戊肝診斷試劑在醫(yī)院及疾控的應(yīng)用

1、技術(shù)工程師 崔偉1一、戊型肝炎相關(guān)概念及特點戊型肝炎由戊型肝炎病毒（HEV）引起，HEV是單股正鏈RNA病毒,屬于嗜肝病毒科.約占臨床散發(fā)型肝炎的1520%，戊肝在病毒性肝炎中病死率最高，孕婦病死率可高達20%。傳播途徑:主要經(jīng)胃腸道傳播，常通過水源和食源暴發(fā)或流行,丙球蛋白免疫無效臨床癥狀:厭食、乏力、惡心、鞏膜黃染、右上腹部不適、嘔吐、肝臟腫大等.其臨床癥狀與甲肝類似。2戊肝不同臨床階段的HEV感染指標臨床階段ALTRNAIgMIgG戊肝急性期+近期隱性感染-+戊肝恢復(fù)期-+既往感染-+3HEV-IgM是良好的近期感染標志物戊肝病程中各感染指標的變化過程清楚顯示，HEV-IgM抗體是一個良

2、好的戊肝病毒近期感染指標。4二.優(yōu)良的診斷試劑是檢測結(jié)果準確可靠的保證優(yōu)質(zhì)的抗原是檢測試劑的關(guān)鍵！5關(guān)鍵: 構(gòu)象抗原現(xiàn)有試劑以線性表位為主的重組蛋白或合成肽作為抗原，未能模擬出HEV最主要的構(gòu)象依賴性抗原表位。優(yōu)質(zhì)的抗原是檢測試劑的關(guān)鍵!62.1 HEV基因ORF1主要編碼與病毒RNA復(fù)制有關(guān)的非結(jié)構(gòu)蛋白，ORF2為HEV的主要結(jié)構(gòu)基因編碼區(qū),編碼病毒衣殼蛋白，ORF3基因編碼產(chǎn)物pORF3為磷蛋白。7 試劑的關(guān)鍵E2抗原的發(fā)現(xiàn)及其特征1998年，用大腸桿菌表達HEV結(jié)構(gòu)蛋白ORF2的一個片段(E2)時發(fā)現(xiàn)，該蛋白可以自發(fā)形成二聚體，并且二聚體蛋白對戊肝恢復(fù)期血清有極強的反應(yīng)性，這一反應(yīng)性隨著

3、二聚體的解聚而消失 。Western Blot(See: J Med Virol, 2001,64:125-132)單體二聚體SDS8E2抗原反應(yīng)性：對戊肝急性期血清和多年后的恢復(fù)期血清有明顯的反應(yīng)，恢復(fù)期血清的反應(yīng)性集中在二聚體上。急性期血清(10例)恢復(fù)期血清(8例)二聚體E2單 體E292.2 具有動物模型的診斷試劑(恒河猴HEV感染模型)感染時間（周）F9HEV感染、發(fā)病與抗體發(fā)生過程10感染時間（周）N2HEV感染、發(fā)病與抗體發(fā)生過程11感染時間（周）F4HEV感染、發(fā)病與抗體發(fā)生過程12獻血員中HEV檢測：E2-IgM(+)、 E2-IgG(-) 、GL-IgM和IgG均(-)的獻

4、血員206血清HEV RNA基因分型I型IV型IV型II型III型13206血清可感染猴子145278構(gòu)象性表位線性表位猴HEV感染過程中各項指標消長分析15三.HEV ELISA 試劑 與 臨床急性肝炎診斷163.1 人們對戊型肝炎的重視逐漸增強新的中華人民共和國食品安全法實施條例實施條例對食品安全法中較為原則的制度作了具體規(guī)定 ：食品從業(yè)者應(yīng)按章檢查戊型病毒型肝炎和甲型病毒性肝炎，同時取消乙肝的檢測。員工入職新生入校等健康體檢也取消了乙肝的檢測項目。17食品從業(yè)人員的健康體檢新試行條例規(guī)定食品從業(yè)人員的健康體檢取消了HBV的檢測項目，新增了HAV-M和HEV-M兩種檢測項目。IgM抗體的檢

5、測目的主要是避免近期感染對食品安全的威脅。（包括顯性感染和隱性感染）頒布了戊型病毒性肝炎診療規(guī)范，用以明確HEV的診斷及治療。人們對戊型肝炎的重視逐漸增強。183.2 萬泰HEV試劑與其他國內(nèi)外廠家的試劑比較193.2.1靈敏度和特異度綜合評價 復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院指標正常人群急性戊肝約登指數(shù)(%)陰性數(shù)/檢測數(shù)特異度（%）陽性數(shù)/檢測數(shù)靈敏度（%）WT IgM273/273 100.047/4897.997.9GL IgM264/273 96.735/4872.969.6GL IgG233/273 85.445/4893.879.620 臨床非甲非乙急性肝炎中HEV IgM檢出 E2 IgM

6、檢出率=100% GL IgM 檢出率=50.8%(香港衛(wèi)生署公共衛(wèi)生實驗中心) 21E2 IgM與GL IgM在急性肝炎中檢出符合情況GL IgME2 IgM合計706513529361390合計99426525其中58例(89%)抗HAV IgM陽性(復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院) 22臨床陰轉(zhuǎn)血清的評價 新疆戊肝感染10年后血清抗HEV抗體檢出1992年全國流調(diào)新疆和田HE暴發(fā)后34年HEV IgG感染率為11.79%(Genelabs)地方病通報 2002，17（3）：1423兩種試劑對WHO戊肝標準血清的檢測比較243.2.2實驗室數(shù)據(jù)PCR+標本總數(shù)萬泰檢出SKH22份22份20份（1份陰

7、性灰區(qū)）陽性S/C.O均8.456.8925表1：兩種試劑對PCR陽性的檢驗263.2.3實驗室數(shù)據(jù)PCR+標本總數(shù)萬泰檢出BGD檢出16份15份（1份陰性灰）5份（3份陰性灰區(qū)）檢出百分率 93.8% 31.3% 27標本編號萬泰 A值（C.O=0.266）BGD A值（C.O=0.150）PCR背景+ /P31.0420.021+WX11.0950.131+WX111.9620.441+WX121.5030.387+WX131.6420.108+WX141.9390.523+WX150.1270.011+WX170.8910.026+WX180.4090.489+WX190.7480.126+WX221.0930.020+WX240.9910.076+WX301.1890.016+WX322.9870.045+WX620.8040.027+WX640.4570.192+M261.0041.084/M280.1520.009/M292.0040.439/M302.0450.897/M311.7910.347/M410.0150.012/P11.7120.311/表2：兩種試劑對PCR陽性的檢驗28HEV的診斷指標(依據(jù)戊型病毒性肝炎診療規(guī)范）HEV-M抗體陽性HEV-G 抗體陽轉(zhuǎn)或者濃