流式細胞儀精品課件

1、流式細胞儀第1頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五總覽 流式細胞術(shù)基本知識 流式細胞儀的組成 數(shù)據(jù)采集與分析第2頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五流式細胞技術(shù)是什么？流式細胞術(shù)在流動的狀態(tài)中檢測細胞或顆粒的各項特性特異性強，靈敏度高，速度快，并能實現(xiàn)多參數(shù)分析可檢測的樣本種類多樣：外周血，骨髓，細胞穿刺液，洗脫液，實體組織，培養(yǎng)細胞，微生物Flow CytometryFlow:Fluid Cyto:Cell Metry:Measurement第3頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五流式細胞術(shù)檢測樣本0.4um40um第4頁，共49頁

2、，2022年，5月20日，1點29分，星期五流式細胞術(shù)檢測指標(biāo)流式細胞術(shù)提供的信息： - 相對細胞大小 - 相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度 - 染色過細胞的相對熒光強度第5頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五細胞結(jié)構(gòu)細胞大小細胞粒度DNA含量與細胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細胞功能細胞表面/胞漿/核的特異性抗原細胞活性細胞內(nèi)細胞因子酶活性激素結(jié)合位點細胞受體細胞凋亡在上述信號基礎(chǔ)上的細胞分選流式細胞術(shù)的應(yīng)用第6頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五流式細胞儀組成液流系統(tǒng)：形成層流系統(tǒng)，聚焦細胞光學(xué)系統(tǒng)：產(chǎn)生和收集光學(xué)信號電子系統(tǒng)：光信號轉(zhuǎn)化為電信號，

3、進行信號處理第7頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五Fluidics DiagramSheath Flowsheath tankSample Flowsheathinterior reservoirwasteinterior reservoirsheath filtersample injectiontube (SIT)test tubeor plateflow cellinterrogation pointbubble filterwaste tank第8頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五液流系統(tǒng)第9頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，

4、星期五光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包括:- 激光器- 透鏡和反射鏡，將激光引導(dǎo)到檢測區(qū)域收集光學(xué)系統(tǒng)包括:濾光片，將產(chǎn)生的光信號引導(dǎo)到對應(yīng)的光學(xué)接收器第10頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第11頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第12頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五光學(xué)系統(tǒng)第13頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第14頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五光學(xué)系統(tǒng)-濾光片460 500 540460 500 540460 500 540SP 500LP 500BP500/50LongpassS

5、hortpassBandpass第15頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第16頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第17頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage第18頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五電子系統(tǒng)第19頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五電子系統(tǒng)第20頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五Review懸浮狀態(tài)的細胞單個流過流動室細胞被激發(fā)產(chǎn)生散射光和熒光 信號信號

6、被采集轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號存儲于電腦上液流系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電子系統(tǒng)第21頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五回顧流式細胞儀的三大組成部分？濾光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？第22頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五數(shù)據(jù)采集三種數(shù)據(jù)： - 前向散射光FSC - 側(cè)向散射光SSC - 各種熒光散射光FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L4第23頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五當(dāng)使用激光光源時，在前向方向（和激光行進的方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的強度是和細胞或其他檢測顆粒的大小、形狀密切相關(guān)的數(shù)據(jù)采集-

7、前向散射光第24頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五當(dāng)激光光源被使用時，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生， 可以用90o 角的側(cè)向散射光檢測通道來采集側(cè)向散射光的強度和細胞或其他檢測顆粒的顆粒密度、內(nèi)部復(fù)雜程度密切相關(guān)數(shù)據(jù)采集-側(cè)向散射光第25頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五外周全血細胞散射光雙參數(shù)點圖 顆粒雜質(zhì)、氣泡對檢測的影響第26頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五細胞標(biāo)記上熒光物質(zhì)后，這種熒光物質(zhì)要求特定波長的激發(fā)光來激發(fā)，同時發(fā)出特定波長的光熒光物質(zhì)被激發(fā)以后產(chǎn)生的發(fā)射光將由特定的熒光通道來接收特定檢測是通過光學(xué)濾片和透鏡來控

8、制的數(shù)據(jù)采集-熒光信號熒光強度是和細胞上標(biāo)記上的熒光染料的量正相關(guān)第27頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五數(shù)據(jù)采集第28頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五電壓信號放大方式：log、lin信號類型：A,W,H電壓的調(diào)節(jié):根據(jù)陰性對照管來調(diào)節(jié)第29頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五閾值可以以任意參數(shù)及多個參數(shù)的組合作為閾值大多數(shù)樣本都可以設(shè)定FSC/SSC閾值以下的信號不存儲根據(jù)陰性對照管來調(diào)節(jié)目的是將不需要的雜質(zhì)信號，噪音信號，無用的細胞信號等扣除，使收集到的都是有用信號第30頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期

9、五第31頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第32頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五補償補償方式：任意兩個通道之間，可以采用手動或自動補償。補償?shù)恼{(diào)節(jié):根據(jù)單染對照管來調(diào)節(jié)第33頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第34頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第35頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第36頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第37頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五第38頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五1.) Com

10、pensation - Too Little; Too Much第39頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五2.) Basic Principles of Compensation - % Compensation is independent of fluorescence intensity第40頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五3.) Compensation- Too Dim, Too Bright Compensation ControlsSmall errors in compensation of a dim control (A) can

11、 result in large compensation errors with bright reagents (B & C).第41頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五數(shù)據(jù)分析 流式數(shù)據(jù)直方圖散點圖等高線圖密度圖三維圖統(tǒng)計數(shù)據(jù)第42頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五直方圖直方圖(Distribution Histogram)橫坐標(biāo)代表熒光信號或散射光信號相對強度，單位是對數(shù)，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)?？v坐標(biāo)一般是細胞數(shù)。第43頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五散點圖散點圖(Dot Plot)X坐標(biāo)為該細胞一參數(shù)相對含量，Y坐標(biāo)為該細胞另一參數(shù)的含量，可以將細胞亞群分開。第44頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五等高線圖和密度圖第45頁，共49頁，2022年，5月20日，1點29分，星期五三維圖第46頁，共