第六章環(huán)境三致物的生物檢測課件

1、環(huán)境三致物的生物檢測 環(huán)境三致物：指能致畸、致癌、致突變的物質(zhì)DNA基因染色體的作用檢測DNA損傷，DNA損傷修復(fù)等檢測三致物對基因突變，包括正向突變和回復(fù)突變?nèi)旧w畸變試驗(yàn)；微核試驗(yàn)；SCE試驗(yàn)特點(diǎn)：時(shí)間短、成本低、結(jié)果可靠環(huán)境三致物的生物檢測 環(huán)境三致物：指能致畸、致癌、致突變的物項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù) 一、蠶豆根尖微核技術(shù)的原理 讓我們復(fù)習(xí)一下細(xì)胞有絲分裂的過程吧項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù) 一、蠶豆根尖微核技術(shù)的原第六章環(huán)境三致物的生物檢測課件有絲分裂各時(shí)期有絲分裂各時(shí)期植物細(xì)胞的有絲分裂植物細(xì)胞的有絲分裂有絲分列各期圖像有絲分列各期圖像項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù) 一、蠶豆根尖

2、微核技術(shù)的原理 蠶豆根尖細(xì)胞在進(jìn)行有絲分裂過程中，染色體經(jīng)常發(fā)生斷裂，但一般情況下，斷裂可以自行愈合，如果受到有害因子的攻擊，染色體就不能愈合，甚至增加斷裂，形成染色體片段，這些染色體片段由于缺乏著絲點(diǎn)而不能到達(dá)細(xì)胞的兩極，而留在細(xì)胞質(zhì)中，一旦新細(xì)胞核形成，這些片段就形成大小不同的小核，即微核。因此，我們可以根據(jù)微核率的高低說明誘變物的強(qiáng)弱。 項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù) 一、蠶豆根尖微核技術(shù)的原項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)二、受試生物材料 松滋青皮豆 ，或其他蠶豆品種1. 蠶豆浸種催芽 25，浸泡2630h 浸種 催芽：用紗布松松包裹吸漲的種子置解剖盤內(nèi)，保持濕度，在25的溫箱中催芽1230

3、h。待種子初生根露出23mm，再選取發(fā)芽良好的種子，放入鋪滿薄層濕脫脂棉的解剖盤內(nèi)，仍在25下催芽3648h，當(dāng)大部分種子的初生根長至23cm時(shí)，即可用于處理 三、試驗(yàn)步驟項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)二、受試生物材料 松滋青皮豆 項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)2. 處理根尖 每一處理選取68粒初生根生長良好，根長一致的種子，放入盛有被測液的培養(yǎng)皿中，讓被測液浸泡住根尖即可，用自來水（或蒸餾水）作對照處理，方法相同。處理時(shí)間為46h。 3. 根尖細(xì)胞恢復(fù)培養(yǎng) 將處理后的種子，用自來水（或蒸餾水）浸洗3次，每次23min，然后把洗凈的種子再放入濕脫脂棉盤中，按前述培養(yǎng)條件恢復(fù)培養(yǎng)2224h 項(xiàng)目九

4、蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)2. 處理根尖 每一處理選取6項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)4. 根尖細(xì)胞的固定 將恢復(fù)后的種子，從根尖頂端切下lcm長幼根放入青霉素空瓶中，加卡諾氏液固定24h 5. 孚爾根（Feulgen）染色 (1) 固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸餾水浸洗2次，每次5min (2) 吸凈殘水，再加5mol/LHCI將幼根泡住，連瓶放入28水浴鍋中水解幼根25min左右，至幼根被軟化即可 (3) 用蒸餾水浸洗幼根2次，每次5min 項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)4. 根尖細(xì)胞的固定 將恢復(fù)后項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)(4) 在暗室或遮光的條件下加席夫（Schiff）試劑，染色14h (5

5、) 除去染液，用SO2洗滌液浸洗幼根2次，每次5min (6) 用蒸餾水浸洗1次，5min (7) 將幼根放入新?lián)Q的蒸餾水中，置4的冰箱內(nèi)保存，可供隨時(shí)制片之用。 6. 制片 45%醋酸壓片法項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)(4) 在暗室或遮光的條件下加項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)7. 鏡檢及微核識別標(biāo)準(zhǔn) 大小是主核大小的1/3以下，并與主核分離；形狀為圓形、橢圓形或不規(guī)則形；著色與主核相當(dāng)或稍淺 每一處理觀察3個根尖，每個根尖隨機(jī)計(jì)數(shù)1000個細(xì)胞中的微核數(shù) 項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)7. 鏡檢及微核識別標(biāo)準(zhǔn) 大項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理和污染程度的劃分 （一）數(shù)據(jù)處理

6、 1. 按以下公式計(jì)算各測試樣品（包括對照組）的微核千分率（MCN） MCN= 某測試點(diǎn)（或?qū)φ战M）觀察到的MCN數(shù)某測試點(diǎn)（或?qū)φ战M）觀察到的細(xì)胞數(shù) 1002. 如果被監(jiān)測的樣品不多，可直接用各樣品MCN率平均值與對照比較（t檢驗(yàn)），從差異的顯著性判斷水質(zhì)污染與否 項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理和污染程項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)3. 如果被檢測的樣品較多，可先用方差分析（F檢驗(yàn)）看各樣品的MCN平均值與對照的差異顯著性。 （二）結(jié)果評價(jià) 1. 利用“MCN”進(jìn)行評價(jià) 30重污染 項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)3. 如果被檢測的樣品較多，可項(xiàng)目九 蠶豆根尖微核監(jiān)測技術(shù)2. 利用