富血小板血漿的臨床應用

1、關(guān)于富血小板血漿的臨床應用第1頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/282目 錄 富血小板血漿概念Part 1 富血小板血漿發(fā)展歷史Part 2 富血小板血漿制備方法Part 3 富血小板血漿成分特點Part 4 富血小板血漿臨床應用及研究Part 5第2頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/283概 念富血小板血漿富血小板血漿凝膠 Platelet-rich plasma,PRP Platelet-rich plasma gel,PRG全血通過梯度離心分層后得到的富含血小板的血漿部分，它含有多種較豐富的生物活性因子。PRP被凝血酶等

2、激活物激活后形成的膠凍狀物，它具有完整的三維結(jié)構(gòu)和良好的組織相容性的纖維蛋白支架。第3頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/284PRP發(fā)展歷史1977198419931997Harkedeng 首次分離制備出PRP，將其用于心外科手術(shù)后患者，取得良好的療效。Okuda等發(fā)現(xiàn)血漿中提取的富血小板血漿含多種生長因子。Hood等在PRP中加入凝血酶和鈣離子，提出了PG概念，將其所形成的凝膠狀物質(zhì)用于組織修復。Whitman率先將自體PRP用于口腔頜面外科手術(shù)修補骨組織。第4頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/285PRP制備方法原理 根

3、據(jù)血液成分在離心過程中的沉降速率不同來提取。制備方法 無統(tǒng)一標準，都需兩次離心。 全自動制備法、手工制備法。影 響 PRP血小板抗凝劑離心力離心時間離心次數(shù)凝膠激活劑濃 度活 性回收率第5頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/286PRP制備方法全自動法（血漿分離置換法） 利用血成分分離耗材分離制備得到血小板血漿。特點 自動化程度高、血小板純度濃度高第6頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/287PRP制備方法手工制備法 都為兩步法，但離心力、離心時間略有不同。一般認為 初次200g離心10min,二次1200g離心10min,制備P

4、RP中血小板計數(shù)約為全血6.17倍，效果較好。（血液離心后分3層：由下至上-紅細胞層、血小板濃縮物層、貧血小板血漿層）用中間層再次分離。第7頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/288PRP成分特點PRP纖維蛋白白細胞高濃度血小板其它第8頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/289PRP成分特點血小板成人：平均195*109/L，PRP約為全血3-17倍。血小板結(jié)構(gòu)圖作用 生理性止血-通過黏附反應作用起到初期止血功能。 組織修復-通過黏附于血管壁和插入內(nèi)皮細胞之間來修復血管內(nèi)皮，保持其完整性。 調(diào)控炎癥和免疫反應-通過調(diào)節(jié)其表面粘附及

5、表面受體的表達來實現(xiàn)，如介導白細胞作用。第9頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2810PRP成分特點-血小板凝血酶血小板源性生長因子轉(zhuǎn)化生長因子胰島素樣生長因子表皮生長因子血管內(nèi)皮細胞生長因子成纖維細胞生長因子血小板在凝血酶激活后聚集，由顆粒釋放生長因子（GF），可與目標受體上的結(jié)合激活誘導蛋白再生過程，如細胞增殖、基質(zhì)形成、骨形成、膠原蛋白合成等。血小板第10頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2811PRP成分特點-血小板血小板源性生長因子（PDGF） 一種促細胞分裂蛋白，第一個被發(fā)現(xiàn)存在于血小板中，是趨化作用最強的骨生長因

6、子之一。作用 可促進血管生成、活化巨噬細胞，刺激成纖維細胞、血管平滑肌細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞等中胚層細胞的增殖和活性，第11頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2812PRP成分特點-血小板轉(zhuǎn)化生長因子- （TGF-）以旁分泌或自分泌方式作用于成纖維細胞、骨髓干細胞、成骨前體細胞和破骨細胞。TGF免疫染色圖作用： 參與體內(nèi)多種炎癥反應和組織修復，促進細胞外基質(zhì)分泌，提高成纖維細胞增殖能力，刺激膠原蛋白1和纖維連接蛋白的生物合成以及骨基質(zhì)的沉積，抑制破骨細胞形成和骨吸收發(fā)生。第12頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2813PRP成分特

7、點-血小板胰島素樣生長因子（IGF）作用：趨化成纖維細胞，刺激蛋白質(zhì)合成。刺激骨細胞增殖、分化，促進軟骨和骨基質(zhì)生成。第13頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2814PRP成分特點-血小板表皮生長因子（EGF）作用：新生血管重要的誘導因子。可促進創(chuàng)口愈合、參與血管生成。刺激內(nèi)皮細胞有絲分裂和細胞遷移。還可增加血管通透性。第14頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2815PRP成分特點-血小板血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）是高度保守的同源二聚體糖蛋白。二條分子量各為24kDa的單鏈以二硫鍵組成二聚體。作用： 能直接作用于血管內(nèi)皮

