3.微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗(yàn)證方案

1、.概述:培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。供試品微生物限度檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查。.驗(yàn)證目的：本次驗(yàn)證的目的是確認(rèn)需氧菌總數(shù)、霉菌及酵母菌總數(shù)檢查用的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的質(zhì)量，以及其制備程序、保存條件等是否滿足微生物限度檢查用要求。.驗(yàn)證依據(jù)：中國(guó)藥典2015年版四部“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法”、“9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”。.驗(yàn)證項(xiàng)目：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。.適用范圍：

2、成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。.驗(yàn)證周期：除另有規(guī)定外，在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過(guò)程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可以只進(jìn)行一次。如果培養(yǎng)基的制備過(guò)程未經(jīng)驗(yàn)證，那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)。.驗(yàn)證小組人員及職責(zé)：小組人姓名簽字所在部門職務(wù)員職務(wù)7.3.1.47.3.1.4負(fù)責(zé)驗(yàn)證資料及結(jié)果的審核工作。質(zhì)量部質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量總監(jiān)QC主任微生物QC驗(yàn)證小組人員:驗(yàn)證人員職責(zé)及要求按驗(yàn)證方案及相關(guān)文件實(shí)施驗(yàn)證。認(rèn)真觀察并做好驗(yàn)證原始記錄。對(duì)實(shí)施驗(yàn)證的結(jié)果負(fù)責(zé)。驗(yàn)證中各部門的職責(zé)驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)組職責(zé)

3、制訂驗(yàn)證總計(jì)劃，負(fù)責(zé)全公司驗(yàn)證工作的管理。確定驗(yàn)證項(xiàng)目及驗(yàn)證項(xiàng)目負(fù)責(zé)人。負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的批準(zhǔn)工作。7.3.1.57.3.1.5負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)工作。7.3.3.6負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證人員的培訓(xùn)、考核工作。7.3.3.6負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證人員的培訓(xùn)、考核工作。驗(yàn)證項(xiàng)目小組職責(zé)負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的起草工作。參與驗(yàn)證方案的討論、確認(rèn)工作。.2.3負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的實(shí)施。7.3.2.4負(fù)責(zé)驗(yàn)證結(jié)果的分析、統(tǒng)計(jì)、報(bào)告工作。7.3.2.5參與驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)價(jià)工作。7.3.3質(zhì)量部職責(zé)7.3.3.1負(fù)責(zé)公司驗(yàn)證日常管理工作。7.3.3.2負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審核工作。7.3.3.3負(fù)責(zé)驗(yàn)證過(guò)程中儀器、儀表、計(jì)量器具的校驗(yàn)工作。7.3.3.4負(fù)

4、責(zé)檢驗(yàn)儀器及檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。7.3.3.5負(fù)責(zé)驗(yàn)證中各項(xiàng)檢測(cè)工作，提供驗(yàn)證的檢驗(yàn)記錄、檢驗(yàn)報(bào)告，對(duì)驗(yàn)證過(guò)程中的各項(xiàng)檢驗(yàn)工作負(fù)責(zé)。7.3.3.7負(fù)責(zé)驗(yàn)證資料和報(bào)告的審核工作。7.3.3.7負(fù)責(zé)驗(yàn)證資料和報(bào)告的審核工作。.3.8負(fù)責(zé)驗(yàn)證文件回收、歸檔管理工作。8.合格標(biāo)準(zhǔn)：8.1被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。9.驗(yàn)證實(shí)施條件驗(yàn)證方案培訓(xùn)：在驗(yàn)證實(shí)施前，應(yīng)對(duì)參與驗(yàn)證的人員進(jìn)行驗(yàn)證方案以及與驗(yàn)證相關(guān)的文件進(jìn)行培訓(xùn)，確保相關(guān)人員掌握了驗(yàn)證的相關(guān)要求與知識(shí)。微

5、生物限度檢測(cè)室：檢驗(yàn)所使用的檢測(cè)室應(yīng)經(jīng)過(guò)要求。檢驗(yàn)用水：驗(yàn)證過(guò)程使用的純化水其制備系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過(guò)確認(rèn)并符合要求，純化水質(zhì)量應(yīng)經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)并符合中國(guó)藥典2015年版二部的要求。檢驗(yàn)儀器設(shè)備：驗(yàn)證涉及的檢驗(yàn)儀器（設(shè)備）與檢驗(yàn)方法，應(yīng)經(jīng)過(guò)技術(shù)監(jiān)督局校驗(yàn)合格或者公司確認(rèn)/驗(yàn)證合格。驗(yàn)證菌種：驗(yàn)證所使用的菌種，其種類與傳代次數(shù)應(yīng)符合中國(guó)藥典的2:菌種確認(rèn)。相關(guān)要求。菌種情況見(jiàn)附件2:菌種確認(rèn)。10.驗(yàn)證過(guò)程菌液制備取經(jīng)30-35培養(yǎng)18-24h的銅口假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-6-10-8,約為D100cfu/ml的菌懸液備用

6、。取經(jīng)20-25培養(yǎng)2-3天的白色念珠菌、黑曲霉的液體培養(yǎng)物1ml,加入9m10.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-5-10-8,約為1100cfu/ml的菌懸液備用。實(shí)驗(yàn)操作胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基：取11個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種上述銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量口100cfu）,另1口皿不接種菌作為空白對(duì)照，傾注對(duì)照胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混口，口固后于30口35口倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)3天（白色念珠菌、黑曲霉培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5天），計(jì)數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。口酪大豆胨液體培養(yǎng)基：新鮮配制10ml/支的對(duì)照胰酪大豆胨液體培養(yǎng)

