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1、工程是在*4 分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工,因此又叫做*4 重組技術(shù))工程是在*4 分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工,因此又叫做*4 重組技術(shù))1 頁(yè) 共 13 斷開(kāi)(水解作用*4(回文原核生物(主要/(/ 具有多個(gè)(可被限制酶識(shí)別)切點(diǎn) 原核真核:13 (聚合酶形成(縮合形成(縮合 具有多個(gè)(可被限制酶識(shí)別)切點(diǎn) 原核真核:13 (聚合酶形成(縮合形成(縮合形成重組新*4子鏈 3 頁(yè) 共 13 人工化肽鏈(氨基酸序列)S84序列)序列 人通過(guò) 6)8 技術(shù)(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))胞內(nèi)(高溫破壞氫鍵 3 頁(yè) 共 13 人工化肽鏈(氨基酸序列)S84序列)序列 人通過(guò) 6)8 技術(shù)(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))胞內(nèi)(高溫破壞
2、氫鍵 :GW(*4聚合酶(聚合酶 *4 兩條母鏈(分別作為酶*4分子半保小大啟動(dòng)子(終止子無(wú)有無(wú)有 )+ (4 頁(yè) 共 13 )+ (4 頁(yè) 共 13 1、一定要死認(rèn)“同種限制酶”絕不動(dòng)3、一定要妥妥切在目4、酶切技術(shù)只能用來(lái)5、一定不能切壞任何標(biāo) 1、一定要死認(rèn)“同種限制酶”絕不動(dòng)3、一定要妥妥切在目4、酶切技術(shù)只能用來(lái)5、一定不能切壞任何標(biāo) 5 13 種限制酶所識(shí)別的) 限制酶R 和 ( ) 限制酶 、 、 識(shí)別的序列都是由 個(gè)脫氧核苷酸組成* 限制R和 切出的 種限制酶所識(shí)別的) 限制酶R 和 ( ) 限制酶 、 、 識(shí)別的序列都是由 個(gè)脫氧核苷酸組成* 限制R和 切出的 (R4獲得目)
3、目經(jīng)Bgl切割后形成的黏性末端是【例 ) IU8( 用含) * 用分子雜交方法檢測(cè)上【例 模擬) ( ) 6 頁(yè) 共 13 (模擬)6)8)只含有引物 或引物(的兩個(gè)新 *4 分子中推測(cè)第三輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物 的) 發(fā)性過(guò)程中被切斷的*4分子內(nèi)堿基對(duì)之間(模擬)6)8)只含有引物 或引物(的兩個(gè)新 *4 分子中推測(cè)第三輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物 的) 發(fā)性過(guò)程中被切斷的*4分子內(nèi)堿基對(duì)之間的鍵【例 (模擬)EcoR、1VT和二者的混合物分別降解一個(gè) HV( HV 即 :HV)正確的是)嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的 葡萄糖苷酶(M()利用大腸桿菌表達(dá) (R( 酶( ) 6)8擴(kuò)增( )圖 為質(zhì)粒限制酶酶切
4、圖譜酶識(shí)別序列為使6)8擴(kuò)增的 (增的丌同限制酶( ) 7 頁(yè) 共 13 【例 ( 新課標(biāo))圖(G) 載體上的 8 /的切點(diǎn)是唯一的根(/表達(dá)載體利用(H)所示的表達(dá)載【例 ( 新課標(biāo))圖(G) 載體上的 8 /的切點(diǎn)是唯一的根(/表達(dá)載體利用(H)所示的表達(dá)載體獲得了(I)產(chǎn)()4連接酶是將兩個(gè)( 新課標(biāo)),外源 到X或 KX中會(huì)導(dǎo)致相)的失活X 表示氨芐青霉素抗,X 表示四環(huán)素抗用(/酶切后,不(/酶切獲得的目混合,加入 *4 連接酶迚行連接反應(yīng)得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌, 結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化,有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的、含有質(zhì)粒載體、含有了目的的重組的
5、細(xì)胞也是( 8 頁(yè) 共 13 構(gòu)建了 - 所示 構(gòu)建了 - 所示 ( )的表達(dá)載體時(shí),需選擇圖 中( )經(jīng)酶切后的載體和 - 種:?jiǎn)蝹€(gè)載不載體正向連接、-不載體反向連接(如圖 所示)為鑒定這 種連接方式,選擇 .VG酶和 (GS酶對(duì)篩選得到的載體迚行雙酶切,并對(duì)酶切后的 行電泳分析,結(jié)果如圖 所示,圖中( ) 將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后,為了檢測(cè) -【例 )6. (總長(zhǎng)為 QHQH# 9 頁(yè) 共 13 ,(最后將連接物導(dǎo)入足夠數(shù)量的大腸桿菌細(xì)胞中,則含 QH 質(zhì)粒的細(xì)胞顏色為;含 Q H 質(zhì)粒的細(xì)胞顏色為( )若 ,(最后將連接物導(dǎo)入足夠數(shù)量的大腸桿菌細(xì)胞中,則含 QH 質(zhì)粒的細(xì)胞顏
6、色為;含 Q H 質(zhì)粒的細(xì)胞顏色為( )若將兩段分別用限(/(R切開(kāi)的單個(gè)目V. 中 (S/酶切片段,形成 QH( )上述 QH(IU8 QH QH兩種QHQH 兩種( )的人(動(dòng))植*微生【例 (模擬)下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn),圖 、圖 中箭頭表示相關(guān)() 一個(gè)圖 9SG( ) Sma( ) 用圖中的質(zhì)粒和外源*4構(gòu)建重組質(zhì)粒,丌能使用( ) 不只使用 EcoR相比較,使用 BamH和 Hind兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源 *4的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止10 13 ( ) 現(xiàn)使用 BamH和 .OTJ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源*4,粒迚行再次酶切,假設(shè)所有的酶均可將識(shí)別位點(diǎn)完全切開(kāi),請(qǐng)根據(jù)圖 、 中標(biāo)示的酶切位點(diǎn)及種段采用EcoR和Hind酶切 得種【例 (模擬) ( ) 現(xiàn)使用 BamH和 .OTJ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源*4,粒迚行再次酶切,假設(shè)所有的酶均可將識(shí)別位點(diǎn)完全切開(kāi),請(qǐng)根據(jù)圖 、 中標(biāo)示的酶切位點(diǎn)及種段采用EcoR和Hind酶切 得種【例 (模擬)( )( ) 在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí),可用一 種 或者多種限制酶迚行切割 該酶的 特( )( )11 13 【例 ( 江蘇)下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn),圖 、圖 中標(biāo)注了相關(guān)限制酶( )【例 ( 江蘇)下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn),圖 、圖 中標(biāo)注了相關(guān)限制酶( )片段,通酶
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