《發(fā)酵染菌應(yīng)急預(yù)案》

1、第7頁(yè) 共7頁(yè)發(fā)酵染菌應(yīng)急預(yù)案發(fā)酵染菌應(yīng)急預(yù)案 一、 染菌確認(rèn)與報(bào)告 1、 染菌確認(rèn) a、連續(xù)3個(gè)樣品鏡檢發(fā)現(xiàn)有雜菌且有增多趨勢(shì)，無(wú)菌試驗(yàn)樣品發(fā)現(xiàn)染菌，發(fā)酵各項(xiàng)理化指標(biāo)有明顯異常變化的，可判斷為染菌；b、疑心染菌的罐，在不影響正常消費(fèi)安排的前提下，繼續(xù)培養(yǎng)，且取無(wú)菌樣進(jìn)展肉湯培養(yǎng)，同時(shí)做平皿劃線別離，直到結(jié)論明確。 2、 染菌報(bào)告 發(fā)酵車間員工發(fā)現(xiàn)染菌和疑似染菌的情況，必須立即報(bào)告車間主任，發(fā)酵車間主任理解情況后做初步判斷，并通知菌種車間、中試車間及消費(fèi)部經(jīng)理，共同判斷、分析p 。 發(fā)酵車間應(yīng)首先發(fā)現(xiàn)本車間的發(fā)酵染菌情況，否那么車間主任和工藝員應(yīng)負(fù)有責(zé)任。 二、染菌現(xiàn)象描繪 對(duì)染菌罐樣品，應(yīng)做

2、以下描繪： 1、 發(fā)現(xiàn)染菌的時(shí)間 確定從哪一個(gè)樣品開場(chǎng)發(fā)現(xiàn)染菌或疑心染菌，之后的樣品有沒有同樣的現(xiàn)象、雜菌量有無(wú)變化。 2、 鏡檢描繪 菌體形態(tài)結(jié)合美蘭和品紅兩種染色方法染色同時(shí)判斷，比擬所染雜菌與消費(fèi)菌變化情況的形態(tài)，染色深淺，大小，數(shù)量與消費(fèi)菌比擬。 注:鏡檢應(yīng)觀察5個(gè)視野以上，Bt、桿菌肽發(fā)酵液樣品應(yīng)稀釋10倍再涂片鏡檢。 3、 理化指標(biāo) pH變化情況，菌濃變化情況，對(duì)效價(jià)的影響，發(fā)酵液氣味 附樣品描繪記錄： 染菌分析p 記錄表 消費(fèi)批號(hào)： 罐號(hào) 取樣時(shí)間 鏡檢情況 備注 分析p 討論情況： 結(jié)論： 簽名： 年 月 日 處理措施： 簽名： 年 月 日 預(yù)防措施： 簽名： 年 月 日 三、

3、染菌檢查與分析p 1、 思想認(rèn)知 發(fā)生染菌情況后，各車間負(fù)責(zé)人應(yīng)實(shí)事求是，主動(dòng)查找車間范圍內(nèi)的問題，杜絕本位，做到通力協(xié)作、齊心分析p 、查閱書籍、邏輯推理、認(rèn)真檢查、嚴(yán)格試驗(yàn)、廣泛討論、不辭辛苦。 2、染菌原因初步分析p a、種子罐早中期染菌：母瓶種子帶菌。 空氣過濾器“漏菌”。 滅菌不到位。 接種操作不嚴(yán)密。 其他意外事件如停電、閥門壞等。 b、發(fā)酵罐早中期染菌：種子罐帶菌。 空氣過濾器“漏菌”。 滅菌不到位。 移種操作不嚴(yán)密。 補(bǔ)料操作或補(bǔ)料液有問題。 其他意外事件如停電、閥門壞、設(shè)備漏等。 3、 雜菌別離、培養(yǎng) 對(duì)已確定染菌和隱性染菌的罐批，應(yīng)取染菌發(fā)酵液或疑似染菌的發(fā)酵液無(wú)菌樣, 在

4、平皿上標(biāo)明樣品的品名、來(lái)與取樣時(shí)間，然后在超凈工作臺(tái)上進(jìn)展平皿劃線別離,在37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng), 每天在燈光下檢查有無(wú)雜菌生長(zhǎng)。觀察雜菌菌落特征，并涂片鏡檢，確定所染雜菌的類型。 4、 雜菌耐熱性實(shí)驗(yàn) 取染菌發(fā)酵液或疑似染菌的發(fā)酵液4瓶，標(biāo)明品名、來(lái)與取樣時(shí)間取1瓶作對(duì)照，另3瓶分別在110、115、121滅菌30分鐘。然后將四個(gè)樣品定量接入肉湯培養(yǎng)基，在37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng),觀察肉湯的培養(yǎng)情況。 5、 設(shè)備檢查 a、空氣凈化系統(tǒng) 翻開預(yù)、精過濾器殼體，拆檢過濾器橡皮墊圈，檢查是否有老化、斷裂而失去密封效能；拆檢預(yù)、精過濾器濾芯，檢查是否有老化、斷裂，濾芯外觀孔目是否有堵塞、變形現(xiàn)象。 拆檢完畢，安裝

