nèi)含子（IVSI和IVS-II），3個(gè)外顯子。目前發(fā)現(xiàn)突變有百余種，中國(guó)人群發(fā)現(xiàn)約20種；一般對(duì)特定種族來(lái)說(shuō)，90%的地貧基因僅由46種突變組成?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)30（一） 地貧病的分子基礎(chǔ)珠蛋白基因全長(zhǎng)2053bp，含2（二） 地中海貧血的基因診斷PCR/ASO斑點(diǎn)雜交法合成2對(duì)PCR引物（擴(kuò)增區(qū)段700bp和580bp，分別包含14種和1種可能突

12、變）合成等位特異寡核苷酸(ASO)探針（46對(duì)，分別標(biāo)記）制備DNA樣品PCR擴(kuò)增斑點(diǎn)印跡雜交RFLP分析法基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)31（二） 地中海貧血的基因診斷PCR/ASO斑點(diǎn)雜交法基因診三地中海貧血的基因診斷ac左側(cè)缺失4.2kb右側(cè)缺失3.7kbbbba2112N端1C端正?；蛐蛄蠵CR擴(kuò)增法定性分析左側(cè)缺失型基因序列右側(cè)缺失型基因序列ac擴(kuò)增0.4kbab無(wú)擴(kuò)增片段ab擴(kuò)增1.2kb基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)32三地中海貧血的基因診斷a左側(cè)缺失4.2kb右側(cè)缺失3.7k+0.4kb1.2kb正常人右側(cè)缺失患者地中海貧血患者基因組的PCR分析左側(cè)缺失患者基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)33+0.4kb1

13、.2kb正常人右側(cè)缺地中海貧血患者基因組的P四、杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD） 1. DMD是常見(jiàn)的性連鎖隱性遺傳病， 2. 主要特征是進(jìn)行性肌萎縮和腸肌假性肥大，XP21.2121.3區(qū)抗肌萎縮蛋白基因突變形式不同。DMD多在5歲發(fā)病，10歲左右癱瘓，在20歲左右由于心力和呼吸衰竭而死亡，其發(fā)病率為活產(chǎn)男嬰的1/3500。 基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)34四、杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD） 1. DMD是常見(jiàn)（一）DMD分子基礎(chǔ)： 抗肌萎縮蛋白基因長(zhǎng)約2900kb，含79個(gè)外顯子?？辜∥s蛋白基因突變分為基因缺失型和非基因缺失型。（1）DNA片段缺失（60%的病例導(dǎo)致閱讀框移碼移碼實(shí)變致DMD，整碼缺失BM

14、D）。缺失的2個(gè)熱點(diǎn)區(qū)該基因5端處4555外顯子范圍內(nèi)。（2）非基因缺失型部分重復(fù)（病例的5%）基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)35（一）DMD分子基礎(chǔ)：基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)35（1）基因組探針?lè)?用XP21區(qū)分離得到的不同探針如（P20）來(lái)進(jìn)行相應(yīng)內(nèi)切酶酶譜分析、檢出率取決于探針數(shù)和酶切位點(diǎn)數(shù)目。（2）cDNA探針?lè)辜∥s蛋白基因系列cDNA探針?lè)治龌颊呋蛉笔?、外顯子拼接改變和基因內(nèi)部分重復(fù)。（3）多重PCR法如有人設(shè)計(jì)多對(duì)引物進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增該基因的9個(gè)易發(fā)缺失“熱點(diǎn)區(qū)”DNA片段，可檢出80%有基因缺失的DMD患者。（4）多態(tài)性分析法基因內(nèi)及其旁側(cè)探針進(jìn)行RFLP連鎖分析。（5）RTPCR擴(kuò)增

