分子生物學基礎的知識

1、關于分子生物學基礎知識第1頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四一、核酸分子的基本組成(deoxyribonucleic acid, DNA)(ribonucleic acid, RNA)脫氧核糖核酸 核糖核酸核苷酸核苷堿基磷酸戊糖核糖脫氧核糖嘌呤嘧啶第2頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(一) 堿 基1、特性： 共軛性分子結構，共軛雙鍵，260nm處有最大吸收嘌呤(purine) 弱堿性，低PH值時可接受質子嘧啶(pyrimidine)堿基間存在疏水堆積力第3頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、種類和結構： 嘌呤腺嘌呤(a

2、denine, A)鳥嘌呤(guanine, G)第4頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四嘧啶胞嘧啶(cytosine, C)尿嘧啶(uracil, U)胸腺嘧啶(thymine, T)第5頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(二) 戊 糖（構成DNA）2、脫氧核糖(deoxyribose)（構成RNA）123451、核糖(ribose)2OH 親水極性集團 易水解 易受攻擊RNA不穩(wěn)定性無2OH，DNA相對穩(wěn)定第6頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(三) 核 苷戊糖C1嘌呤N9嘧啶N1糖苷鍵/糖甙鍵核糖核苷脫氧核糖核苷11第

3、7頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(四) 核苷酸1、核苷酸 核苷+磷酸 磷酸酯鍵 戊糖+堿基+磷酸第8頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、游離核苷酸ADPATPAMP第9頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(五) 核酸的一級結構1、定義核酸中核苷酸的排列順序。由于核苷酸間的差異主要是堿基不同，所以也稱為堿基序列。5端3端CGA2、核苷酸鏈的方向性：PO4OH5端3端第10頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四3、一級結構的表示方法 結構式/線條式/字母式A G P5 P T PG PC PT P OH

4、 3 5 pApCpTpGpCpT-OH 3 5 A C T G C T 3 5端3端CGA磷酸基團35磷酸二酯鍵羥基第11頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四DNA一級結構的基本特點4種dNTP以3、5磷酸二酯鍵相連構成一個沒有分枝的線性大分子。它們的兩個末端分別稱5末端（游離磷酸基）和3末端（游離羥基）。第12頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四思考題：ATGGTTAG的互補序列： A、TACCGAATC B、CTAAGCCAT ATGGTTAG的反向互補序列： A、CTAACCAT第13頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四

5、(六) DNA與RNA在組成上的區(qū)別DNARNA堿基 AGCT AGCU戊糖 脫氧核糖 核糖結構 雙鏈 大多單鏈，局部雙鏈配對 AT AU G C G C 第14頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四二、DNA的空間結構(一) DNA的二級結構 雙螺旋結構第15頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四1、特征反向平行的雙螺旋反向平行配對規(guī)律疏水堿基平面處于內側，親水戊糖與磷酸骨架處于外測第16頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四第17頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四右手螺旋右手螺旋每周10個堿基，每對堿基36

6、，堿基平面距離0.34nm存在大溝、小溝(大溝和小溝分別指雙螺旋表面凹下去的較大溝槽和較小溝槽。 )穩(wěn)定因素橫向：氫鍵縱向：堿基疏水堆積力第18頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、雙螺旋結構的多樣性ABZ第19頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四Z-DNA是比較特殊的，它與其他DNA不同之處在于它是在減數第一次分裂前期中的偶線期產生的，約占DNA總量的0.3%。 當一段Z-DNA形成時，其兩端必為B-Z相互結合型態(tài)，形成與B-DNA的接口。Z-DNA能夠與B-DNA構成相互結合型態(tài)，這種結構會使一對堿基突出于雙螺旋之外。 第20頁，共95頁，20

7、22年，5月20日，11點13分，星期四ABZB-DNA第21頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(二) DNA的三級結構 超螺旋結構超螺旋結構(superhelix 或supercoil)DNA雙螺旋鏈再盤繞即形成超螺旋結構。 正超螺旋(positive supercoil)盤繞方向與DNA雙螺旋方同相同 負超螺旋(negative supercoil)盤繞方向與DNA雙螺旋方向相反 第22頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四第23頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四多級螺旋模型壓縮倍數 7 6 40 5 （8400） DNA

8、 核小體 螺線管 超螺線管 染色單體 2nm 10nm 30(10)nm 400nm 210m 一級包裝 二級包裝 三級包裝 四級包裝第24頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四三、DNA的功能(一)DNA的基本功能:以基因的形式荷載遺傳信息，作為基因復制的模板，是生命遺傳的物質基礎。是轉錄的模板，是個體生命活動的信息基礎。(二)基本概念:基因(gene)：攜帶遺傳信息的一段特定的核苷酸序列，可自我復制并指導轉錄?；蚪M(genomic)：一個生物體所包含的全部遺傳信息的總和，即全部DNA序列。遺傳密碼(genetic code)：DNA堿基序列與蛋白質的氨基酸序列之間存在

