醫(yī)療器械產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、優(yōu)選文檔醫(yī)療器械產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)操作規(guī)程目的經(jīng)過無菌檢驗(yàn),保證滅菌后產(chǎn)品能夠達(dá)到無菌的要求。適用范圍適用于滅菌后醫(yī)療器械產(chǎn)品(列舉的無菌檢驗(yàn)。檢驗(yàn)依照本廠產(chǎn)品注冊標(biāo)準(zhǔn)(編號EN1174-1996醫(yī)療器械滅菌產(chǎn)品中微生物數(shù)量的評估中國藥典(2005年版GB14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第二部分:生物試驗(yàn)方法GB15980-1995一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)儀器、設(shè)備百級層流超凈工作臺、電熱干燥箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、集菌儀(器、電子天平、PH計(jì)、冰箱、恒溫水浴鍋、酒精燈、三角燒瓶,接種環(huán)、無菌棉簽、鑷子,試管架,大試管若干等。無菌檢驗(yàn)室的環(huán)境要求5.

2、1無菌檢驗(yàn)應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部百級的單向流空氣地域內(nèi)進(jìn)行。.優(yōu)選文檔5.2緩沖區(qū)與外界環(huán)境、無菌檢驗(yàn)室與緩沖區(qū)之間空氣應(yīng)保持正壓,陽性比較室與緩沖區(qū)之間空氣應(yīng)保持負(fù)壓。無菌檢驗(yàn)室與室外大氣之間靜壓差應(yīng)大于10Pa。無菌檢驗(yàn)室的室溫應(yīng)保持1826,相對濕度:4565%。5.3無菌檢驗(yàn)室的單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)如期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū)懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的監(jiān)測。每年最少檢測一次。5.4無菌檢驗(yàn)過程中應(yīng)同時檢查超凈工作臺單向流空氣中的菌落數(shù):每次操作時在層流空氣所及臺面的左中右置3個營養(yǎng)瓊脂平板,裸露30min,于3035

3、培養(yǎng)48小時,菌落數(shù)平均應(yīng)不高出1CFU/平板。無菌檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備6.1器具滅菌、消毒滅菌:試驗(yàn)過程中與供試品接觸的所有器具必定采用可靠方法滅菌。可經(jīng)電熱干燥箱160以上干烤2小時,或置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121蒸汽滅菌30分鐘后使用(依照滅菌收效考據(jù)決定滅菌參數(shù)。所有的滅菌物品不應(yīng)高出2周即用畢,否則應(yīng)重新滅菌。消毒:凡檢驗(yàn)中使用的器械無法滅菌辦理的,使用前必定經(jīng)消毒辦理。如無菌檢驗(yàn)室的試管架、電子天平、工作臺面、工作人員的手、橡膠吸優(yōu)等?？刹捎孟緞┙莼虿潦?。消毒劑應(yīng)每個月更換,以防范產(chǎn)生耐藥菌株。表記:器具的滅菌、消毒后必定做好表記,注明滅菌、消毒時間和使用有效期。6.2人員、物料進(jìn)入無菌檢

4、驗(yàn)室開啟紫外線燈或臭氧發(fā)生器進(jìn)行空間滅菌辦理,消毒時間不得少于30min。.優(yōu)選文檔物料進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室流程脫包:進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室的物品若有雙重包裝的,需將外包裝在傳達(dá)窗/緩沖間拆掉后,傳入試驗(yàn)室。消毒:進(jìn)入無菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試品等的表面都應(yīng)采用適用的方法進(jìn)行消毒辦理,以防范將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗(yàn)室。傳達(dá):查察所有進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室的器具上的滅菌、消毒表記,可否在有效期內(nèi)。吻合要求的經(jīng)傳達(dá)窗傳入無菌檢驗(yàn)室。人員進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室流程更鞋脫衣:在一更區(qū)脫去一般區(qū)工作鞋,穿上無菌檢驗(yàn)室工作鞋;脫去一般區(qū)工作服。洗手:第一用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫,再用流水連續(xù)沖洗20秒,洗凈泡沫。換衣:

5、在二更區(qū)依照從上到下的序次衣著無菌工作服(包括衣、帽、口罩等,要求褲子掖在上衣里,口罩掩住口鼻,帽子包裹所有頭發(fā)。手消毒:用消毒液浸泡雙手5秒以上或用浸過消毒液的棉球擦拭雙手。消毒液可用洗必泰、新潔爾滅、碘伏、75%酒精等。人員進(jìn)入:經(jīng)緩沖間進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室。人員進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室后,進(jìn)一步用消毒液擦拭工作臺面,戴無菌手套。無菌檢驗(yàn)操作要求7.1全過程必定嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作,防范微生物污染。.優(yōu)選文檔7.2使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放,防范破壞,以防培養(yǎng)物擴(kuò)散。7.3所有操作均應(yīng)在近火焰區(qū)進(jìn)行,且不得有大幅度或迅速動作,省得攪動空氣中的塵埃微粒。7.4使用金屬接種器具時,用前、用后均需灼燒滅菌。7.5在接種

