白首烏粗多糖對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究

1、白首烏粗多糖對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究【摘要】目的討論白首烏耳葉牛皮消ynanhuauriulatuRyleexight多糖對(duì)小鼠肝損傷的保護(hù)作用。方法從白首烏耳葉牛皮消中提取粗多糖，將84只安康小鼠動(dòng)物隨機(jī)分組，隨機(jī)分為模型組、生理鹽水對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組每組14只按低劑量組100gkg-1d-1、中劑量組250gkg-1d-1、高劑量組500gkg-1d-1連續(xù)灌胃多糖8d，對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃。通過(guò)摘眼球取血測(cè)量谷丙轉(zhuǎn)氨酶AST、谷草轉(zhuǎn)氨酶ALT含量。結(jié)果白首烏多糖肝損傷防治組小鼠血清ALT及AST活性比模型組顯著降低，兩組比擬，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論白首烏多

2、糖對(duì)酒精所致小鼠急性肝損傷模型具有顯著的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】耳葉牛皮消；粗多糖；酒精；肝損傷Abstrat：bjetiveTinvestigatetheprtetiveeffetfplysaharidefrBai-shu-u(ynanhuauriulatuRyleexight)nalhl-induedliverinjury.ethdsInthisexperient,rughplysaharidefrBaiShuuasextratedand84ieererandlydividedintnralntrlgrups,delntrlgrup,psitiventrlgrupandthreeexperie

3、ntgrups.Eahexperientgruphad14ieanderefedplysaharidefr8daysbygavageithrespetivelyhigh-dsagef100g/(kgd),iddle-dsagef250g/(kgd)andl-dsagef500g/(kgd),hilethentrlgrupseregiventhesaevluefphysilgialsaline.ThenentratinftheseruGPT/ALTandGT/ASTereeasuredbyextratingtheeyeballbld.ResultsTheativityftheseruGPT/AL

4、TandGT/ASTintheexperientgrupdereasedresignifiantlythanthatindelntrlgrup,andthediffereneserestatiallysignifiant.nlusinPlysaharidefrynanhuauriulatuRyleexighthassignifiantprtetiveeffetnethanl-induedliverinjuryinie.Keyrds：ynanhuauriulatuRyleexight;Plysaharide;Alhl;Liverinjury白首烏為祖國(guó)傳統(tǒng)中藥，其主要來(lái)源為蘿藦科植物耳葉牛皮消y

5、nanhuauriulatuRyleexight，隔山消ynanhuilfrdii(axi.)Hesl和戟葉牛皮消ynanhubungEiDene.的塊根，具有養(yǎng)血益肝、固腎益精、烏須黑發(fā)和延年益壽的成效1，2?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)白首烏中含有多種有效成分，具有抗腫瘤、抗衰老和保肝等多方面的藥理活性1，3。國(guó)外的研究也證實(shí)了這些藥理活性46。1器材1.1藥品與試劑白首烏購(gòu)自江蘇濱海，經(jīng)湖南省藥檢所方石林教授鑒定為蘿摩科植物耳葉牛皮消ynanhuauriulatuRyleexight，實(shí)驗(yàn)用酒精AR，谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶酶(AST)試劑盒(南京建成生物工程研究

6、所)。氯仿、丙酮、乙醚、正丁醇均為分析純。護(hù)肝片為北京亞?wèn)|生物制藥消費(fèi)。1.2儀器與設(shè)備電熱恒溫枯燥箱天津市泰斯特儀器2023AB型；電熱恒溫水浴鍋天津市泰斯特儀器DK98-1A；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海亞榮生化儀器廠RE5299；抽濾機(jī)鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)SHBB95型；離心沉淀機(jī)上海醫(yī)用分析儀器廠LXTII；分析天平湘儀天平儀器廠TG328B。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物IR小鼠(長(zhǎng)沙市開(kāi)福區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技效勞部提供,動(dòng)物合格證號(hào)：湘000468)。1.4實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理軟件實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均在LENV-patibleP機(jī)indsXP系統(tǒng)下采用Exel2022進(jìn)展計(jì)算和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，并用T-test來(lái)分析組間差異的顯著性。結(jié)果以s

7、表示。文字處理軟件用irsftrd2022。2方法2.1多糖的提取別離2.1.1預(yù)處理脫脂取60g白首烏ynanhuauriulatuRyleexight粉末,加180l乙醇(85%),加熱回流1h，過(guò)濾，濾渣于恒溫箱中80枯燥過(guò)夜2，得淡黃色濾渣52.5g。2.1.2初多糖的提取浸提將黃色濾渣52.5g均分于兩個(gè)1000l圓底燒瓶中,A瓶為26.2g，B瓶為26.3g。A、B瓶各加520l水,在恒溫水浴中回流1h，過(guò)濾，濾渣在一樣條件下重復(fù)浸提1次，合并濾液。離心：將兩次浸液離心機(jī)離心10in(2500r/in)，合并濾液。減壓濃縮：將合并濾液在真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至75l。真空枯燥：在濃縮

8、后的多糖溶液中參加3倍量95乙醇AR225l，抽濾，真空枯燥后得淡黃色粗多糖。2.2粗多糖的純化2.2.1脫蛋白粗多糖加蒸餾水200l復(fù)溶后經(jīng)過(guò)Sevag試劑(氯仿20l，正丁醇4l)除蛋白，連續(xù)操作4次,得150l多糖溶液。2.2.2醇沉在脫蛋白后的多糖溶液中參加3倍95乙醇，沉淀用乙醇洗滌3次，經(jīng)抽濾、真空枯燥后得到淺灰色粉末狀結(jié)晶。2.2.3純化將灰白色結(jié)晶用乙醇、丙酮及乙醚反復(fù)洗滌，抽濾、真空枯燥后得到淺灰色粉末狀結(jié)晶。2.3多糖的驗(yàn)證2.3.1多糖檢測(cè)反響取多糖粉末少許用蒸餾水溶解，取1l于試管中，再加10%-萘酚的乙醇溶液3滴，均勻混合，沿管壁加濃硫酸1l，使集于下層，在兩層交界面

9、有棕色環(huán)出現(xiàn)，證明此為多糖。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3.2水解取上述粉末20g置錐形瓶?jī)?nèi)，參加2lL的硫酸甲醇溶液2l，封口，置85水浴中水解24h，冷卻，用飽和Ba(H)2中和，離心，取上清液，減壓濃縮至干，待用。2.3.3單糖組分的紙色譜層析用微量點(diǎn)樣器分別取樣品水解液和標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液各45l，在紙色譜上點(diǎn)樣，置于展開(kāi)筒中展開(kāi)，展開(kāi)系統(tǒng)為:正丁醇醋酸水(415)上層,自然風(fēng)干后用鄰苯二甲酸苯胺顯色，樣品水解液出現(xiàn)4個(gè)棕色點(diǎn)，如圖1，其中有一個(gè)點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的點(diǎn)Rf值一樣,說(shuō)明樣品中確含多糖。2.4藥理實(shí)驗(yàn)2.4.1動(dòng)物分組取84只IR安康小鼠雌雄各半，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模

10、型組、陽(yáng)性對(duì)照組，多糖低、中、高劑量給藥組(500，250，100g/kg)。2.4.2給藥實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，瀏陽(yáng)河酒灌胃0.5l/只。多糖高、中、低劑量給藥組分別按500，250，100g/kg灌胃提取的精制耳葉牛皮消ynanhuauriulatuRyleexight多糖溶液；陽(yáng)性對(duì)照組按80g/kg灌胃護(hù)肝片溶液；正常對(duì)照組和模型對(duì)照組等體積生理鹽水灌胃，1次/d，2.0l/只，連續(xù)8d。第8天摘眼球取血?jiǎng)e離血清6。2.4.3取血采用摘眼球取血方法，每只試驗(yàn)用小鼠各取血1l于肝素潤(rùn)洗過(guò)的1.5l中。2.4.4別離血清將離心管置高速離心機(jī)中3000r/in離心10in，用微量注射器提取

11、血清置肝素潤(rùn)洗過(guò)的0.5l離心管中，置-30冷凍保存?zhèn)溆谩?.4.5生化檢測(cè)按試劑盒說(shuō)明測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶ALT，谷丙轉(zhuǎn)氨酶AST活性7。2.4.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以s表示，用T檢驗(yàn)來(lái)分析組間差異的顯著性。P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果耳葉牛皮消多糖溶液對(duì)酒精引起小鼠急性肝損傷血清ALT，AST活性的影響。結(jié)果見(jiàn)表1。表1耳葉牛皮消多糖對(duì)酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠血清中ALT，AST的影響略4討論多糖中、高劑量均可使小鼠酒精肝損傷血清ALT，AST升高的程度降低。模型對(duì)照組ALT，AST活性較正常對(duì)照組明顯升高(P0.01),說(shuō)明酒精致小鼠肝損傷造模成功。多糖低劑量組與模型組對(duì)照比擬，P0.05,

12、不能說(shuō)明有顯著差異,說(shuō)明低劑量組對(duì)酒精性肝損傷有一定的保護(hù)作用，但作用效果不明顯。多糖中劑量組，高劑量組與模型組比擬，P0.01，有顯著差異，說(shuō)明多糖中濃度(250g/l),高濃度(500g/l)均對(duì)酒精性肝損傷有很好的保護(hù)作用。高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組比擬，P0.05,有差異，說(shuō)明多糖高濃度(500g/l)具有與護(hù)肝片一樣的對(duì)酒精性肝損傷有很好的保護(hù)作用，甚至效果更好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型對(duì)照組ALT，AST活性顯著高于正常對(duì)照組，說(shuō)明酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷模型成功(P0.01)。多糖中劑量組，高劑量組與模型對(duì)照組比擬有顯著性差異P0.05,說(shuō)明此劑量下的耳葉牛皮消多糖溶液能顯著降低由酒精引起急性肝

13、損傷小鼠血清ALT和AST活性的升高，且存在劑量效應(yīng)關(guān)系。多糖高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組比擬，效果差異不大，甚至可以說(shuō)更好，具有很大的潛力，值得深化研究，必能成為更好的保肝護(hù)肝藥。雖然多糖高劑量組與中劑量組降低AST活性的效果相當(dāng)，但他們降低ALT活性的效果卻有一定差距,多糖低劑量組對(duì)AST和ALT活性的降低有一定效果,但都不明顯。從這里可以看出，耳葉牛皮消多糖溶液的濃度與降低AST和ALT活性的效果之間有一定的聯(lián)絡(luò)，什么濃度效果最正確，其確切保肝作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。本次實(shí)驗(yàn)從ALT，AST活性的角度入手，研究白首烏多糖溶液的保肝護(hù)肝作用，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明耳葉牛皮消多糖溶液具有保肝護(hù)肝的作用?！緟⒖?/p>

14、文獻(xiàn)】1趙冰清，張為，周源，等.瑤藥白首烏的研究進(jìn)程J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2022，17(3)：6882.2徐凌川，梁傳東，吳明燕，等.白首烏糖類的提取及含量測(cè)定J.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，27(3)：215.3尹家樂(lè)，李心，張士俠，等.白首烏_(21)甾體酯苷對(duì)小鼠急性四氯化碳肝損傷的保護(hù)作用J.安徽醫(yī)藥，2022，11(3)：198.4angH，angQ，SrivastavaRKGngSS;etal.EffetsfttalglysidesfrBaishuunhuanbreastandprstateanerellprliferatinAlternJ.TherHealthed，2022，9(5):62.5LeeK,YeH，KiJ，etal.llegefpharay;SeulNatinalUniversity,KreaPrtetinfratnepatytesexps