高效液相色譜儀檢定規(guī)程

1、 *泵流量穩(wěn)定性誤差SRW(12)%R3柱恒溫箱溫度Tv2C；TCW1C4*基線噪聲W5x10-4AUW5x10-4AUW5x10-7AIU5*基線漂移W5x10-3AU/hW5x10-3AU/hW5x10-6AU/h6靈敏度W10-8g/m1W10-4g/m17*最小檢測(cè)量W5x10-8g/m1W5x10-1og/m1W5x10-6g/m18線性范圍21039*定性重復(fù)性RSDW1.5%10*定量重復(fù)性RSDW3%*帶星號(hào)的項(xiàng)目為必須鑒定的項(xiàng)目53檢定環(huán)境531室內(nèi)環(huán)境：應(yīng)清潔無塵，無易燃、易爆和腐蝕性氣體，室內(nèi)排風(fēng)良好，且不應(yīng)放置與測(cè)定無關(guān)的其他雜物。5.3.2室內(nèi)溫度：10C30C（溫度

2、波動(dòng)應(yīng)不大于3C/操作期間；使用折射率檢測(cè)器時(shí)應(yīng)不大于2C）。5.3.3室內(nèi)相對(duì)濕度：85%。5.3.4電源：電壓（22022）V；頻率：（500.5）Hz。5.4檢定設(shè)備和試劑5.4.1分析天平：最大稱量100g，最小分刻度O.lmg，或其它微量自動(dòng)電子天平。經(jīng)檢定合格。5.4.2秒表：分度值應(yīng)小于0.1s，經(jīng)檢定合格。5.4.3容量瓶：50ml10個(gè)，經(jīng)檢定合格。5.4.4玻璃水銀溫度計(jì)：OC150C，分刻度0.1C,1支，經(jīng)檢定合格。5.4.5注射器：10卩1,50卩1各兩支，經(jīng)校準(zhǔn)合格，10ml兩支。5.4.6標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑：萘、硫酸奎寧為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；丙三醇、異丙醇、丙醇試劑的等級(jí)和溶液

3、的配制方法見附錄B。5.4.7甲醇（HPLC純）、水（石英亞沸重蒸去離子水），及其它分析純的無機(jī)試劑，在使用前需過濾，脫氣。5.5檢定項(xiàng)目和檢定方法5.5.1泵流量的檢定：連接好色譜柱和檢測(cè)器，以甲醇為流動(dòng)相，流量為10m1/min，待流速（或壓力）穩(wěn)定后，在流動(dòng)相排出口用已稱量過的容量瓶按表2的設(shè)定流量分別準(zhǔn)確收集流動(dòng)相，再稱量。按式（1）和式（2）分別計(jì)算泵流量設(shè)定值誤差Ss和泵流量穩(wěn)定性誤差SR。Ss=(Fm-Fs)/Fs(1)SR=(Fmax-Fmin)/(2)R式中:Ss流量設(shè)定值誤差Fm（m2-m1）xp.xt，流量實(shí)測(cè)值m2容量瓶+流動(dòng)相的質(zhì)量m1容量瓶的質(zhì)量Fs流量設(shè)定值p.實(shí)

4、驗(yàn)溫度下流動(dòng)相的密度t流動(dòng)相的收集時(shí)間SR流量穩(wěn)定性誤差Fmax-測(cè)量列中的流量最大值Fmin-測(cè)量列中的流量最小值-測(cè)量列的算術(shù)平均值表2Ss及Sr的檢定流量設(shè)定值Fs/（ml/min）0.51.02.0測(cè)量次數(shù)333流動(dòng)相收集時(shí)間（t/min）251510允許誤差Ss5%3%2%Sr3%2%2%注：可以根據(jù)實(shí)際要求設(shè)定泵的檢定流量。每當(dāng)變換流量設(shè)定值后，應(yīng)等待流量穩(wěn)定后方可收集測(cè)量流量。測(cè)定順序可隨意選擇，但對(duì)同一流量的測(cè)定應(yīng)3次設(shè)定和測(cè)量，取其平均值。552柱恒溫箱溫度的檢定按儀器說明書選擇最低和最高可控溫度點(diǎn)，將水銀溫度計(jì)插入柱箱內(nèi)，待溫度指示穩(wěn)定后，記錄儀器溫度指示值及水銀溫度計(jì)指示

5、值，每隔10分鐘記錄一次，共計(jì)7次，取其算術(shù)平均值，計(jì)算設(shè)定值與平均值之差及測(cè)量最大值與最小值之差。553定性和定量重復(fù)性的檢定：在儀器處于穩(wěn)定的運(yùn)行狀態(tài)下用微量注射器或定體積進(jìn)樣管注入適量的標(biāo)準(zhǔn)溶液（紫外可見光檢測(cè)器用萘；熒光檢測(cè)器用硫酸奎寧；折光檢測(cè)器用丙三醇等），記錄峰保留時(shí)間和峰面積，連續(xù)測(cè)量8次，分別以峰保留時(shí)間和峰面積按式（3）計(jì)算定性和定量重復(fù)性（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD）。式中：Xi-第次測(cè)得的保留時(shí)間或峰面積-次測(cè)量結(jié)果的算術(shù)平均值i-測(cè)量序號(hào)n-測(cè)量次數(shù)554紫外-可見光檢測(cè)器性能的檢定基線噪聲和基線漂移：按儀器說明書聯(lián)接好儀器各組件。用甲醇為流動(dòng)相，流量1.0ml/min；吸收