9、的對應關系。起始密碼(ATG)AUG 終止密碼：UAA UAG UGA第25頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四四、RNA的結構(一) RNA的結構特征:組成：核糖 堿基A U C G單鏈，局部形成雙鏈。含稀有堿基較多DHU(二氫尿嘧啶)，T（假尿嘧啶），甲基化，甲羥化，乙酰化等第26頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(二) RNA的種類:1、參與基因表達的RNA信使RNA（mRNA）：遺傳信息的傳遞，翻譯模板轉運RNA （tRNA）：氨基酸載體核糖體RNA （rRNA）：提供蛋白質合成的場所2、核不均一RNA（hnRNA）:mRNA的前體3、核內

10、小RNA （snRNA）：參與hnRNA的剪接、轉運4、 核仁小RNA（snoRNA）：參與rRNA的加工修飾 5、胞質小RNA （hnRNA）: 運輸新合成的Pr到高爾基體加工6、小片段干擾RNA（siRNA）：誘發(fā)外源mRNA的降解第27頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(三) mRNA含量最少種類繁多半衰期最短原核生物mRNA為多順反子 真核生物mRNA為單順反子1、mRNA的特征：第28頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、真核生物mRNA的帽子結構：類型 m7G 5ppp 5 Np (O型) m7G 5ppp 5 NmpNp (I型)

11、m7G 5ppp 5 NmpNmpNp (II型) 第29頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四Human wild p16 mRNACtcctccgagcactcgctcacggcgtccccttgcctggaaagataccgcggtccctccagaggatttgagggacagggtcggagggggctcttccgccagcaccggaggaagaaagaggaggggctggctggtcaccagagggtggggcggaccgcgtgcgctcggcggctgcggagagggggagagcaggcagcgggcggcggggagcagcatggagccggc

12、ggcggggagcagcatggagccttcggctgactggctggccacggccgcggcccggggtcgggtagaggaggtgcgggcgctgctggaggcgggggcgctgcccaacgcaccgaatagttacggtcggaggccgatccaggtcatgatgatgggcagcgcccgagtggcggagctgctgctgctccacggcgcggagcccaactgcgccgaccccgccactctcacccgacccgtgcacgacgctgcccgggagggcttcctggacacgctggtggtgctgcaccgggccggggcgcggct

13、ggacgtgcgcgatgcctggggccgtctgcccgtggacctggctgaggagctgggccatcgcgatgtcgcacggtacctgcgcgcggctgcggggggcaccagaggcagtaaccatgcccgcatagatgccgcggaaggtccctcagacatccccgattgaaagaaccagagaggctctgagaaacctcgggaaacttagatcatcagtcaccgaaggtcctacagggccacaactgcccccgccacaacccaccccgctttcgtagttttcatttagaaaatagagcttttaaaaatgtc

14、ctgccttttaacgtagatatatgccttcccccactaccgtaaatgtccatttatatcattttttatatattcttataaaaatgtaaaaaagaaaaacaccgcttctgccttttcactgtgttggagttttctggagtgagcactcacgccctaagcgcacattcatgtgggcatttcttgcgagcctcgcagcctccggaagctgtcgacttcatgacaagcattttgtgaactagggaagctcaggggggttactggcttctcttgagtcacactgctagcaaatggcagaaccaaagc

15、tcaaataaaaataaaataattttcattcattcactca第30頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四功能a、穩(wěn)定mRNAb、有利于mRNA由核內到胞漿的轉位c、有利于與核糖體蛋白的結合、與翻譯起始蛋白的結合3、真核生物mRNA的3poly（A）尾巴：結構：200多個串聯(lián)的聚合腺苷酸，poly（A）長則半衰期長功能： a、穩(wěn)定mRNA模板 b、有利于從核內到胞漿的轉運第31頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四4、真核生物mRNA的5非翻譯區(qū)， 3非翻譯區(qū)：hnRNA （胞核） 內含子(intron)mRNA （胞液） 外顯子(exon)