6、培養(yǎng)物時,動作應(yīng)輕、準(zhǔn),防范培養(yǎng)物濺出,產(chǎn)生汽溶膠,造成污染。7.6操作過程中所有的帶菌物品,用后均應(yīng)作消毒、滅菌辦理?？稍跈z驗(yàn)過程中隨用隨時放入消毒液缸內(nèi)浸泡或消毒桶內(nèi),或在檢驗(yàn)完成后經(jīng)傳達(dá)窗傳至一般區(qū),馬上用壓力蒸汽滅菌鍋121滅菌30分鐘。培養(yǎng)基制備8.1需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基(硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的制備所用試劑酪胨(胰酶水解15.0g葡萄糖5.0gL-胱氨酸0.5g硫乙醇酸鈉0.5g(或硫乙醇酸(0.3ml酵母浸出粉5.0g氯化鈉2.5g新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml瓊脂0.75g水制備.優(yōu)選文檔除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混雜,微溫溶解,調(diào)治pH為弱堿性,煮沸,濾清,加入葡

7、萄糖和刃天青溶液,搖勻,調(diào)治pH為7.10.2。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)劑氧化層的顏色要求在供試品接種前,培養(yǎng)基氧化層的高度不得高出培養(yǎng)基深度的1/5,否剛需經(jīng)100水浴加熱到粉紅色消失(不高出20分鐘迅速冷卻,只限加熱一次,并應(yīng)防范被污染。8.2霉菌培養(yǎng)基(改良馬丁培養(yǎng)基的制備所用試劑胨5.0g酵母浸出粉2.0g葡萄糖20.0g磷酸二氫鉀1.0g硫酸鎂0.5g水制備除葡萄糖外,取上述成分混和,微溫溶解,調(diào)治pH值約為6.8,煮沸,加葡萄糖溶解后,搖勻,濾清,調(diào)治pH為6.40.2。8.3還可使用按處方生產(chǎn)的吻合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基,依照使用說明書配制。8.4培養(yǎng)基配制后應(yīng)趕忙滅菌,防范微生物生殖。一般

8、采用高壓蒸汽121滅菌分鐘。8.5制備好的培養(yǎng)基應(yīng)在225保存,在3周內(nèi)使用。8.6培養(yǎng)基的無菌性檢查每批配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行無菌性檢查(可與產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)同步進(jìn)行。檢查時,每批培養(yǎng)基隨機(jī)取很多于5支(瓶培養(yǎng)14天,應(yīng)無菌生長。.優(yōu)選文檔稀釋液、沖洗液的制備9.10.1%蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g,加水1000ml,微溫溶解,濾清,分裝后置入壓力蒸汽滅菌器內(nèi),121滅菌30分鐘后,于4保存?zhèn)溆谩?分裝后置入壓力蒸汽滅菌器內(nèi),121滅菌30分鐘后,于4保存?zhèn)溆寐然c-蛋白胨緩沖液取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鉀7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g,加水1000ml。微溫溶解,濾清,分裝

9、后置入壓力蒸汽滅菌器內(nèi),121滅菌30分鐘后,于4保存?zhèn)溆谩?.3浸提介質(zhì):9g/L無菌氯化鈉溶液,可直接從有證單位采買大輸液。比較菌液制備10.1無菌檢驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得高出5代。10.2取金黃色葡萄球的一般瓊脂斜面培養(yǎng)物,接種一白金耳至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基內(nèi),在3035培養(yǎng)1824h后備用,同時制備0.9%氯化鈉溶液加入在6支小試管內(nèi),每支試管內(nèi)加9.0ml的0.9%氯化鈉溶液,在壓力鍋內(nèi)經(jīng)121滅菌30min備用。將已配好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)菌液取1.0ml加入第一支小試管內(nèi),稀釋成濃度1:10的菌液;取第一支試管內(nèi)1.0ml菌液加入第二支小試管內(nèi),稀釋成濃度1:100的菌液,同法稀釋成

10、濃度1:106(每ml含菌量100CFU即可。10.3采用平皿計(jì)數(shù)法測定活菌數(shù)。無菌檢驗(yàn)培養(yǎng)溫度硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,置3035培養(yǎng)。改良馬丁培養(yǎng)基,置2328培養(yǎng)。.優(yōu)選文檔無菌檢驗(yàn)12.1如產(chǎn)品注冊標(biāo)準(zhǔn)中明確“產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)過一個確認(rèn)過的滅菌過程”,則執(zhí)行12.1項(xiàng)下各項(xiàng)。放樣每個滅菌批次按已考據(jù)的滅菌工藝,在滅菌柜內(nèi)相應(yīng)的地址放置合適菌片,滅菌后對菌片進(jìn)行無菌檢驗(yàn)。菌片儲藏滅菌前、后菌片應(yīng)按菌片說明書規(guī)定條件保存。(REVEN公司菌儲藏溫度為1527接種開啟超凈工作臺單向?qū)恿?在此環(huán)境下,分別將滅菌后的菌片成對放入已滅菌的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中。同時以金黃色葡萄球菌作陽性比較,以未接種的硫乙醇

