微生物的實驗室培養(yǎng)1

1、專題2 微生物的培養(yǎng)與應用課題1 微生物的實驗室培養(yǎng) 實驗操作1復習鞏固菌種鑒定的重要依據(jù)是 ；培養(yǎng)基的四大基本營養(yǎng)成分是 、 、 、 ；培養(yǎng)基除了為微生物提供營養(yǎng)物質之外，還需要滿足微生物生長對 、 、 的要求；獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是 ；菌落水碳源無機鹽氮源pH特殊營養(yǎng)物質氧氣防止外來雜菌的入侵2二.實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（二）純化大腸桿菌大腸桿菌3（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質溶解后，添加水，定容至1000mL4（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算： 根據(jù)配方比例，計算1

2、00mL培養(yǎng)基各成分用量牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g瓊脂：2.0g2.稱量： 準確稱取各成分5電子天平（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基2.稱量： 準確稱取各成分注意：稱取牛肉膏和蛋白胨時動作要迅速，稱后要及時蓋上瓶蓋牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g瓊脂：2.0g6（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基3.溶化：加水加熱溶化牛肉膏牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，溶化后取出稱量紙加入蛋白胨和氯化鈉，玻棒攪拌溶解加入瓊脂，不斷攪棒熔解用蒸餾水定容到100mL目的：防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂7（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基4.調 pH： 用1mol/L的NaOH溶液調

3、節(jié)pH至偏堿性（pH7.6）pH試紙8（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基5.滅菌：將配置好的培養(yǎng)基用玻棒轉移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內滅菌1530min9（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基5.滅菌：將配置好的培養(yǎng)基用玻棒轉移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內滅菌1530min將培養(yǎng)皿用舊報紙包緊，放入干熱滅菌箱內滅菌2h10（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基6.倒平板： 待培養(yǎng)基冷卻到50左右時，在酒精燈火焰附近倒平板討論1：你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？ 用手觸摸錐形瓶，感覺溫度剛好不燙手11倒平板操作11.右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左

4、手撥出棉塞12倒平板操作22.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰討論2：為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 進行灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基13倒平板操作33.用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10-20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋14倒平板操作44.等待平板冷卻凝固（大約5-10min）后，將平板倒過來放置討論3：平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 平板冷凝后，皿蓋上會凝結出水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的溫度較高，將平板倒置，既可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可避免培養(yǎng)基中水分過快地揮發(fā)15討論4：在倒平板的過程中，如果不小

5、心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 不能，空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，造成污染注意：倒平板時，不能將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位倒平板操作16（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基7.無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入37的恒溫箱中培養(yǎng)24-48h，以檢查滅菌是否徹底17（二）純化大腸桿菌1.微生物的分離與純化： 從混雜微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過程，稱為微生物的分離與純化 利用固體培養(yǎng)基，將混雜細菌分散或稀釋成單個細胞，使其繁殖成單個菌落2.微生物接種方法： 平板劃線法 稀釋涂布平板法 工具：接種環(huán)18平板劃線操作19平板劃線操作20平板劃線操作土壤稀釋液21平板劃線操作22平板劃線操作23平板劃線操作24平板劃線操作用力不能過大25平板劃線操作26平板劃線操作區(qū)域一區(qū)域二區(qū)域三區(qū)域四區(qū)域五27平板