16、DNA （胞核）protein5mG3poly（A）第32頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四1、原核細胞和真核細胞的核糖體組成原核細胞真核細胞(哺乳動物細胞)沉降常數近似分子量沉降常數近似分子量核蛋白體70S2.710680S4.6106小亞基30S0.910640S1.5106rRNA16S0.610618S0.7106蛋白質21種0.3106約30種0.78106大亞基50S2.010660S3.0106rRNA23S1.210628S1.71065.8S4.01045S3.21045S3.2104蛋白質34種0.7106約50種1.37104(四) rRNA第33

17、頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四第34頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、rRNA的特征： 分子量最大，含量最多占RNA的80 一級結構較保守，代謝穩(wěn)定 含甲基化堿基較多，利于與蛋白質結合 含有許多基環(huán)結構，存在大量氫鍵3、rRNA的二級結構 基/莖環(huán)結構大腸桿菌16S rRNA的二級結構第35頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、rRNA的功能：在翻譯的各階段均與tRNA、rRNA相互作用。 小亞基上有帽結合蛋白的識別位點，識別mRNA的帽子結構(五) tRNA1、一級結構：分子量最小含有稀有堿基最多20個核苷酸是保

18、守的，10個核苷酸是恒定的空間結構相似3端CCAOH第36頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、空間結構：二級結構三葉草結構攜帶氨基酸辨認并結合氨基酰tRNA合成酶識別mRNA上的密碼識別并結合核蛋白體氨基酸臂DHU臂反密碼臂可變臂TC臂第37頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四 tRNA的三級結構倒L形結構第38頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四五、核酸的理化性質及應用(一) 一般理化性質1、粘度 DNA RNA2、沉降系數 DNA RNA3、酸堿性質 DNA PI 44.5 ，PH 4.0 11.0 穩(wěn)定，提取pH8.0

19、 RNA PI 22.5 提取pH4.5左右，混有很少DNA污染第39頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(二) 紫外吸收特征1、堿基的行為表現(xiàn) 共軛雙劍在260nm有最大吸收第40頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、應用 測定濃度 OD260 = 1.0 相當于雙鏈DNA 50g/ml 單鏈DNA（或RNA） 40g/ml 寡核苷酸 20g/ml 判斷核酸樣品的純度 DNA純品: OD260/OD280 = 1.8 RNA純品: OD260/OD280 = 2.0 測定是否變性 DNA完全變性 增加 2540 RNA變性 增加 1.1左右第41

20、頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(三) 變性和復性1、定義：通過加熱、化學因素（尿素或者甲酰胺）等外力作用DNA解螺旋，由雙鏈變成單鏈稱為DNA變性。2、變性因素： 加熱 強酸強堿 有機溶劑3、變性后理化性質的改變 增色效應堿基暴露 Tm值：DNA在加熱變性過程中紫外吸收達最大值一半時的溫度。 沉降系數增加 粘度下降第42頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四第43頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四4、復性：變性的DNA在適當的溫度、一定離子強度條件下，給以足夠的時間重新締合形成雙螺旋的過程，稱為復性。5、影響復性的因素：

21、T： Tm 2026 離子強度：降低帶同種電荷單鏈間的排斥 DNA濃度 DNA復雜程度6、分子雜交：不同來源的具有互補序列的兩條核酸單鏈，在一定條件下可以按堿基互補原則形成雙鏈的過程。第44頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四六、遺傳中心法則轉錄翻譯DNARNA蛋白質逆轉錄基因表型控制第45頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四基因經過轉錄、翻譯，產生具有特異生物學功能的蛋白質分子的過程?；虮磉_(gene expression)translationDNAmRNAproteintranscriptionDNARNAtranscriptionDNA無組

22、織特異性基因表達有組織特異性第46頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四核酸生物合成的一般規(guī)律1 按照堿基互補配對原則，以DNA為模板，逆轉錄以RNA為模板2 5 3方向，通過磷酸二酯鍵連接3 特異的聚合酶催化4 聚合酶的底物核苷酸要求是5核糖或脫氧核糖5 RNA聚合酶進行聚合反應時，可從頭合成RNA DNA聚合酶進行聚合反應時，要有3-OH末端第47頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(一) DNA的復制復制(replication)是指遺傳物質的傳代，以親代DNA為模板，以dNTP為原料，按照堿基互補原則合成子鏈DNA的過程。第48頁，共95頁，2

23、022年，5月20日，11點13分，星期四15N鏈14N鏈重氮環(huán)境15N輕氮環(huán)境14N第49頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四3535解鏈方向35335領頭鏈(leading strand)隨從鏈(lagging strand)第50頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四1、復制的方式：母鏈雙螺旋解鏈，以母鏈的兩條單鏈為模板，半保留復制以四種dNTP為原料堿基互補配對規(guī)律子代DNA雙鏈與母鏈堿基序列一致5 3方向，通過磷酸二酯鍵連接第51頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、復制的條件：substrate: dATP, dGT

