咖啡及伴侶對(duì)細(xì)胞的微核誘導(dǎo)

1、誘變物質(zhì)的微核檢測(cè)技摘要：本實(shí)驗(yàn)以大蒜為實(shí)驗(yàn)材料，研究咖啡和咖啡伴侶能否誘發(fā)細(xì)胞產(chǎn)生微核，以及咖啡和咖啡伴侶的毒性是否有疊加效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)中將咖啡和咖啡伴侶配置為不同濃度梯度的溶液，對(duì)大蒜進(jìn)行誘發(fā)培養(yǎng)24小時(shí)，并觀察檢測(cè)微核的誘發(fā)率。前言：由于大量新的化合物的合成，原子能應(yīng)用，各種各樣工業(yè)廢物的排出，使人們很需要有一套高度靈敏，技術(shù)簡(jiǎn)單的測(cè)試系統(tǒng)來(lái)監(jiān)視環(huán)境的變化。只有真核的測(cè)試系統(tǒng)更能直接推測(cè)誘變物質(zhì)對(duì)人類(lèi)或其它高等生物的遺傳危害，在這方面，微核測(cè)試是一種比較理想的方法。微核是真核生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，往往是細(xì)胞經(jīng)輻射或化學(xué)藥物的作用而產(chǎn)生。在細(xì)胞間期微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外、大小應(yīng)

2、在主核13以下。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣。一般認(rèn)為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產(chǎn)生的，但有些實(shí)驗(yàn)也證明整條的染色體或多條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在細(xì)胞分裂末期被兩個(gè)子細(xì)胞核所排斥便形成了第三個(gè)核塊。已經(jīng)證實(shí)微核率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān)，這一點(diǎn)和染色體畸變的情況一樣。所以可用簡(jiǎn)易的間期微核計(jì)數(shù)來(lái)代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計(jì)數(shù)?？Х群涂Х劝閭H為現(xiàn)代人們經(jīng)常選用的飲用品。而咖啡中的咖啡因之類(lèi)的物質(zhì)和咖啡伴侶中植物末（奶精）對(duì)人體的健康有沒(méi)有危害呢？為此我們用大蒜作為材料研究咖啡和咖啡伴侶對(duì)細(xì)胞染色體畸變的影響，實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞微核誘發(fā)率，得到

3、咖啡或咖啡因?qū)?xì)胞的影響程度。1、材料與方法1.1材料1.1.1材料：大蒜雀巢速溶咖啡雀巢速溶咖啡伴侶1.1.2試劑：NaN3HCL卡諾固定液70%乙醇改良苯酚品紅1.1.3儀器：培養(yǎng)皿量筒燒杯玻璃棒電子天平手套離心管單面刀片蓋玻片載玻片顯微鏡1.2方法1.2.1取材：將大蒜置于24C水中浸泡24h,選擇根長(zhǎng)整齊一致，不定根長(zhǎng)約0.51cm左右的大蒜隨機(jī)分組。1.2.2處理各實(shí)驗(yàn)組：配置50mmol/L的NaN3溶液作為陽(yáng)性對(duì)照組的培養(yǎng)液，用自來(lái)水作為陰性對(duì)照組的培養(yǎng)液，將咖啡和咖啡因配置成不同濃度梯度的溶液作為樣品組的培養(yǎng)液，將大蒜置于各組培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時(shí)。樣品濃度梯度如下表表一、樣品濃