6、波長(zhǎng)254nm,范圍最靈敏檔；記錄紙速度5mm/min10mm/min。待基線穩(wěn)定后，運(yùn)行基線性30min40min,測(cè)量并計(jì)算基線噪聲和基線漂移。最小檢測(cè)濃度：經(jīng)基線檢測(cè)后，拆除色譜柱。在靜態(tài)條件下，用注射器直接注入2ml5ml、4X10-8g/ml萘的甲醇溶液于樣品池中，其響應(yīng)峰高應(yīng)大于或等于兩倍基線噪聲峰峰高。按式（4）計(jì)算其最小檢測(cè)量濃度。pi=2XHNXp/H（4）式中：pi最小檢測(cè)濃度HN噪聲峰高（記錄儀格數(shù)或?qū)崪y(cè)高度）P樣品濃度H樣品峰高（記錄儀格數(shù)或?qū)崪y(cè)高度）線性范圍：經(jīng)最小檢測(cè)濃度檢測(cè)后，以2%異丙醇的水溶液為甲溶液；系列丙酮-2%異丙醇的水溶液為乙溶液；用甲溶液沖洗樣品池若

7、干次，待基線穩(wěn)定后，將其調(diào)至零點(diǎn)位置，然后依次注入0.1%、0.2%1.0%的乙溶液于樣品池中，記錄各溶液的響應(yīng)峰值。各重復(fù)測(cè)定3次，取其算術(shù)平均值。對(duì)丙醇含量與峰值作圖，找出曲線拐點(diǎn)（比理論值低5%處），此為線性范圍的上限值并按式（4）計(jì)算其最小檢測(cè)濃度值pi，再求出ph/pi比值，即為檢測(cè)器（丙酮）的線性范圍。5.5.5熒光檢測(cè)器性能的檢定基線噪聲和基線漂移：連接好檢測(cè)器與記錄儀，吸收范圍最靈敏檔，激發(fā)波長(zhǎng)345nm，發(fā)射波長(zhǎng)455nm,記錄紙速10mm/min。待檢測(cè)器溫度穩(wěn)定后，在靜態(tài)條件下，用注射器向樣品池注入丙酮水溶液沖洗數(shù)次。然后，再注入5ml的丙酮，堵住樣品池的出口，5min后

8、，再注入5ml0.05mol/L的H2SO4水溶液（不應(yīng)有氣泡），然后運(yùn)行基線30min40min，測(cè)量并計(jì)算機(jī)基線噪聲和基線漂移值。最小檢測(cè)濃度和靈敏度：經(jīng)基線檢測(cè)后，用注射器慢慢注入約3ml0.05mol/L的H2SO4水溶液于樣品池中，待基線穩(wěn)定后，將其調(diào)至零點(diǎn)位置。然后用注射器將10-8g/ml硫酸奎寧的硫酸（0.05mol/L）水溶液注入樣品池中，其響應(yīng)值應(yīng)達(dá)到滿量程的70%以上，重復(fù)測(cè)定3次,測(cè)量峰值，取其算術(shù)平均值，按式（4）計(jì)算最小檢測(cè)濃度，并計(jì)算靈敏度。線性范圍：經(jīng)最小檢測(cè)濃度檢測(cè)后，吸收范圍改為中間位置，用注射器向樣品池注入5ml0.05mol/L的H2SO4水溶液以沖洗樣

9、品池。然后用注射器依次將1X10-5g/ml、2X10-5g/ml、3X10-5g/ml1x10-4g/ml的硫酸奎寧硫酸（0.05mol/L）水溶液注入樣品池中，分別記錄其響應(yīng)峰值，各重復(fù)測(cè)定3次，取其算術(shù)平均值。然后對(duì)硫酸奎寧濃度與響應(yīng)峰值作圖，找出曲線拐點(diǎn)（比理論值低5%處），此為線性上線值ph。并按式（4）計(jì)算其最小檢測(cè)濃度值ci，再求出ph/pi比值，即為其線性范圍。1556折光率檢測(cè)器性能的檢定基線噪聲和漂移：連接好色譜柱、檢測(cè)器及儀器的其它部分，以純水為流動(dòng)相，流量1ml/min，參比池亦為純水，范圍選擇最靈敏檔。待儀器穩(wěn)定后，運(yùn)行基線30min40min,測(cè)量并計(jì)算基線噪聲和基

10、線漂移值。最小檢測(cè)濃度和靈敏度：拆除色譜柱，用蒸餾水沖洗樣品池，范圍選擇最靈敏檔，待基線穩(wěn)定后，將其調(diào)至零點(diǎn)位置。用注射器將10-4g/ml的丙三醇水溶液注入樣品池中，其響應(yīng)峰值應(yīng)達(dá)到滿量程的70%以上，重復(fù)測(cè)定3次，測(cè)量峰值，取其算術(shù)平均值，按式（4）計(jì)算最小檢測(cè)濃度，并計(jì)算靈敏度。線性范圍：用蒸餾水反復(fù)沖洗樣品池和參比池，然后依次向樣品池注入10-6g/ml，10-5g/ml，10-4g/ml，2X10-3g/ml，3X10-3g/ml，4x10-3g/ml,5X10-3g/ml的丙三醇水溶液，分別記錄響應(yīng)峰值，對(duì)丙三醇濃度與峰值作圖，求出曲線拐點(diǎn)（比理論值低5%處），此點(diǎn)為線性上限ph。用式（4）計(jì)算其最小檢測(cè)濃度值r,再算