蝦青素分析測定方法的研究

1、蝦青素剖析測定方法的研究科學技術(shù)與應用羅玉芳約3713字【綱要】選擇分光光度法及高效液相色譜法對測定蝦青素的剖析條件進行研究進而得出最正確的測定條件。用分光光度法和高效液相色譜法測定蝦青素標準曲線的回歸方程的R2都超出了0.99。用分光光度法測定蝦青素回收率范圍為99.3-101相對標準誤差RSD值為用液相色譜法測定蝦青素回收率范圍為100-102相對標準誤差RSD為。這些值都在定量分析所要求的閾值范圍內(nèi)能夠用于定量剖析?！局攸c詞】分光光度法高效液相色譜法蝦青素AbstractChoicetwobasedonthespectrophotometryandhighperformanceliqui

2、dchromatographyHPLCweredevelopedfordeterminationtheastaxanthin.Andtheoptimumconditionswasinvestigatedindetail.Thetotalamountofastaxanthinwasmeasuredbyspectrophotometrytherecoverieswereintherangeof99.3-101andRSDweredeterminedbyHPLCandtherecoverieswereintherangeof100-102RSDwereintherangeof0.62-1.4.All

3、thesevalueswerewithintherangeofpermissivethresholdvalueonquantitativeanalysiswhichshowedthatitsfeasibleformeasuringthecontentofastaxanthinbythesetwomethods.Keywords:spectrophotometryHPLCastaxanthin從動植物及菌類中提取蝦青素當前還處于實驗研究的基礎階段要實現(xiàn)家產(chǎn)化生產(chǎn)蝦青素還一定對其提取工藝進行寬泛深入的研究。要展開這方面的研究一定成立起迅速、高效、簡易的蝦青素剖析方法。蝦青素是一種類胡蘿卜素1分光光

4、度法和高效液相色譜法是常用的兩種類胡蘿卜素剖析方法23這兩種方法各有特點類胡蘿卜素分子因其分子構(gòu)造中的共軛雙鍵系統(tǒng)及離域化的電子在可見光區(qū)表現(xiàn)出強汲取帶且每種類胡蘿卜素分子的最大汲取峰地點與紫外可見光光譜的精美構(gòu)造都是擁有特色性的。因為類胡蘿卜素分子的這類光汲取性質(zhì)溶液中的類胡蘿卜素一般聽從Beer-Lambert定律因此經(jīng)過分光光度法可實現(xiàn)對其精準的定量剖析4高效液相色譜法擁有分離速度快在線檢測如UV檢測器敏捷度高等長處是美國NFIA美國飼料協(xié)會規(guī)定的測定方法。本工作旨在經(jīng)過對分光光度法和液相色譜法測定蝦青素的研究進而成立迅速、有效、準確的測定蝦殼中蝦青素的方法。一、資料和方法一資料1儀器7

5、21型分光光度計上海精科食品廠高效液相色譜儀日本島津企業(yè)18色譜柱250mm4.6mm迪馬企業(yè)恒溫箱202-1型上海市上?？h試驗儀器廠JA2003上皿電子天平上海天平儀器廠2試劑蝦青素標準品剖析純美國sigma企業(yè)乙腈色譜純甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚等均為剖析純。二實驗方法1分光光度法正確稱取必定量的蝦青素純樣品多份分別用乙醇有機溶劑溶解后各自配制成1.0g/mL、2.0g/mL、3.0g/mL、4.0g/mL、5.0g/mL、6.0g/mL的標準溶液用721型分光光度計測定不一樣波長下的吸光度。在最大波長下以試劑空白調(diào)零測其吸光度。以蝦青素標準溶液的濃度為橫坐標對應的吸

6、光值為縱坐標繪制標準曲線。2高效液相色譜法1.色譜工作條件色譜柱C18250mm4.6mm。流動相乙醇甲醇二氯甲烷751510V/V流速為1.0mL/min。柱溫室溫。檢測波長為480nm進樣量20L。2.標準工作曲線繪制稱取必定量的蝦青素標準溶液用甲醇配制濃度分別為1.0g/mL、2.0g/mL、4.0g/mL、6.0g/mL、8.0g/mL、10.0g/mL標準溶液分別取20L進樣依據(jù)峰面積與相應的濃度進行線性回歸繪制標準工作曲線。二、結(jié)果與剖析一分光光度法剖析蝦青素1蝦青素標準樣品在乙醇溶劑中的最大汲取波長我們將蝦青素標準樣品溶解在乙醇溶劑中在400nm至700nm范圍內(nèi)測其吸光度結(jié)果如