11、酸鹽流體培養(yǎng)基和未接種的改良馬丁培養(yǎng)基作為陰性比較。培養(yǎng)陽性比較管于3035細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)4872小時。其余硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基于3035培養(yǎng)7天。改良馬丁培養(yǎng)基于2328培養(yǎng)7天。結(jié)果判斷培養(yǎng)后,陽性比較應(yīng)有菌生長,陰性比較和被檢樣品未見需氣菌、厭氣菌和霉菌生長的為合格。12.2如產(chǎn)品注冊標(biāo)準(zhǔn)中明確產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行無菌檢驗(yàn),則執(zhí)行。抽樣.優(yōu)選文檔依照各自的產(chǎn)品注冊標(biāo)準(zhǔn)和相應(yīng)產(chǎn)品出廠檢驗(yàn)規(guī)程的規(guī)定,對成品庫內(nèi)的產(chǎn)品進(jìn)行抽樣。一般同一個滅菌批產(chǎn)品檢驗(yàn)311個單位供試品。供試液準(zhǔn)備優(yōu)先采用將供試品或其有代表性的各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)的方法,如供試品不合適直接投放,可按以下方法制備供試液,應(yīng)使浸提介

12、質(zhì)充分洗供應(yīng)試品的浸提表面,供試液制備應(yīng)按無菌操作法進(jìn)行,在制備后2小時內(nèi)使用。依照供試品詳盡特點(diǎn)選擇以下方法:a管類器具:按管內(nèi)表面積每10cm2流過管內(nèi)腔1ml浸提介質(zhì),流量約為10ml/min,收集到無菌的容器內(nèi)。b容器類器具:按容器內(nèi)表面積每10cm2加入浸提介質(zhì)1ml的比率,振搖數(shù)次。c實(shí)體類器具:實(shí)體類器具按表面及每10cm2加入浸提介質(zhì)1ml,振搖數(shù)次。收集上述沖洗液或浸提介質(zhì)于無菌容器中。接種薄膜過濾法:優(yōu)先采用封閉式薄膜過濾器(集菌器,也可使用開放式薄膜過濾器。濾膜孔經(jīng)不大于0.45m。濾器和濾膜使用前應(yīng)采用合適的方法滅菌,或直接采用無菌集菌器。a、如采用封閉式薄膜過濾器,取

13、一副三聯(lián)式集菌器,將供試液經(jīng)過集菌儀過濾,使經(jīng)過每只培養(yǎng)管的量基本平均。爾后經(jīng)過集菌儀一只加120ml改良馬丁培養(yǎng)基,另兩只分別加入120ml硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(其中一只做陽性比較,內(nèi)加金黃色葡萄球菌液1ml。另取一副二聯(lián)集菌器,用同批的沖洗液或浸提介質(zhì)120ml經(jīng)過集菌儀過濾(每只約50ml,同法一只加硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基120ml,另一只加改良馬丁培養(yǎng)基120ml分別作陰性比較。.優(yōu)選文檔b、如用一般薄膜過濾器,將供試液過濾后取出濾膜,將其剪成3等份,分別置于含50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基的容器中,其中兩份作檢驗(yàn),一份作陽性比較。直接接種法:適用于一次性使用注射針、一次性使用靜脈

14、輸液針(包括輸液器、輸血器、注射器配套使用注射針。a、敷料供試品:取規(guī)定數(shù)量,每個包裝以無菌操作翻開,于不同樣部位剪取約120mg或1cm3cm的供試品,接種于各管足以吞沒供試品的合適培養(yǎng)基中。b、無菌針頭:直接投入含15ml以上硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基的容器中。c、一次性使用的資料:翻開或切成小碎斷,接種于各管足以吞沒供試品的合適培養(yǎng)基中。供試品按規(guī)定量分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基的容器中,其中一份作陽性比較。每個容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)吻合:接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%,或培養(yǎng)基的裝量足以吞沒供試品。每管培養(yǎng)基的最低用量硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝

15、量很多于15ml,改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量很多于10ml.培養(yǎng)、觀察上述含培養(yǎng)基的容器分別置規(guī)定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中,除陽性比較管培養(yǎng)4872小時外,其余管培養(yǎng)14天。培養(yǎng)時期應(yīng)每天觀察并記錄可否有菌生長。.優(yōu)選文檔如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁,培養(yǎng)14天后,不能夠從外觀上判斷有無微生物生產(chǎn),可取該培養(yǎng)液合適轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上,細(xì)菌培養(yǎng)2天,真菌培養(yǎng)3天,觀察可否再出現(xiàn)渾濁或斜面有無菌生長;或取培養(yǎng)液涂片,染色,鏡檢,判斷可否有菌。結(jié)果判斷培養(yǎng)結(jié)束后,陽性比較管應(yīng)有菌生長,陰性對管應(yīng)澄清。否則,就判結(jié)果無效。所有供試品管均澄清,或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長,判供試品吻合規(guī)定。若供試品管中任何1管顯渾濁并確證有菌生長判供試品不吻合規(guī)定。以一