離子交換層析原理步驟詳細(xì)

1、離子交換層析ion exchange chromatography1一、原理 離子交換層析是用離子交換劑（具有離子交換性能的物質(zhì)）作固定相，利用它與流動(dòng)相中的某種離子進(jìn)行可逆的交換性質(zhì)來分離子型混合物的層析方法 2低鹽高鹽分離結(jié)束去吸附34帶電荷不同蛋白質(zhì)在特定pH值下有不同帶電特性5膠體洗脫與樹脂結(jié)合力離子交換樹脂如何分離蛋白質(zhì)6二、離子交換劑的類型在惰性載體上引入帶有電荷的活性基團(tuán)（一）按活性功能基團(tuán)帶電荷性質(zhì)不同陽(yáng)離子交換劑 帶負(fù)電荷，與陽(yáng)離子交換陰離子交換劑帶正電荷，與陰離子交換 陰離子交換樹脂對(duì)化學(xué)試劑及熱都不如陽(yáng)離子交換樹脂穩(wěn)定。膠體膠體71.離子交換樹脂：(1)類型聚苯乙烯樹脂：

2、（二）按載體種類不同苯乙烯二乙烯苯聚苯乙烯母體交聯(lián)劑8聚丙烯酸陽(yáng)離子交換樹脂甲基丙烯酸 二乙烯苯特點(diǎn)：高交換量 pH電荷高者離子大者濃度大者1516（4）離子交換樹脂對(duì)離子的親和力陽(yáng)離子樹脂電價(jià)數(shù)：Na+Ca+Al+Ti+原子價(jià)數(shù)相同，原子序數(shù) Li+Na+K+Pb+陰離子強(qiáng)堿性交換樹脂CH3COO-F-OH-HCOO-CL-SCN-Br-CrO4=NO3-I-C2O4=SO4=弱堿性交換樹脂F(xiàn)- CL- Br-= I- =CH3COOMo4=PO4=NO3-酒石酸根檸檬酸根C2O4=SO4=4條件下使用,具有羧甲基 2.離子交換纖維素183.離子交換凝膠分離大分子物質(zhì)如：葡聚糖（Sephad

3、ex） 聚丙烯酰胺（PAG） 瓊脂糖（Sepharose）19操作過程： 1.裝柱 2.離子交換 3.洗脫2021帶電荷量少，親和力小的先被洗脫下來帶電荷量多，親和力大的后被洗脫下來 22三、操作注意點(diǎn)（一）離子交換劑的選擇原則： 根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)選擇同一性質(zhì)離子交換劑中選用對(duì)被分離物質(zhì)各組分之間結(jié)合力差異大的型號(hào)交換劑231.被分離物質(zhì)帶何種電荷2.被分離物質(zhì)分子的大小 大分子物質(zhì)選用凝膠，其次選用纖維素考慮因素：根據(jù)分離過程的實(shí)驗(yàn)條件 強(qiáng)酸強(qiáng)堿應(yīng)用廣泛 弱酸型只能在堿性范圍內(nèi)使用 弱堿型只能在酸性范圍內(nèi)使用243.被分離物質(zhì)所處的環(huán)境4.被分離物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)5.被分離物質(zhì)的大概數(shù)量25原則：不能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，避免使樣品變性（二）緩沖液的選擇26 原則： 所用洗脫液比吸著物質(zhì)具有更活潑的離子或基團(tuán) 改變pH或離子強(qiáng)度 增強(qiáng)洗脫液與離子交換劑的結(jié)合力 降低分離物與離子交換劑的結(jié)合力 洗脫方式：梯度洗脫(三)洗脫劑27四、應(yīng)用 分離多肽蛋白、氨基酸、核酸及其他帶電的生物分子 28實(shí)驗(yàn)： 離子交換層析分離氨基酸29一、原理：Dowex50陽(yáng)離子交換樹脂 pH 4.2 + pI 9.7Mr 147pI 2.97Mr 1333031一、操作注意點(diǎn)：1、裝柱和加樣同凝膠層析 2、洗脫液（NaOH