微生物檢測實驗室的設施與設備驗證

1、第二章 微生物檢測實驗室的設施與設備驗證 教學目標：1、掌握實驗室設施中的潔凈室無菌室、毒菌種處理和微生物鑒別局部100級控制室要求與管理2、了解實驗室設施中的抗生素微生物檢定、細菌內毒素檢查、抑菌實驗的半無菌室要求與管理3、熟悉實驗室設備與驗證4、了解實驗室操作所用玻璃器具容器的校正驗證教學重點與難點：1、實驗室設施中的潔凈室無菌室、毒菌種處理和微生物鑒別局部100級控制室要求與管理2、實驗室設備與驗證微生物檢測實驗室設施與設備微生物檢測實驗室應具備的功能 潔凈室無菌室標準要求潔凈度檢查的要求與方法小結:作業(yè)：第二章 微生物檢測實驗室的設施與設備驗證 微生物檢測實驗室設施與設備 (1) 保證

2、檢測的無菌環(huán)境設施與器械如潔凈室無菌室、無菌隔離系統(tǒng)、凈化工作臺等。 (2) 保證檢測用實驗用品與用具的無菌滅菌設施或設備如高壓蒸汽滅菌器或手提高壓蒸汽滅鍋、電熱恒溫枯燥箱等。 (3) 保證檢測細菌內毒素反響的器械用具如各種細菌內毒素反響測定儀。 (5) 各種實驗操作所用儀器全封閉薄膜過濾裝置、電動勻漿儀、電熱恒溫水浴箱、離心機、天平、顯微鏡等。 (4) 保證檢測中微生物能恒溫生長與菌種保存的恒溫設備如恒溫培養(yǎng)箱、冰箱 (6) 實驗操作所用的玻璃器具各種刻度吸管、移液管、容量瓶、試管、三角燒瓶、雙碟培養(yǎng)皿等常用玻璃器具。 (7) 保證測量各類樣品中微生物菌落數(shù)或抑菌直徑的有關儀器如空氣浮游菌采

3、樣器、空氣懸浮粒子計數(shù)器、zy-300IV多功能微生物自動測量分析儀等。 返回微生物檢測實驗室應具備的功能 (1) 能開展無菌檢查，微生物限度檢查和無菌采樣各自嚴格分開的無菌室或者隔離系統(tǒng)。 (2) 能開展菌種處理與微生物檢測鑒別的獨立的局部100級的無菌潔凈室。 (3) 能開展抗生素效價的微生物檢定或能進行細菌內毒素檢查(凝膠法或定量法)、抗菌作用測定的各自分開的半無菌實驗室。 (4) 能進行微生物生長培養(yǎng)的培養(yǎng)室。 (5) 可以進行配制試液及培養(yǎng)基的配制室。(6) 能進行高壓滅菌的滅菌室。(7) 實驗器皿洗滌、烘干室。(8) 人員辦公休息室。 (9) 大型實驗室還可設有實驗用品、易耗品儲藏

4、室。 表2-1：我國GMP實施指南提出的級別 空氣潔凈度級別0.5m的微粒數(shù)個/m35m的微粒數(shù)個/m3沉降菌（90mm皿，沉降0.5h）菌落/皿浮游菌個/ m31001萬10萬3500350000350000002000200001310510050030萬級105000006000015返回1. 潔凈室無菌室標準要求 無菌室應采光良好、防止潮濕、遠離廁所及污染區(qū)。面積一般不超過10m2，不小于5m2；高度不超過2.4m。由12個緩沖間、操作間組成操作間和緩沖間的門不應直對，操作間和緩沖間之間應具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內應有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等，不應放置培養(yǎng)箱

5、和其他雜物；無菌室內應六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應呈凹弧形，無縫隙，不留死角。操作間內不應安裝下水道。潔凈室無菌室標準要求圖一 潔凈室無菌室標準要求圖二潔凈室無菌室標準要求圖三無菌操作室應具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度100級或放置同等級別的超凈工作臺，室內溫度控制1826，相對濕度4565%。緩沖間及操作室內均應設置能到達空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應大于5Pa，潔凈室區(qū)與室外大氣的靜壓差大于10Pa。無菌室內的照明燈應嵌裝在天花板內，室內光照應分布均勻，光照度不低于300勒克斯。緩沖間和操作間所

6、設置的紫外線殺菌燈22.5W/m3，應定期檢查輻射強度，要求在操作面上達40W /cm2。不符合要求的紫外殺菌燈及時更換。無菌操作室空氣除菌過濾空氣裝置圖無菌操作室錄像(3) 人員進入潔凈室無菌室要求 實驗人員進入潔凈室無菌室不得化裝、帶手表、戒指等首飾；不得吃東西、嚼口香糖。應清潔手后進入第一緩沖間更衣，同時換上消毒隔離拖鞋，脫去外衣，用消毒液消毒雙手后戴上無菌手套，換上無菌連衣帽不得讓頭發(fā)、衣等暴露在外面，戴上無菌口罩。然后，換或是再戴上第二副無菌手套，在進入第二緩沖間時換第二雙消毒隔離拖鞋。再經(jīng)風淋室30 s風淋后進入無菌室。 更衣錄像返回4. 潔凈度檢查的要求與方法 (1) 沉降菌檢測

7、方法及標準：以無菌方式將3個營養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)臺面左、中、右各放1個；翻開平板蓋，在空氣中暴露30min后將平板蓋好，置32.52.5培養(yǎng)48 h，取出檢查，3個平板上生長的菌落數(shù)平均小于1個。 (2) 浮游菌檢測方法及標準：用專門的采樣器，宜采用撞擊法機理的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，并配有流量計和定時器，嚴格按儀器說明書的要求操作并定時校檢，采樣器和培養(yǎng)皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認可的其它培養(yǎng)基。使用時，先開動真空泵抽氣，時間不少于5 min，調節(jié)流量、轉盤、轉速。關閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上采樣器蓋子后調節(jié)縫隙高度。置采樣口采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉動定時器，根據(jù)采樣量設定采樣時間。全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿置32.52.5培養(yǎng)48 h，取出檢查，浮游菌落數(shù)平均不得超過5個/m3。 狹縫式或離心式采樣器空氣浮游菌檢測方法錄像空氣微粒檢測方法錄像潔凈室空氣塵埃粒子檢測方法錄像6. 定期更換新的紫外燈管、