7、圖1。從圖中能夠看出蝦青素標準樣品在乙醇溶劑中的最大汲取波長為474nm。圖片2蝦青素標準樣品在乙醇有機溶劑中的標準曲線正確稱取必定量的蝦青素純樣品多份分別用乙醇有機溶劑溶解后以試劑空白調(diào)零用721型分光光度計測其吸光度。以蝦青素標準溶液的濃度為橫坐標對應的吸光值為縱坐標繪制標準曲線。結(jié)果見圖2。條件測定波長474nm圖片從圖2中能夠看出在乙醇溶劑中蝦青素濃度與其吸光度擁有優(yōu)秀的線性關(guān)系有關(guān)系數(shù)R2大于0.999經(jīng)過測得的吸光度按其線性回歸方程可計算蝦青素的濃度。3回收率和精美度試驗精美稱取蝦青素10.00mg置100mL容量瓶中分別加入濃度為100g/mL蝦青素標準貯備液2mL、3mL、4m

8、L用乙醇溶解并稀釋至刻度。用新成立的方法對其進行剖析計算回收率及精美度值實驗結(jié)果如表1所示。圖片條件同圖2從表1能夠看出蝦青素的回收率范圍為99.3-101相對標準誤差RSD值為。二液相色譜法剖析蝦青素1檢測波長的選擇因為HPLC的檢測器是紫外檢測器綜合考慮乙醇有機提取溶劑的最大吸收值及敏捷度最后選擇紫外檢測波長為480nm。2色譜柱種類的選擇利用高效液相色譜法測定色素的國家標準大部分都是使用C8或C18為填料的反相液相色譜法依據(jù)本實驗室現(xiàn)有條件采納了填料為C18的色譜柱來進行蝦青素的液相色譜測定試驗。3流動相及其余色譜條件的選擇甲醇、乙腈、四氫呋喃、水、甲醇、二氯甲烷、丙酮等是高效液相色譜法

9、中最常用的流動相。在反相色譜中極性大的組分因K值較小先流優(yōu)秀譜柱極性較小的組分后流出。流動相中有機溶劑的比率增添流動相極性減小洗脫力加強。用水-甲醇作為流動相明顯比較經(jīng)濟但我們試驗的結(jié)果是出峰時間較后且峰形較胖因此本實驗最后采納乙腈甲醇二氯甲烷751510體積比作為流動相超聲波脫氣進樣前樣品用0.45m微孔濾膜過濾。流速1mL/min檢測波長為480nm進樣量20L柱溫為室溫。4標準工作曲線及色譜圖圖片如上配制系列標準溶液按給定色譜條件試驗以峰面積y對各組分濃度x求回歸方程并繪制標準工作曲線實驗結(jié)果見圖3。由圖3可知蝦青素濃度在g/mL時其濃度與峰面積成一直線關(guān)系。在此濃度范圍內(nèi)其標準曲線的回

10、歸方程為y139580 x3470此中y表示HPLC峰面積x表示游離蝦青素濃度g/mL。有關(guān)系數(shù)R0.9999線性有關(guān)性很好。圖4為蝦青素標準樣品的高效液相色譜圖。由圖中可知出峰時間為7.432min左右的峰為游離蝦青素。圖片5回收率和精美度測定精美稱取蝦青素10.00mg置100mL容量瓶中分別加入濃度為100g/mL蝦青素標準貯備液5mL、6mL用流動相溶解并稀釋至刻度。用新成立的方法對其進行定量剖析每個樣品平行做3個計算回收率及精美度值實驗結(jié)果如表2所示。圖片條件同圖4.從表2中能夠看出蝦青素的回收率為100-102蝦青素測定的相對標準誤差RSD為。三、結(jié)論利用蝦青素不溶于水易溶于有機溶

11、劑的特色將蝦青素標準樣品經(jīng)有機溶劑辦理后利用分光光度法和高效液相色譜法對其蝦青素含量進行測定其標準曲線的回歸方程的R2都超出了0.999線性優(yōu)秀能用于定量剖析測定。用分光光度法測定蝦青素回收率范圍為99.3-101相對標準誤差RSD值為用液相色譜法測定蝦青素回收率范圍為100-102相對標準誤差RSD為。這些值都在定量分析所同意的閾值范圍內(nèi)5說明用分光光度法和高效液相色譜法均可用來正確地測定蝦青素。參照文件1李浩明高藍蝦青素的構(gòu)造、功能與應用精美化工2003200135-402應國清王曉艷沈寅初高效液相色譜法剖析檢測蝦青素食品與發(fā)酵工業(yè)2001271143-443J.J.ScdmakD.K.WeerasingheS.fromPhaffiarhodozyma.BioteehnolTech19904:107-112.惠伯棣類胡蘿卜素化學及生物化學北京中