15、該基因外顯子（全長(zhǎng)2.4MB、外顯子起來(lái)全長(zhǎng)c14kb、用多對(duì)引物）可檢出：外顯子拼接異常。聯(lián)用測(cè)序：可定位基因缺失的起始和終止?；蛟\療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)36（1）基因組探針?lè)?基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)361、苯丙酮尿癥是一種常見(jiàn)的隱性遺傳性氨基酸代謝病。2、主要特征：（1）苯丙氨酸 酪氨酸多巴兒茶酚胺 苯丙酮酸 酪胺 黑色素 （2）患兒出生后須及早得到低phe飲食治療，否則發(fā)生不可逆大腦損害和嚴(yán)重智力發(fā)育障礙。 苯丙氨酸羥化酶（肝）五、苯丙酮尿癥（PKU）基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)371、苯丙酮尿癥是一種常見(jiàn)的隱性遺傳性氨基酸代謝病。苯丙氨酸羥（一 ） PKU分子基礎(chǔ)（1）迄今約3/4的導(dǎo)致中國(guó)人PKU的

16、突變基因已被查清 ，它們分屬11種PAH基因點(diǎn)突變。體外研究表明，這些突變導(dǎo)致PAH活力或喪失。（2）PAH第11外顯子的第399密碼GTA（val）GTT（val）中性突變：不改變?nèi)魏蜗拗泼缸R(shí)別位點(diǎn)，故又稱(chēng)“序列多態(tài)性”。這一“序列多態(tài)性”在PKU患者和正常人中存在著連鎖不平衡性， 故可作為一種“遺傳標(biāo)記”應(yīng)用于產(chǎn)前診斷。基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)38（一 ） PKU分子基礎(chǔ)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)38PCR/ASO探針?lè)ê蚉CR-RFLP連鎖分析法。PCR/SSCP直接測(cè)序法若待診斷的PKU家系的基因突變類(lèi)型尚屬“未知”或無(wú)RFLP信息。（二）PKU的DNA診斷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)39（二）PKU的

17、DNA診斷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)39先合成ASO如：正常探針：TCCATTAACAGTAAGAATTT突變探針： TCCATTAACAATAAGAATTT利用PCR/ASO探針?lè)ㄔ\斷苯丙酮尿癥基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)40先合成ASO利用PCR/ASO探針?lè)ㄔ\斷苯丙酮尿癥基因診療醫(yī)利用PCR/ASO探針?lè)ㄔ\斷苯丙酮尿癥 健康男性 男性攜帶者男性患者 健康女性 女性攜帶者女性患者正常探針突變探針基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)41利用PCR/ASO探針?lè)ㄔ\斷苯丙酮尿癥 第三節(jié) 腫瘤的基因診斷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)42第三節(jié) 腫瘤的基因診斷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)421通過(guò)檢測(cè)腫瘤染色體易位及融合基因診斷腫瘤慢粒：（染色體

18、易位）費(fèi)城染色體PCR檢測(cè)融合基因2檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因癌基因（ras）、抑癌基因（ p53）、腫瘤轉(zhuǎn)移基因3檢測(cè)腫瘤相關(guān)病毒基因HBV HCV肝癌EB鼻咽癌4檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物基因或mRNA 肝癌甲胎蛋白（AFP）結(jié)腸癌癌胚抗原（CEA）腫瘤基因診斷的策略基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)431通過(guò)檢測(cè)腫瘤染色體易位及融合基因診斷腫瘤腫瘤基因診斷的策腫瘤標(biāo)記物基因的檢測(cè)著絲粒 染色體 22 bcr genec- abl gene 染色體 9 bcr-mRNA bcr-abl mRNA 染色體 9, 22 bcr-abl 融合蛋白（具PTK活性） 慢性骨髓白血病 引物A 引物 B基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)44腫瘤標(biāo)記物基

19、因的檢測(cè)著絲粒 染色體 22 bcr gene2癌基因和抑癌基因的檢測(cè)ras癌基因的檢測(cè)ras基因中最常見(jiàn)的點(diǎn)突變是第12，13或61密碼子突變檢測(cè)方法：PCR/ASOPCR-SSCP基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)452癌基因和抑癌基因的檢測(cè)ras癌基因的檢測(cè)基因診療醫(yī)學(xué)知 p53的檢測(cè)p53基因突變主要為點(diǎn)突變，熱點(diǎn)區(qū)域位于密碼子130290，以175、273、284最多見(jiàn)檢測(cè)方法：PCRSSCPPCR測(cè)序PCRRFLP基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)46 p53的檢測(cè)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)46 其它基因的 檢測(cè)PCR結(jié)合其它技術(shù)基因芯片基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)47 其它基因的 檢測(cè)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)474、腫瘤標(biāo)志