7、基7支,1211滅菌15min,備用。取6支，分別接種上述銅口假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2支，每支接種1ml菌液（接種量口100cfu），另1支不接種菌作為空白對(duì)照；被檢培養(yǎng)基同法操作。置30口35口培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)3天,分別觀察結(jié)果。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：取5個(gè)無(wú)菌平皿,分別接種上述白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量口100cfu）,另1口皿不接種菌作為空白對(duì)照，傾注對(duì)照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混口，凝固后于20口25口倒置培養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不超過(guò)5天，計(jì)數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。13.6附件6:驗(yàn)證結(jié)果審批表13.6附件6:驗(yàn)證結(jié)果審批表10.3.10.3.

8、檢查結(jié)果：見(jiàn)附件5：計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果13.5附件5:計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果13.5附件5:計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果.異常情況與偏差處理：當(dāng)出現(xiàn)偏差時(shí)，應(yīng)按偏差處理管理規(guī)程進(jìn)行處理。.驗(yàn)證結(jié)果評(píng)定、結(jié)論與建議驗(yàn)證小組組長(zhǎng)負(fù)責(zé)收集各項(xiàng)驗(yàn)證、試驗(yàn)記錄，根據(jù)驗(yàn)證、試驗(yàn)結(jié)果對(duì)驗(yàn)證效果進(jìn)行綜合評(píng)審，起草驗(yàn)證報(bào)告、做出驗(yàn)證結(jié)論。對(duì)驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)審應(yīng)包括以下內(nèi)容：驗(yàn)證試驗(yàn)是否有遺漏？驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)？驗(yàn)證記錄是否完整？驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？偏差及對(duì)偏差的說(shuō)明是否合理？是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)？.附件附件1:驗(yàn)證實(shí)施條件確認(rèn)附件2:培養(yǎng)基確認(rèn)附

9、件3:菌種確認(rèn)附件4:菌液濃度確定附件1：設(shè)施設(shè)備驗(yàn)證確認(rèn)驗(yàn)證報(bào)告編驗(yàn)證結(jié)果設(shè)施設(shè)備名稱驗(yàn)證結(jié)果號(hào)實(shí)驗(yàn)室HVAC系統(tǒng)純化水系統(tǒng)LDZX-40A型立式自控電熱壓力蒸汽滅菌器PSH-500A型生化培養(yǎng)箱303As-2型電熱恒溫隔水式培養(yǎng)箱SW-CJ-1C型雙人凈化工作臺(tái)確認(rèn)結(jié)論：確認(rèn)人：確認(rèn)日期：附件2：培養(yǎng)基確認(rèn)培養(yǎng)基名稱來(lái)源批號(hào)有效期至培養(yǎng)基名稱來(lái)源批號(hào)有效期至皿皿2胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體對(duì)照培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基確認(rèn)結(jié)論：確認(rèn)人：確認(rèn)日期：附件3：菌種確認(rèn)培養(yǎng)基名稱來(lái)源批號(hào)枯草芽孢桿菌CMCC(B63501銅

10、綠假單胞菌CMCC(B10104金黃色葡萄球菌CMCC(B26003白色念珠菌CMCC(F白色念珠菌CMCC(F98001黑曲霉CMCC(F98003確認(rèn)結(jié)論：確認(rèn)人：確認(rèn)日期：附件4：菌液濃度確定10-310-410-510-610-7in山in山1n山1n山1n山TOC o 1-5 h z銅綠假單胞菌皿1皿2金黃色葡萄球菌皿1皿2大腸埃希菌皿1皿2枯草芽孢桿菌皿1皿2白色念珠菌皿1附件附件5：計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果白色念珠菌（沙氏）皿1皿2黑曲霉皿1皿2黑曲霉（沙氏）皿1皿2結(jié)論：根據(jù)要求，菌數(shù)要控制在每1ml中含菌數(shù)在lOOCfU,因此，我們確定菌液制備：銅綠假單胞菌：稀釋金黃色葡萄

11、球菌:稀釋大腸埃希菌：稀釋枯草芽孢桿菌:稀釋白色念珠菌（胰酪）:稀釋白色念珠菌（沙氏）:稀釋黑曲霉（胰酪）：稀釋黑曲霉（沙氏）：稀釋檢驗(yàn)人檢驗(yàn)時(shí)間年月日-年月日復(fù)核人復(fù)核年月時(shí)間日11培養(yǎng)基驗(yàn)證菌株皿號(hào)被檢培養(yǎng)基對(duì)照培養(yǎng)cfu/ml基cfu/ml比值菌落形態(tài)0.5-2大小生情況長(zhǎng)胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(30D35,D3天)銅綠假單胞菌*白色念珠菌、黑曲霉15天平均金黃色葡萄球平均枯草芽孢桿菌平均白色念珠菌白色念珠菌白色念珠菌1平均黑曲霉平均空白銅綠胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基銅綠(30D35,D3天)假單胞菌金黃色葡萄球枯草芽孢桿菌空白沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(23D28,72h)2平均黑曲霉12平均空白1檢驗(yàn)時(shí)檢驗(yàn)人間年月日-年月日復(fù)核時(shí)復(fù)核人間年月日表6: