雷諾昔酚對(duì)去勢(shì)后大鼠骨密度、血生化指標(biāo)的影響

1、雷諾昔酚對(duì)去勢(shì)后大鼠骨密度、血生化指標(biāo)的影響【關(guān)鍵詞】,卵巢切除術(shù)InfluenefSERralxifenenbneineraldensityandbldbiheialparaetersinvarietizedrats【Abstrat】AI:Tstudytheinfluenefralxifene(RAL),aseletiveestrgenreeptrdulatr(SER),nbneineraldensityBDlssinanellatedbneandpatbnefvarietizedrats.ETHDS:TentyfurfealeSDratseredividedint3grups(8ratsp

2、ergrup):shaperatingrup,varietizedVXgrupandtherapeutiVX+RALgrup.BilateralvarietiesereperfredinVXgrupandVX+RALgrup.Thelatterastreatedithralxifene7dafterperatin.Sixteeneeksafterperatin,allratseresarified.BDfL3L5vertebrae,prxialferalsegentandferalshaftereeasuredbydualenergyXrayabsrptietry(DEXA).L2verteb

3、raeerehistrphetriallyanalyzedandserubiheialarkersereeasuredbefreandafterdrugadinistratin.RESULTS:Seruttalaliu3.020.38l/Lvs2.240.30l/Landttalalkalinephsphatase2.3360.032kat/Lvs1.8320.028kat/LsignifiantlyinreasedinVXgrupparediththseinshagrup(P0.01,P0.05respetively).TheabveparaetersdereasedinRALgruppar

4、ediththsethevarietizedgrup2.380.39l/Lvs3.020.38l/L,1.9520.023kat/Lvs2.3360.032kat/L(P0.05).Sixteeneeksaftervariety,BDfL3L5vertebrae,prxialferalsegent0.1810.021g/2vs0.2870.025g/2andferalshaft0.1570.034g/2vs0.2600.039g/2dereasedsignifiantly(P0.01)andthetrabeularbeaethinandirregularparediththseinshagru

5、p.AftertreatentfRAL,theabveparaetersrestred(P0.05)butnttthelevelfshagrup(P0.05).NLUSIN:varietyinduesasignifiantdereasefanellatedbneassandpatbneass.RALisaneffetiveediinetinhibitbnelss,inreasetheBDflubarspine,ttalhipbneandttalbdyanddereasethebneturnver.【Keyrds】variety；steprsis;seletiveestrgenreeptrdul

6、atr；ralxifene;etablis;bnedensity【摘要】目的：研究選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SER)雷諾昔酚RAL對(duì)去勢(shì)后雌性大鼠血生化及骨密度(BD)的影響.方法：將5齡未經(jīng)產(chǎn)雌性二級(jí)SD大鼠24只，隨機(jī)分為假手術(shù)(Sha)組、去勢(shì)(VX)組、去勢(shì)RAL(VX+RAL)組.VX+RAL組大鼠術(shù)后7d開場(chǎng)給藥.術(shù)后16k處死各組大鼠，對(duì)各組大鼠血生化指標(biāo)、BD進(jìn)展檢測(cè)，并進(jìn)展骨組織形態(tài)學(xué)觀察.結(jié)果：VX組與Sha組相比擬，血鈣a2+明顯增高3.020.38l/Lvs2.240.30l/L,P0.01，血堿性磷酸酶(ALP)升高2.3360.032kat/Lvs(1.8320.02

7、8)kat/L,P0.05，血磷(P)無(wú)明顯差異.VX+RAL治療組與VX組相比，血清a2，ALP均降低2.380.39l/Lvs(3.020.38)l/L,(1.9520.023)kat/Lvs(2.3360.032)kat/L,P0.05，血P無(wú)明顯差異.與Sha組相比，VX組股骨近端0.1810.021g/2vs(0.2870.025)g/2、股骨干0.1570.034g/2vs(0.2600.039)g/2及腰椎BD明顯降低(P0.01)；VX+RAL治療組各部位BD高于VX組(P0.05)，但未到達(dá)Sha組程度(P0.05).結(jié)論：去勢(shì)后16k大鼠松質(zhì)骨、皮質(zhì)骨骨量、骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)

8、指標(biāo)均明顯下降經(jīng)RAL治療后的去勢(shì)大鼠松質(zhì)骨、皮質(zhì)骨密度、骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)得到較好維持.【關(guān)鍵詞】卵巢切除術(shù)；骨質(zhì)疏松；選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑；雷諾昔酚；代謝；骨密度0引言絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥pstenpausalsteprsis，P是一種嚴(yán)重危害中老年婦女安康的代謝性疾病，以骨轉(zhuǎn)換加快，成骨與破骨失去平衡，骨量減少和骨組織顯微構(gòu)造受損為特點(diǎn)，繼而引起骨骼脆性和骨折危險(xiǎn)性增加.目前臨床上主要是通過雌激素替代療法來(lái)預(yù)防和防治P，其骨保護(hù)作用主要是通過抑制破骨細(xì)胞的增殖和活性，減緩和抑制骨吸收，促進(jìn)成骨作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的.但其存在體質(zhì)量增加、不規(guī)那么陰道出血、乳房痛、子宮內(nèi)膜增生等副作用，長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)增加

9、乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的危險(xiǎn)性1,2.雷諾昔酚(RAL)是一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(seletiveestrgenreeptrdulatr，SER)，對(duì)骨組織具有雌激素樣骨保護(hù)作用，在乳腺和子宮那么具有拮抗雌激素的作用，使用RAL預(yù)防和防治P可以防止雌激素替代療法對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的副作用.我們討論RAL對(duì)去勢(shì)后大鼠P形成過程中骨密度(BD)和血生化指標(biāo)的影響.1材料和方法1.1材料5齡未經(jīng)產(chǎn)雌性二級(jí)SD大鼠24只，體質(zhì)量30025g，購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心.隨機(jī)分為3組：假手術(shù)(Sha)組、去勢(shì)(VX)組、VX+RAL組，每組8只.組間大鼠體質(zhì)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.所有大鼠均以30g/L戊巴比妥鈉40

10、g/kg,ip麻醉，在無(wú)菌條件下手術(shù)，取背部切口.別離、結(jié)扎、摘除VX組、VX+RAL組大鼠雙側(cè)卵巢，分層縫合關(guān)閉切口.別離、提出Sha組大鼠雙側(cè)卵巢后，放回腹腔.術(shù)后7d開場(chǎng)將RAL片劑(美國(guó)禮來(lái)公司產(chǎn)品)碾碎制成濃度為0.3g/L的生理鹽水懸液，按每只1g/kgd給VX+RAL組大鼠灌胃.Sha組、VX組大鼠按每只3L/(kgd)用生理鹽水灌胃.術(shù)后3組大鼠均在二級(jí)環(huán)境下分籠飼養(yǎng)，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由攝水.3組大鼠均于術(shù)后16k后處死.各組大鼠ip麻醉，經(jīng)左心室取血4L，離心3000r/in15in，取上清液作血標(biāo)本，-20冰箱保存.取各組大鼠股骨、腰椎用于測(cè)量BD.取L2椎體，40g/L中

11、性甲醛固定，脫鈣后常規(guī)石蠟切片，切片厚度4，HE染色.1.2方法1.2.1血液生化指標(biāo)測(cè)定血清a2用鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法，血P用亞鐵磷鉬酸法，血堿性磷酸酶(ALP)用對(duì)硝基苯磷酸水解法，均用PB半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定.1.2.2BD測(cè)量使用Lunar公司的DPXIQ型7040雙能X線吸收測(cè)量平臺(tái)，通過計(jì)算機(jī)中小動(dòng)物軟件系統(tǒng)測(cè)股骨頸基底部、股骨干中點(diǎn)及第35腰椎中點(diǎn)BD.1.2.3骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析及形態(tài)學(xué)觀察采用德國(guó)LEia公司550型計(jì)算機(jī)全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)測(cè)量參數(shù)，觀察每只大鼠組織切片2張，測(cè)定骨量參數(shù)：骨小梁體積BVTV骨小梁面積髓腔和骨小梁面積100%；骨小梁平均厚度Tb.Th；皮質(zhì)骨

12、平均厚度.組織形態(tài)學(xué)觀察，光鏡下觀察L2椎體HE染色切片形態(tài)學(xué)特征.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采取SPSS軟件進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析，所有測(cè)量參數(shù)均以xs表示.組間差異比擬采用方差分析及LSDt檢驗(yàn).2結(jié)果2.1血液生化指標(biāo)VX組與Sha組相比擬，血a2值明顯升高P0.01，ALP升高P0.05，血P無(wú)明顯差異；VX+RAL組與Sha組相比擬，血a2，ALP值均明顯升高P0.05，血P無(wú)明顯差異Tab1.表1各組血液生化指標(biāo)ALP，a2+，P測(cè)定值略2.2VX組與Sha組比擬術(shù)后16k皮質(zhì)骨及松質(zhì)骨BD均明顯降低.股骨近端、股骨干、L35椎體BD均明顯下降P0.01；VX+RAL組與VX組比擬，股骨頸基底部、股骨干B

13、D均明顯高于VX組P0.01；VX+RAL組與Sha組比擬，股骨近端、股骨干BD均明顯低于Sha組P0.01,Tab2.表2各組BD測(cè)定值比擬略2.3形態(tài)計(jì)量學(xué)和光鏡下觀察與Sha組比擬，VX組骨小梁體積、骨小梁平均厚度、皮質(zhì)骨厚度顯著下降P0.01.VX+RAL組與VX組相比，上述各參數(shù)均得到改善Tab3.表3各組大鼠腰椎骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)比擬略腰椎HE切片光鏡下觀察見VX組腰椎骨小梁明顯稀疏，皮質(zhì)骨變薄，小梁及間隙增大，局部區(qū)域骨小梁消失，對(duì)照組及治療組腰椎骨小梁豐富，骨皮質(zhì)增厚，小梁間隔較小(Fig1,2).Fig1A分別為Sha組、VX組、RAL治療組腰椎骨小粱構(gòu)造的組織學(xué)比照箭頭所

14、指為骨小梁；Fig2A分別為Sha組、VX組、RAL治療組腰椎皮質(zhì)骨組織學(xué)比照箭頭所指為皮質(zhì)骨.3討論SER是人工合成非甾體化合物，通過與雌激素竟?fàn)幋萍に厥荏w(ER)而發(fā)揮作用，能選擇性的與骨細(xì)胞上的雌激素受體結(jié)合而抑制骨喪失.RAL是新一代SER，有良好的組織選擇性，對(duì)下丘腦、乳腺和子宮內(nèi)膜無(wú)刺激作用3，對(duì)骨骼及心血管系統(tǒng)均具有保護(hù)作用.an等4認(rèn)為，RAL對(duì)骨組織的作用是由配基類型、受體類型(ERa,ER)及結(jié)合器3個(gè)因素所決定.RAL與ER結(jié)合影響ER與特異DNA互相作用動(dòng)力學(xué)，進(jìn)而影響基因轉(zhuǎn)錄；因RAL與ER結(jié)合的親和力、結(jié)合機(jī)制、誘導(dǎo)結(jié)果與雌激素不同，使RAL與雌激素同ER結(jié)合后形成

15、的復(fù)合物存在構(gòu)造差異，這種差異被細(xì)胞內(nèi)特殊轉(zhuǎn)錄因子識(shí)別從而產(chǎn)生了與雌激素不盡一樣的生物效應(yīng).ER包含兩個(gè)轉(zhuǎn)錄構(gòu)造域：AF1和AF2，兩者在不同細(xì)胞的分布存在差異，RAL為AF2的拮抗劑，對(duì)AF2控制的細(xì)胞起抑制雌激素樣作用；相反，在AF1占主導(dǎo)地位的受體中，它起協(xié)同作用.骨組織中的ER受體以AF1為主，使得RAL對(duì)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞具有雌激素樣作用5.研究說明6：ER與雌激素類物質(zhì)結(jié)合后，激活多個(gè)位于DNA上的應(yīng)答素(respnseeleent)，如雌激素應(yīng)答素及RAL應(yīng)答素，通過應(yīng)答素來(lái)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，影響蛋白合成.人的成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞及骨細(xì)胞前體上均存在ER，RAL通過ER介導(dǎo)，刺激成骨細(xì)

16、胞，抑制破骨細(xì)胞，調(diào)控骨的形成、吸收和骨改建.去勢(shì)后大鼠血清a2+，ALP酶明顯升高，說明骨形成加快.16k后的大鼠BD明顯下降，與Sha組相比，腰椎BD明顯下降P0.01，提示去勢(shì)后松質(zhì)骨骨量明顯減少；股骨干BD亦明顯下降P0.01，提示去勢(shì)后皮質(zhì)骨骨量亦明顯減少.股骨近端BD較Sha組亦明顯下降P0.01，提示去勢(shì)后大鼠皮質(zhì)骨、松質(zhì)骨骨量均明顯喪失，總體上說明去勢(shì)后大鼠骨改建呈高轉(zhuǎn)換狀態(tài)，骨形成和骨吸收同時(shí)增加，但骨吸收大于骨形成，骨形成和骨吸收的失衡最終導(dǎo)致了骨質(zhì)疏松.RAL治療后，大鼠血清a2及ALP明顯降低，與Sha組已無(wú)明顯差異，說明骨形成降低；同時(shí)，各部位BD明顯大于VX組，松質(zhì)

17、骨、皮質(zhì)骨BD大于VX組，骨小梁體積、骨小梁平均厚度、椎體皮質(zhì)骨平均厚度均高于VX組P0.01，與Sha組接近，說明RAL抑制了去勢(shì)大鼠的骨高轉(zhuǎn)換狀態(tài)，糾正了骨形成和骨吸收的失衡，使骨形成大于骨吸收.本研究顯示，去勢(shì)大鼠經(jīng)RAL治療3后腰椎、股骨干、股骨近端BD得到較好的維持，而未經(jīng)RAL治療的VX組大鼠BD卻呈降低趨勢(shì)，論證了RAL可以抑制和延緩骨質(zhì)疏松的發(fā)生，對(duì)雌激素缺乏引起的骨質(zhì)疏松有良好的防治作用.【參考文獻(xiàn)】1陸葉，于麗，陳春玲，等.雌、孕激素和米非司酮對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的作用J.北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2022；3：37.LuY，YuL，henL，etalEffetsfestrgen

18、，prgestinandifepristnenendetrialarinaelllinesJ.JPekingUniv(HealthSi)，2022；3：37.2Shairer，LubinJ，TrisiR，etalenpausalestrgenandestrgenprgestinreplaeenttherapyandbreastanerriskJJAA，2000；283(4)：485-491.3eresiniG，rgantiS，RebehiI，etalAneyearfllupntheeffetsfralxifenenthyridfuntininpstenpausalenJenpause，2022；11(2)：176-l79.4anA，Herenegilddulatinft