20、物檢測(cè)或mRNA診斷腫瘤標(biāo)志物是由腫瘤組織細(xì)胞產(chǎn)生的、與腫瘤形成和發(fā)展相關(guān)的物質(zhì)，包括腫瘤抗原、激素、酶、同工酶等?；驑?biāo)志和基因表型標(biāo)志（胚胎性抗原）檢測(cè)方法：PCRASOPCR測(cè)序PCRRFLPPCRSSCP基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)484、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)或mRNA診斷腫瘤標(biāo)志物基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培第四節(jié) 感染性疾病的基因診斷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)49第四節(jié) 感染性疾病的基因診斷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)49一、感染性疾病基因診斷的策略針對(duì)病原體特異的核酸序列設(shè)計(jì)探針進(jìn)行雜交應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增病原體基因保守序列核酸雜交技術(shù)與PCR技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)50一、感染性疾病基因診斷的策略針對(duì)病原體特

21、異的核酸序列設(shè)計(jì)探特點(diǎn)簡(jiǎn)便、特異、快捷能檢測(cè)出潛在的病原體可對(duì)病原體進(jìn)行分類(lèi)、分型鑒定不能得知病原體進(jìn)入體內(nèi)后機(jī)體的反應(yīng)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)51特點(diǎn)簡(jiǎn)便、特異、快捷基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)51二、基因診斷的感染性疾?。ㄒ唬?、病毒特點(diǎn)：分離培養(yǎng)周期長(zhǎng)，操作繁雜，制約因素多電鏡觀察直觀快速，但昂貴免疫學(xué)診斷簡(jiǎn)便快速，但存在問(wèn)題：不易檢出潛伏期的病毒有些病毒亞型多，抗原變異性大整合進(jìn)入人基因組的病毒基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)52二、基因診斷的感染性疾?。ㄒ唬?、病毒基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)52病毒核酸分析技術(shù)HBV包含4個(gè)開(kāi)放閱讀框，S、C、P、XPCRPCR/限制性?xún)?nèi)切酶譜分析PCR/點(diǎn)雜交,PCR/Southe

22、rn blot基因芯片目的基因引物序列擴(kuò)增片段C5ACTGTTCAAGCCTCCAAGCT3425 bp5AGTGCGAATCCACACTC3基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)53病毒核酸分析技術(shù)HBV包含4個(gè)開(kāi)放閱讀框，S、C、P、X目 調(diào)節(jié)和啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄 LTR gag pol env tat，rev LTR 長(zhǎng)末端重復(fù)序列調(diào)節(jié)蛋白基因正常的病毒基因產(chǎn)生病毒核心蛋白產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶 產(chǎn)生病毒 外膜蛋白附加基因*HIV病毒基因組結(jié)構(gòu)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)54 調(diào)節(jié)和 LTR gag pol env 基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)培訓(xùn)課件SARSRTPCR 多重PCR 熒光定量PCR基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)56SARSRT

23、PCR基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)56（二）、細(xì)菌細(xì)菌性痢疾志賀菌，侵襲性大腸桿菌，大質(zhì)粒；PCR結(jié)核病PCR 基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)57（二）、細(xì)菌基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)57（三）、寄生蟲(chóng) 重復(fù)序列探針?lè)?、寡核苷酸探針?lè)?、基因組探針?lè)?、PCR基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)58（三）、寄生蟲(chóng)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)58第五節(jié) 基因診斷策略基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)59第五節(jié) 基因診斷策略基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)59（一）檢測(cè)致病基因突變基因變異致病的類(lèi)型：內(nèi)源基因的變異基因結(jié)構(gòu)的突變點(diǎn)突變、插入、缺失、重排、異位基因表達(dá)異常mRNA剪接異常外源基因的插入基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)60（一）檢測(cè)致病基因突變基因變異致病的類(lèi)型：基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培點(diǎn)突變的診斷診斷已知的點(diǎn)突變 （PCR） 一對(duì)探針突變堿基置探針中央控制雜交條件結(jié)果分析：反向雜交技術(shù)基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)61點(diǎn)突變的診斷診斷已知的點(diǎn)突變 （PCR）基因診療醫(yī)學(xué)知識(shí)培診