24、P, dCTP, dTTPtemplate : 解開成單鏈的DNA母鏈模板primer: 提供3-OH末端使dNTP可以依次聚合enzyme： a、DNA聚合酶 b、DNA連接酶 c、引物酶 d、解螺旋酶和拓撲異構酶第52頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四DNA拓撲異構：是指DNA 分子在雙螺旋的基礎上更高層次的結構緊張狀態(tài)與松弛狀態(tài)，即超螺旋狀態(tài)與解旋狀態(tài)之間的相互轉換過程。特點：這過程不發(fā)生堿基組成或順序的任何改變。作用：超螺旋的解旋是復制或轉錄前的必要準備，除了緩解張力以利于復制或轉錄過程的正常進行外，更重要的是暴露DNA 分子中的結合位點，使參與復制或轉錄的各種

25、調控蛋白發(fā)揮作用。 第53頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四解旋、解鏈酶類：拓撲異構酶： 型不耗能，切斷DNA雙鏈中的一條，解除張力后封閉切口；型耗能切斷DNA雙鏈后封閉切口。解旋酶：在復制叉處解開雙螺旋。移動方向可不同。單鏈結合蛋白：結合DNA單鏈，保護單鏈的完整性。第54頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四DNA聚合酶原核生物：DNA pol： 單一肽鏈構成的大分子，只能連續(xù)延長20個核苷酸。主要參與DNA的損傷修復和對空隙進行填補。具有三種活性：5 3的聚合活性;3 5的外切活性；5 3外切活性以枯草桿菌蛋白酶或胰蛋白酶處理， DNA pol

26、裂解為兩個活性片段，較大的C端稱Klenow片段DNA pol：只有3 5的外切活性何DNA聚合活性，在緊急修復中起作用。DNA po:真正催化核酸合成的酶，具有5 3聚合活性和3 5外切活性第55頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四5 3DNA聚合酶活性第56頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四3 5外切活性第57頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四5 3 外切活性第58頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四引物酶：以DNA為模板催化一小段引物RNA合成的酶連接酶： 連接兩條DNA雙鏈上的缺口形成磷酸二酯鍵

27、，不能連接兩條單鏈DNA端粒酶：真核細胞染色體DNA是線性的，它的3端有特殊序列，被稱為端粒，該序列是線性DNA末端復制所必需的。端粒酶是一個蛋白質與RNA組成的核糖核蛋白 ，有逆轉錄酶的性質，能夠利用自己的RNA成分作為模板，與端粒配合合成線性DNA的末端。以保證真核細胞染色體DNA的復制得以完成。第59頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四端粒（Telomere）是真核細胞染色體末端的特殊結構.人端粒是由6個堿基重復序列(TTAGGG)和結合蛋白組成。端粒有重要的生物學功能,可穩(wěn)定染色體的功能,防止染色體DNA降解、末端融合,保護染色體結構基因,調節(jié)正常細胞生長。正常細

28、胞由于線性DNA復制5末端消失,隨體細胞不斷增殖,端粒逐漸縮短,當細胞端?？s至一定程度,細胞停止分裂,處于靜止狀態(tài).故有人稱端粒為正常細胞的“分裂鐘” (Mistosis clock) ，端粒長短和穩(wěn)定性決定了細胞壽命，并與細胞衰老和癌變密切相關。體內DNA復制是以一段由RNA聚合酶合成的小片段為引物的.復制結束后，該引物被切除。因此，每復制一次，都要比母鏈就縮短一節(jié)。但是會不會縮短到沒有呢？第60頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四端粒酶(Telomerase)是使端粒延伸的反轉錄DNA合成酶。是個由RNA和蛋白質組成的核糖核酸-蛋白復合物。其RNA組分為模板,蛋白組分

29、具有催化活性,以端粒3末端為引物,合成端粒重復序列。端粒酶的活性在真核細胞中可檢測到，其功能是合成染色體末端的端粒，使因每次細胞分裂而逐漸縮短的端粒長度得以補償，進而穩(wěn)定端粒長度。主要特征是用它自身攜帶的RNA作模板，通過逆轉錄合成DNA。 第61頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四 Dna A Dna B Dna CDNA拓撲異構酶引物酶SSB3535含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA復制起始區(qū)域的復合結構稱為引發(fā)體。 第62頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四Dna A 1) 在DNA復制過程中，識別起點序列，并在起點特異位置解開雙鏈的一

30、種蛋白質。2) DNA復制起點上有四個9bp的重復序列，為Dna A蛋白的結合位點。3) DNA纏繞其上，形成起始復合物（initial complex）。 第63頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四解鏈過程中正、負超螺旋的形成第64頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四復制的方式半保留復制復制的高保真性雙向復制半不連續(xù)復制復制起始點具有特殊的序列形成復制叉結構需要RNA引物3、復制的基本規(guī)律：第65頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(二) DNA的損傷與修復1、引起突變的因素：物理因素 紫外線照射 電離輻射化學因素 稠環(huán)芳香烴

31、 黃曲霉素B 亞硝酸鹽生物因素 堿基錯配 UV第66頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、DNA損傷修復：光修復光修復酶UVUvrAUvrBUvrCOHPDNA聚合酶OHPDNA連接酶ATP切除修復第67頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四重組修復第68頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四 SOS修復 當DNA損傷廣泛難以繼續(xù)復制時，由此而誘發(fā)出一系列復雜的反應，形成網絡式調控系統(tǒng)。這種修復特異性低，對堿基的識別、選擇能力差。第69頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四(三) 轉錄轉錄 (transcrip

32、tion) 生物體以DNA為模板合成RNA的過程 。mRNA把遺傳信息從染色體內貯存的狀態(tài)轉送至胞質，作為蛋白質合成的直接模板。 轉錄RNADNA 第70頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四1、方式：不對稱轉錄(asymmetric transcription) 在DNA分子雙鏈上某一區(qū)段，一股鏈用作模板指引轉錄，另一股鏈不轉錄 ；模板鏈并非永遠在同一條單鏈上。底物4種NTP5 3方向，通過磷酸二酯鍵連接第71頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四5GCAGTACATGTC 33 c g t g a t g t a c a g 55GCAGUACAUG

33、UC 3NAla Val His Val C編碼鏈、有義鏈、正鏈or Crick鏈模板鏈、無義鏈、負鏈 or Watson鏈mRNA蛋白質轉錄翻譯5335模板鏈編碼鏈編碼鏈模板鏈結構基因轉錄方向轉錄方向第72頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四基因文庫DDBJ（DNA Data Bank of Japan ）EMBL（The European Molecular Biology Laboratory ）第73頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四2、酶 RNA聚合酶（無外切酶活性，不能糾錯）E. Coli 4種亞基構成的五聚體（2） ：決定哪些基因被轉

34、錄 ：催化功能，結合底物NTP，并形成磷酸二酯鍵。：結合DNA模板，參與轉錄的全過程。 ：辨認起始點，70是典型的辨認轉錄起始點蛋白。第74頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四核心酶 core enzyme全酶 holoenzyme第75頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四起始：RNA聚合酶全酶在轉錄起始區(qū)（啟動子）的結合 -35RNA聚合酶識別部位RNA聚合酶結合部位-10原核生物轉錄起始3、轉錄過程第76頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四（一） 原核生物的轉錄起始2 DNA雙鏈解開 , 形成轉錄空泡1 RNA聚合酶全酶 (

35、2 ) 與模板結合 3 在RNA聚合酶作用下 發(fā)生第一次聚合反應 5 -pppGpN OH + ppiRNApol - DNA - pppGpN- OH pppGNTPpppGpN - OHppi起始復合物:5-pppG -OH + NTP第77頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四轉錄起始需解決兩個問題：1 、RNA聚合酶必須準確地結合在轉錄模板的起始區(qū)域2 、DNA雙鏈解開，使其中的一條鏈作為轉錄的模板第78頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四 延伸53DNA原核生物轉錄過程中的羽毛狀現(xiàn)象核糖體RNARNA聚合酶第79頁，共95頁，2022年，5月

36、20日，11點13分，星期四轉錄延長1 、 亞基脫落，RNA pol 聚合酶核心酶變構， 與模板結合松弛，沿著DNA模板前移； 2 、在核心酶作用下，NTP不斷聚合，RNA鏈 不 斷延長。(NMP) n + NTP (NMP) n+1 + PPi第80頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四轉錄終止- RNA聚合酶在DNA模板 上停止前進， 轉錄產物RNA鏈從轉錄復合物上脫落下來原核生物的轉錄終止1、 依賴 因子（Rho) 的轉錄終止2、 不依賴 因子的轉錄終止 DNA模板上靠近終止處，有些特殊的堿基序列，轉錄出RNA后，RNA產物形成特殊的結構來終止轉錄。第81頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四 終止依賴Rho因子(因子) 的轉錄終止A T P第82頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星期四TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT DNA或UUUU UUUU 莖環(huán)結構RNA第83頁，共95頁，2022年，5月20日，11點13分，星