8、細胞促進血管內(nèi)皮細胞增殖，增加血管通透性。 誘導內(nèi)皮細胞的增生和遷移，啟動血管生成反應。第15頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2816PRP成分特點-血小板成纖維細胞生長因子（FGFs）作用： 參與血管形成、損傷愈合和胚胎發(fā)育等過程，是關(guān)節(jié)軟骨細胞最具顯著效應的有絲分裂刺激原和形態(tài)原之一。第16頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2817PRP成分特點-白細胞白細胞：參與機體免疫和防御功能幫助機體清除局部病原體、增強抗感染能力；幫助機體清除局部壞死組織，加快組織修復。受血小板分泌生長因子趨化，本身可分泌生長因子直接參與組織修復

9、。第17頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2818PRP成分特點-其它其它成分如： 纖維連接蛋白（FN） 血小板反應蛋白（TSP） 骨連接蛋白（ON） 玻璃體連接蛋白（VN）作用： 對傷口感染、促進組織修復及增加新生血管內(nèi)膜的形成發(fā)揮重要作用。第18頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2819PRP 優(yōu)點一 優(yōu)點二來源豐富、取材方便、操作簡單、價格低廉具有自源性，不會出現(xiàn)免疫排斥反應，沒有異體移植傳播疾病風險第19頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2820PRP 優(yōu)點三 優(yōu)點四含高濃度多種生長因

10、子，且比例接近正常人，具備最佳協(xié)同效應，（避免單一因子不能良好誘導創(chuàng)面愈合）PRP凝膠具有極好粘附性，使用時可較好的黏附在創(chuàng)面上而不流失，避免損失，保證局部較高的生長因子濃度。第20頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2821PRP 優(yōu)點五 優(yōu)點六因含有較多的白細胞和單核細胞，可起到防止感染作用。避免了異體和人工合成組織的致畸危險，同時各種因子表達良好，避免了誘導腫瘤形成的可能。第21頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2822PRP臨床應用及研究骨缺損修復軟骨損傷修復預防骨感染急性創(chuàng)面慢性難愈合傷口皮膚脂肪組織液化急性運動損傷慢

11、性運動損傷頜骨相關(guān)疾病牙周病上頜竇手術(shù)燒傷整形科燒傷創(chuàng)面脂肪移植皮膚組織再生骨科運動損傷普外科口腔頜面外科第22頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2823口腔頜面外科第23頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2824實驗方法：將患者因正畸拔出的患牙傳代培養(yǎng)，取第5代細胞作為試驗用牙周膜成纖維細胞來源；人病牙制成1mm厚根片；2次離心法制備PRP；觀察不同濃度PRP（A組10%、B組15%、C組20%、D組30%、對照組無PRP）對人牙周膜成纖維細胞在脫礦的病變牙根表面附著情況及膠原形成情況。研究一第24頁，共56頁，2022年，

12、5月20日，1點1分，星期四2022/9/2825研究一結(jié)論： PRP可促進牙周細胞在病變牙根表面的附著，其中20%濃度最佳。 PRP可促進牙周細胞外基質(zhì)膠原的形成。第25頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2826口腔頜面外科相關(guān)研究Whitman用PRP聯(lián)合骨移植治療骨缺損獲得成功。Suba等應用磷酸三鈣復合PRP治療犬牙槽骨缺損，發(fā)現(xiàn)PRP可明顯促進骨再生。Lekovic研究發(fā)現(xiàn)PRP能促進牙槽骨再生。張麗等的研究證實PRP聯(lián)合植骨術(shù)治療牙周鄰面骨缺損效果優(yōu)于單純植骨術(shù)。Philippart等將PRP混合物充填于上頜竇中，6個月組織學觀察顯示有活躍的骨新生

13、活動。Rodrignez等在上頜竇區(qū)植入PRP及種植體，移植成功率達92.9%，表明PRP可加快骨再生速度，提高骨再生質(zhì)量。頜骨相關(guān)研究牙周病上頜竇 手術(shù)第26頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2827骨 科第27頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2828研究二方法：選擇股骨干骨不連、骨缺損2需行骨移植治療的40例患者，隨機分為實驗組(脫蛋白牛松質(zhì)骨+PRP)及對照組(脫蛋白牛松質(zhì)骨)，每組20例。術(shù)后7和1、2、3、6、12個月定期攝線片檢查，參照Lane-Sandhu的線評分標準評分,并比較兩組骨痂灰度、愈合情況及愈合速度