5、殼體并對(duì)過濾器法蘭接口、排污閥、空氣取樣閥、壓力表絲口、空氣閥、焊接縫等進(jìn)展試壓、試漏，密封性能需到達(dá)無(wú)泄漏標(biāo)準(zhǔn)；且預(yù)濾、精濾的壓差應(yīng)在0.05MPa的范圍之內(nèi)。 b、罐體、閥門試漏 準(zhǔn)備好洗衣粉水、刷子，蓋好罐蓋，關(guān)閉排氣閥，開啟進(jìn)氣閥，給發(fā)酵罐加壓，當(dāng)罐壓0.10MPa時(shí)，即可對(duì)該罐進(jìn)展試漏。 試壓試漏方法：試外漏時(shí)，把洗衣粉水噴涂在閥門閥蓋、法蘭或絲口上，及閥門整體外部和管路焊縫等可能泄漏的地方。試內(nèi)漏時(shí)，關(guān)閉待試閥門，把洗衣粉水噴涂在閥門排氣管孔上，經(jīng)涂抹局部如有氣泡產(chǎn)生，可以確定有漏點(diǎn)，應(yīng)及時(shí)復(fù)檢。 c、蛇管、夾層試漏 放盡罐內(nèi)積水,開空氣吹干或用布擦干罐內(nèi)壁.將蛇管、夾套內(nèi)充滿水，

6、注意觀察是否有水滲出。也可將夾套內(nèi)的水放盡，將壓縮空氣通入蛇管、夾套內(nèi)，用洗衣粉水噴涂，注意觀察是否有氣泡冒出。 6、 無(wú)菌試驗(yàn) 發(fā)現(xiàn)染菌的設(shè)備處理后應(yīng)做無(wú)菌試驗(yàn)： a、培養(yǎng)基配方 原料名稱 配比 酵母粉 0.5 玉米漿 3 葡萄糖 1 氯化鈉 0.5 消前pH6.57.0。 b、培養(yǎng)條件 372，48hr以上 注：消后應(yīng)取樣涂片鏡檢，作為鏡檢對(duì)照。 7、 菌種車間接種后，將肉湯培養(yǎng)基1520ml倒入接種瓶中，與殘留液混合， 37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48hr以上。 8、 環(huán)境檢查與清潔 a、超凈工作臺(tái)沉降菌檢測(cè) b、菌種、發(fā)酵車間環(huán)境清潔 三、 染菌處理 1、染菌料液的處理 參照發(fā)酵異?，F(xiàn)象的處理SO

7、P 2、設(shè)備處理 在染菌料液處理完后，在再次投料之前, 先徹底清洗染菌發(fā)酵罐罐體、附件, 同時(shí)進(jìn)展嚴(yán)密程度檢查,以防滲漏，然后用甲醛等化學(xué)物質(zhì)熏蒸處理,再用蒸汽滅菌包括各種附屬設(shè)備。 四、 預(yù)防措施與根底研究 1、 空氣系統(tǒng) 定時(shí)放水，保持枯燥。 定期拆檢,在過濾器滅菌時(shí)要防止過濾介質(zhì)被沖翻或燒灼,還要防止發(fā)酵液倒流入空氣過濾器內(nèi)。 2、 設(shè)備檢修 發(fā)酵罐及其附屬設(shè)備應(yīng)做到無(wú)“滲漏”,無(wú)“死角”。定期試漏。 無(wú)菌操作室和菌種培養(yǎng)間定期消毒,以保持無(wú)菌狀態(tài)。 定期用甲醛熏消。 3、 操作要求 發(fā)酵罐放罐之后,對(duì)罐體和附屬設(shè)備進(jìn)展全面清洗和檢查,去除罐內(nèi)的殘?jiān)?除盡罐壁上的污垢,去除罐內(nèi)附件處的堆

8、積物。 培養(yǎng)基配制時(shí)要防止物料結(jié)塊或帶入異物,配料罐和輸送料液系統(tǒng)要定時(shí)清洗消毒。 對(duì)進(jìn)入無(wú)菌室的全部物料、器械實(shí)行滅菌。 4、 人員培訓(xùn) a、對(duì)新員工培訓(xùn)，應(yīng)采取學(xué)徒制，指定有資質(zhì)的技術(shù)工當(dāng)師傅，并對(duì)新員工的學(xué)習(xí)進(jìn)程做好跟蹤考核，保證其操作程度。 b、對(duì)員工進(jìn)展劃線別離、無(wú)菌取樣等根本操作培訓(xùn)，保證操作的準(zhǔn)確性、一致性。 c、定期開展崗位操作競(jìng)賽，對(duì)員工的操作質(zhì)量進(jìn)展考核，進(jìn)步員工進(jìn)展日常操作培訓(xùn)的積極性。 5、 整理出公司各發(fā)酵產(chǎn)品正常消費(fèi)時(shí)各周期的典型鏡檢照片各一套，搜集典型的染菌料液鏡檢照片和各種雜菌的鏡檢照片。 6、 研究不同的雜菌單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的情況，如形態(tài)，生長(zhǎng)速度，培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、通氣、計(jì)數(shù)式接種量等因素的影響。 7、 研究不同的雜菌和消費(fèi)菌種混合培養(yǎng)時(shí)的情況，重點(diǎn)是觀察在不同的混合時(shí)間混合時(shí)，雜菌