用HPLC法測定雞血藤膏中芒柄花素的含量

1、用HPLC法測定雞血藤膏中芒柄花素的含量【摘要】目的：采用高效液相色譜測定雞血藤中有效成分芒柄花素的含量。方法：按高效液相色譜法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水33：67為流動相，檢測波長250n，柱溫為35，流速1.0lin；進樣量10l，理論板數(shù)按芒柄花素峰計算應(yīng)不低于5000。結(jié)果：制劑中的輔料對主藥測定無干擾。芒柄花素在進樣量為0.01025g0.5125g(進樣量10l)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。精細度RSD為0.2%，供試品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定。測得回收率平均值為98.73%,RSD為0.24%，說明方法回收率符合相關(guān)規(guī)定。結(jié)論：該法簡便，迅速，準(zhǔn)確，專屬性強?！娟P(guān)鍵詞】

2、雞血藤；高效液相色譜法；含量測定；有關(guān)物質(zhì)雞血藤膏主要用于補血活血，舒筋活絡(luò)，可治療腰膝酸痛、肢體麻木、風(fēng)濕麻木、經(jīng)閉、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等1。本研究采用高效液相色譜法測定其中一個有效成分芒柄花素的含量，方法簡便，迅速，準(zhǔn)確，專屬性強。1儀器、試藥與實驗樣品高效液相色譜儀DINEX液相色譜儀ULTIAT3000；天平AG135和BS210S梅特勒-托利多；紫外分光度計UV-500英國熱電；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余所用試劑均為分析純。芒柄花素對照品批號：111703-202201為中國藥品生物制品檢定所提供。2方法與結(jié)果2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水33

3、：67為流動相，檢測波長250n，柱溫為30，理論板數(shù)按芒柄花素峰計算應(yīng)不低于3000。2.2方法按高效液相色譜法測定中華人民共和國藥典2022年版一部附錄D。2.3對照品溶液制備取芒柄花素對照品適量，精細稱定，用甲醇制成5g/l的溶液，即得。供試品溶液制備精細量取本品25l，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次30l，合并乙酸乙酯提取液，揮干溶劑，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至5l量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。測定法分別精細汲取對照品溶液與供試品溶液各10l2，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每1l含雞血藤以芒柄花素16H124計，不得少于5g。2.4雞血藤片中芒柄花素含量測定數(shù)據(jù)，見表1。

4、3含量測定方法學(xué)考察3.1方法根據(jù)按中華人民共和國藥典2022年版一部附錄D。3.2方法學(xué)考察3.2.1光譜掃描及檢測波長確實定取芒柄花素對照品適量，用甲醇制成對照品溶液3，在紫外可見分光光度計上于200400n掃描，最大吸收波長為250.0n。3.2.2提取方法考察乙酸乙酯提取次數(shù)考察：分別取本品25l,同正文方法提取，分別用乙酸乙酯提取3次，4次，5次，6次，比擬峰面積，結(jié)果見表2。表1三廠家雞血藤片中芒柄花素含量表2萃取次數(shù)與峰面積結(jié)果說明，用乙酸乙酯提取5次可提取完全。3.2.3干擾試驗供試品溶液制備：精細量取本品25l，用乙酸乙酯振搖提取5次，每次20l，合并乙酸乙酯提取液，揮干溶劑

5、，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至5l量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。對照品溶液制備：取芒柄花素對照品適量，精細稱定，用甲醇制成5.125g/l的溶液，即得。陰性對照溶液制備：取缺雞血藤的陰性對照樣品，照供試品溶液制備方法制備，即得。汲取上述三種溶液各10ul，按含量測定方法進展測定，結(jié)果在陰性對照溶液色譜圖中，在芒柄花素峰位置處無干擾色譜峰，見圖13。3.2.4線性關(guān)系取芒柄花素對照品適量，加甲醇制成系列濃度對照品溶液g/l：1.025、2.05、5.125、10.25、20.5、25.625、51.25。照含量測定項下測定峰面積4，測定數(shù)據(jù)見表3。以芒柄花素濃度對峰面積進展線性回歸，得

6、回歸方程：Y=1.04X-0.401，r=1.000，芒柄花素在進樣量為0.01025g0.5125g(進樣量10l)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。見圖4。3.2.5穩(wěn)定性試驗取供試品溶液批號：202208001，照供試品制備方法供試品溶液。按含量測定項下方法在0小時、1小時、2小時、3小時、5小時、8小時、10小時進樣進展峰面積測定5，見表4。測定結(jié)果RSD為0.2%，供試品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定。3.2.6重復(fù)性試驗對同一批雞血藤膏批號：李時珍藥業(yè)202208001，取6份，照含量測定方法進展測定，見表5。結(jié)果說明，該方法重現(xiàn)性良好。范圍選取低限40%處做重現(xiàn)性和回收測定(樣品：武漢中聯(lián)藥業(yè)0506

7、00取樣20l，結(jié)果見表6。選取限度的1倍處做重現(xiàn)性和回收率測定樣品：武漢中聯(lián)藥業(yè)050600，取樣80l，結(jié)果見表7。3.2.7回收率試驗取芒柄花素含量的雞血藤膏批號：李時珍藥業(yè)202208001，含量為1.481ug/l6份，每份25.0l，分別參加芒柄花素對照品40.5ug，按含量測定項下測定，見表8。測得回收率平均值為98.73%,RSD為0.24%，說明方法回收率符合相關(guān)規(guī)定。表4芒柄花素測定穩(wěn)定性試驗測定數(shù)據(jù)表5芒柄花素含量測定重復(fù)性試驗測定數(shù)據(jù)表6重現(xiàn)性結(jié)果表7重現(xiàn)性和回收率測定表8芒柄花素回收率試驗測定數(shù)據(jù)4討論我們對標(biāo)準(zhǔn)品溶液在200400n范圍內(nèi)進展紫外掃描,結(jié)果發(fā)如今250n處有最大吸收,應(yīng)選擇此波長為檢測波長。在試驗中，曾選擇以甲醇-水65：35，乙腈-水45：55，比擬發(fā)現(xiàn)，以正文中采用的乙腈-水33：67作為流動相的色譜別離度最正確，故采用。本方法檢測有效成分芒柄花素簡便，迅速，準(zhǔn)確，專屬性強?！緟⒖嘉墨I】1中華人民共和國藥典委員會.中國藥典.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2022，212213.2胡芳弟,封士蘭,趙鍵雄.RP-HPL法測定紅芪中兩種異黃酮類成分的含量.中藥材,2022,26(9):634.3李偉東,闞毓銘.刺果甘草化學(xué)成分的研究.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2022,16(4):223224.