14、。第28頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2829研究二結(jié)果：如表1（線評分標準）評分，在傷口愈合天數(shù)及傷口引流量上，實驗組明顯少于對照組。如表2、3在術(shù)后實驗組的成骨率、成骨速率明顯高于對照組，說明PRP有較好的促進骨缺損修復的作用。第29頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2830骨科相關(guān)研究Marx等發(fā)現(xiàn)復合PRP的移植骨修復速度比單純用移植骨修復快1.62-2.16倍。Bielecki等用PRP經(jīng)皮注射治療骨不連取得良好療效。Drengk等研究顯示PRG作為細胞支架能明顯促進軟骨細胞遇見充質(zhì)干細胞的增生和向軟骨細胞分化。

15、Wu等認為PRP可以作為軟骨細胞的載體，治療關(guān)節(jié)軟骨缺損。Bielecki的研究顯示血小板-白細胞凝膠在體外可抑制金葡、大腸桿菌生長，提示PRP可作為“生物抗菌制劑”。骨缺損修復軟骨損傷修復預防骨 感染第30頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2831運動醫(yī)學第31頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2832研究三方法：患者11例跟腱有炎癥19處，每次制備患者自體PRP2ml行跟鍵周圍注射。每周1次，5次為1個療程，治療期間患者停用一切藥物及其他的藥物輔助治療?；颊唠S訪3一8個月，平均6個月，觀察療效。結(jié)果：跟腱有炎癥的地方19處

16、，治療后痊愈5處，顯效13處，治療有效率94.74%。結(jié)論：PRP對跟腱炎療效肯定，是一種安全有效的方法。第32頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2833運動損傷相關(guān)研究急性運動損傷Sanchez的研究發(fā)現(xiàn)應用PRP患者在關(guān)節(jié)活動度、功能恢復及術(shù)后并發(fā)癥方面均優(yōu)于單純修復患者。耿震的研究表明PRP在改善肌腱愈合質(zhì)量的同時也加速了愈合進程。Radice的研究顯示，應用髕韌帶進行前交叉韌帶重建時應用PRP，可將韌帶成熟時間從12個月縮短到3.6個月。Sanchez等報道肌肉拉傷運動員在超聲波引導下局部注射PRGF后，功能恢復時間明顯縮短，且運動訓練后未出現(xiàn)肌肉纖維

17、化現(xiàn)象。第33頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2834運動損傷相關(guān)研究慢性運動損傷Mishra通過對難治性肱骨外上髁炎患者注射PRP發(fā)現(xiàn)，只有非激活狀態(tài)并同時含有濃縮血小板和白細胞的PRP有效。Barrett發(fā)現(xiàn)慢性跖腱膜炎患者在B超引導下局部注射PRP治療效果好。王虎等的研究表明，和類固醇比PRP治療跟痛癥取得了良好療效。Kon E等用PRP和透明質(zhì)酸鹽對照注射入膝關(guān)節(jié)治療骨性關(guān)節(jié)炎，發(fā)現(xiàn)其療效優(yōu)于傳統(tǒng)的透明質(zhì)酸鹽。第34頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2835普外科第35頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，

18、星期四2022/9/2836研究四方法：抽取難愈合傷口患者靜脈血，與氯化鈣、凝血酶混合后制成PRP凝膠敷于患者創(chuàng)面，凡士林紗布填塞。每7天換1次，3次一療程。評估治療后傷口變化情況。第36頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2837研究四結(jié)果：29例患者在三次使用PRP后傷口明顯縮小，大部分壞死組織清除，組織色澤紅潤血供良好，無明顯滲液和膿液。3例效果不明顯。治療3個月：10例傷口完全愈合，形成瘢痕組織；11例創(chuàng)面覆蓋率75%，9例50%-75%，2例50%；治愈率31.2%，顯效率93.8%。結(jié)論： PRP修復慢性難愈合傷口是一種有效、實用的治療方法。第37頁

19、，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2838普外科相關(guān)研究Bhanot S的研究指出，PRP可加速表皮化生長，減輕創(chuàng)傷后局部腫脹和疼痛，減少術(shù)后傷口滲出。Man D將PRP凝膠用于皮瓣移植術(shù)，發(fā)現(xiàn)血管創(chuàng)出血被凝膠封閉，提高了手術(shù)成功率。Carter CA等用PRP修復馬小腿傷口發(fā)現(xiàn)，PRP加快上皮細胞增殖，促進傷口膠原合成以及血管再生。郭彥杰等應用PRP創(chuàng)面內(nèi)注射治療下肢慢性難愈合傷口，療效顯著。夏江霓等對慢性潰瘍患者應用PRP凝膠治療，發(fā)現(xiàn)PRP能更好的促進傷口處肉芽組織形成。Giorgio研究認為PRP可激發(fā)細胞增殖分化和微血管的形成，增強局部組織自我修復能力