4、度梯度溶液咖啡咖啡咖啡咖啡咖啡伴侶咖啡伴侶咖啡+伴侶咖啡+伴侶濃度g/L7530151.515375+1515+31.2.3恢復(fù)培養(yǎng)：將以上實(shí)驗(yàn)組誘發(fā)培養(yǎng)24后的大蒜轉(zhuǎn)移到自來(lái)水中恢復(fù)培養(yǎng)24小時(shí)，注意做好標(biāo)志。1.2.4固定：將恢復(fù)培養(yǎng)好的大蒜用卡諾固定液固定24小時(shí)。1.2.5保存：將固定好的大蒜移至70%乙醇中4弋下保存，備用。1.2.6制片：將根尖用1MHCI處理的10min,水洗3次。切取近根尖分生區(qū)的伸長(zhǎng)區(qū)組織，用改良苯酚品紅染色10-15min。壓片：吸取染液，加上蓋玻片后，用鉛筆輕敲使細(xì)胞分散，最后垂直壓下去1.2.7觀察：將制好的片子放到顯微鏡下觀察。每個(gè)根尖計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)

5、胞（也可取5個(gè)視野計(jì)數(shù)），統(tǒng)計(jì)含微核的細(xì)胞數(shù)，然后取平均值，即為該處理的微核千分率。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.計(jì)算各測(cè)試樣品（包括對(duì)照組）微核千分率（MCN%。）.某測(cè)試樣品（或?qū)φ眨┯^察到的微垓數(shù)_“一某測(cè)試樣品（或?qū)φ眨┯^察到的細(xì)胞數(shù)如果對(duì)照本底MCN%。為10%。以下，可采用如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析以確定樣品的污染程度：MCN%在10%以下，表示基本沒(méi)有污染；MCN%在10%o18%o區(qū)間，則表示有輕度污染;MCN%在18%o30%o區(qū)間，則表示有中度污染;MCN%。在30%。以上，則表示有重度污染;2、實(shí)驗(yàn)圖片ABE圖1圖中A為75gL的咖啡培養(yǎng)誘導(dǎo)的大蒜的根尖細(xì)胞；B為15gL咖啡伴侶培養(yǎng)誘導(dǎo)的大蒜的

6、根尖細(xì)胞；C為75g/L的咖啡和15g/L咖啡伴侶混合培養(yǎng)誘導(dǎo)的大蒜的根尖細(xì)胞；D為清水培養(yǎng)的大蒜的根尖細(xì)胞；E為50mmol/L的NaN3培養(yǎng)誘導(dǎo)的大蒜的根尖細(xì)胞。3、分析、討論由圖1中的圖片可知，咖啡、咖啡伴侶、咖啡和咖啡伴侶混合培養(yǎng)誘導(dǎo)的大蒜生長(zhǎng)都沒(méi)有成功的誘發(fā)大蒜在分裂過(guò)程中產(chǎn)生微核，所以微核千分率為0根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)可知，用蠶豆作為材料研究咖啡的微核誘發(fā)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果能得到成功誘發(fā)微核細(xì)胞，而我們的實(shí)驗(yàn)選擇了大蒜作為材料則得不到成功誘發(fā)微核的細(xì)胞，且為了避免大蒜和蠶豆對(duì)咖啡的培養(yǎng)濃度的要求不同，我們配置能誘發(fā)蠶豆的咖啡溶液濃度及幾組高于誘發(fā)蠶豆的咖啡溶液濃度的培養(yǎng)液。但是依舊沒(méi)有得到預(yù)期的結(jié)果，說(shuō)明大蒜對(duì)于咖啡的敏感度不高或者我們?cè)O(shè)計(jì)的濃度不適合。這也提醒我們?cè)趯?shí)驗(yàn)的選材上要加倍注意。雖然在細(xì)胞中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)微核，但是從實(shí)際大蒜的根的長(zhǎng)勢(shì)中可以看出隨著溶液濃度的增長(zhǎng)對(duì)大蒜的生長(zhǎng)影響越大，大蒜的跟長(zhǎng)的越短。而咖啡和咖啡伴侶共同作用情況下的大蒜的根的長(zhǎng)勢(shì)和單獨(dú)的咖啡溶液中的長(zhǎng)勢(shì)差不多，但是比單獨(dú)的咖啡伴侶的長(zhǎng)勢(shì)要短