20、，從而有利于切口愈合。劉曉韜的研究顯示，應用PRP注入脂肪液化切口深部的患者愈合時間明顯減少，提示PRP可以減輕疼痛、術(shù)后出血，減少術(shù)后并發(fā)癥。急性創(chuàng)面 慢性難愈合傷口手術(shù)切口脂肪液化第38頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2839燒傷整形科第39頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2840研究五方法：10只裸鼠隨機選擇一側(cè)背部皮下組織作為PRP組(0.5 mL人顆粒脂肪+0.1 mLPRP)受區(qū)，一側(cè)作為對照組(0.5 mL 人顆粒脂肪+0.1 mL 磷酸鹽緩沖液)受區(qū)。于植入后10、90d處死后取出移植物進行大體形態(tài)觀察、體

21、積測定及組織學檢測。第40頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2841研究五結(jié)果：術(shù)后90dPRP組移植物存留量明顯多于對照組，且周圍血供更豐富，觸之質(zhì)地較柔軟，更接近正常脂肪組織。在術(shù)后10、90d，PRP組存留體積均大于對照組。第41頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2842研究五脂肪移植物組織結(jié)構(gòu)觀察（蘇木精-伊紅染色，X100） 對照組 PRP組10d90d結(jié)果：術(shù)后10、90d PRP組脂肪細胞均維持較好形態(tài)，細胞間隙保持較好，僅有少量脂肪空泡形成。對照組移植90d后組織結(jié)構(gòu)較混亂，大量結(jié)締組織及脂肪空泡形成，部分出現(xiàn)

22、壞死，僅少量細胞能夠維持正常的形態(tài)。第42頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2843研究五結(jié)果：定量比較發(fā)現(xiàn)，在各時間點，PRP組均比對照組具有更多正常脂肪細胞面積及微血管數(shù)量，比對照組具有更少脂肪空泡面積，說明PRP明顯改善了移植脂肪組織的組織學質(zhì)量。 第43頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2844燒傷整形科相關(guān)研究Nalbonesi等應用PRP成功治療了14例因接受面部整形手術(shù)導致皮膚和軟組織損傷的患者。Hum等研究發(fā)現(xiàn)，局部注射PRP療效明顯優(yōu)于抗生素軟膏好濕性敷料，可使傷口愈合率超過80%。黃云嚴的將PRP凝膠用于治

23、療60例面部二度燒傷創(chuàng)面，發(fā)現(xiàn)在傷后早期使用PRP凝膠可使創(chuàng)面愈合速度加快、愈合率提高，減少瘢痕形成。第44頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2845其它第45頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2846研究六方法：健康大耳白兔10只雙側(cè)面神經(jīng)上頰支橫斷后置入硅膠神經(jīng)再生導管(自制) ，采用雙側(cè)自身對照，隨機分為實驗側(cè)和對照側(cè)。實驗側(cè)注入PRP，對照側(cè)注入生理鹽水；8周后進行相關(guān)檢測分析評價面神經(jīng)恢復再生情況。 第46頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2847研究六第47頁，共56頁，2022年

24、，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2848結(jié)果：面神經(jīng)損傷后8周兔實驗側(cè)及對照側(cè)均能引出清晰穩(wěn)定的面神經(jīng)復合動作電位，面神經(jīng)損傷兔實驗側(cè)動作電位潛伏期明顯短于對照側(cè)，而波幅則高于對對照側(cè)，說明PRP能促進面神經(jīng)功能的恢復。 研究六第48頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2849研究六結(jié)果：顯微圖像分析也表明，面神經(jīng)損傷后8周實驗組有髓軸突數(shù)目，直徑及面積明顯高于對照組。表明發(fā)生面神經(jīng)損傷后，早期應用PRP有利于面神經(jīng)的修復和再生。第49頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2850研究七方法：離心法分離兔全血獲得PRP。采用5%PRP作用于兔角膜基質(zhì)細胞，CCK-8 ( 細胞增殖-毒性檢測試劑盒) 法檢測 PRP促角膜基質(zhì)細胞增殖的作用。PRP與凝血酶激活劑以 9:1的比例制備富血小板凝膠，對制備的富血小板凝膠進行組織形態(tài)學、對角膜基質(zhì)細胞的作用、黏附性、生物相容性等多方面觀察與評價。第50頁，共56頁，2022年，5月20日，1點1分，星期四2022/9/2851結(jié)果：培養(yǎng)后測定3組細胞吸光度OD值可見，對照組OD值隨培養(yǎng)時間延長而不增加，增殖基本停滯; PRP組增加速度較FBS組及對照組快。表明，PRP與 FBS一樣具有促角膜基質(zhì)細胞增殖的作用。研究七第51頁，共56頁，2