高效液相色譜法及應用

1、高效液相色譜法及應用第1頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四慢中等快色譜分離Temporal course淋洗液第2頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四由于液體與氣體性質的以下差異：溶質在液體中的擴散系數(shù)比它在氣體中小105倍左右液體粘度比氣體約大102倍液體表面張力比氣體大104倍左右液體密度比氣體約大103倍液體不可壓縮第3頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四液相色譜以液體為流動相，固定相可以是固體或液體（擔載在固體表面），與氣相色譜相比，帶來一系列變化：例如，填充柱氣相色譜柱，一般填料的尺寸為80-100目，粒度大約是2毫

2、米，而一般高效液相色譜的固定相粒度在210微米，因此流動相通過這樣一段固定床時就產生了很高的反壓。第4頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四因此，我們通常所說的高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography)實際也是高壓液相色譜(High Pressure Liquid Chromatography),因為沒有很高的壓力就不可能產生很高的分離效率。鍵合相高效液相色譜算是一種色譜模式，因為用的是鍵合相的固定相。第5頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四一、液相色譜的分類按溶質在分離過程中的原理：吸附色譜分配色譜離

3、子交換色譜體積排阻色譜親和色譜第6頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四2.按色譜固定相的形式：平板色譜（平面色譜）柱色譜3.按分離的壓力高壓液相色譜（高效液相色譜）中壓液相色譜常壓液相色譜第7頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四Hdp關系圖第8頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四二、液固色譜法一般也把吸附色譜法稱為液固色譜法。液固色譜法的固定相一般為固體吸附劑，常用的是：碳酸鈣、硅膠、氧化鋁、氧化鎂、活性炭等。其中硅膠最為常用。吸附色譜對中等分子量的油溶性樣品可獲得最佳的分離，而對強極性或離子型的樣品，有時會發(fā)生不可逆吸附，不能

4、得到滿意的結果。第9頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四基本原理：吸附劑一般為多孔性的物質，在它們的表面存在著分散的吸附中心，溶質分子和流動相分子在吸附劑表面的活性中心上進行競爭，同時不同溶質之間和同一溶質的不同官能團之間液也存在競爭。競爭的綜合結果就是形成不同溶質在吸附劑表面吸附、解吸平衡。第10頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四吸附解吸X表示溶質分子，下標m為流動相，s為固定相M表示流動相分子，下標m為流動相，s為固定相n為被溶質分子取代的流動相分子數(shù)目用一個式子表示如下：第11頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四第12頁

5、，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四極性吸附劑上有機化合物的保留順序如下：氟碳化合物飽和烴 烯烴芳烴有機鹵化物醚硝基化合物腈叔胺酯醛酮醇伯胺酰胺羧酸磺酸第13頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四三、鍵合相液相色譜鍵合相固定相：在硅膠的表明用鍵合反應把官能基團鍵合到表面上，解決固定相流失的問題。正相色譜：流動相極性比固定相極性小反相色譜：流動相極性比固定相極性大第14頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四第15頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四一般認為鍵合相色譜的機理分配色譜機理，也有人認為它是吸附色譜機理，其

6、實應該是有兩種成分在里面，現(xiàn)在又有疏溶劑理論等機理的提出。第16頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四四、高效液相色譜儀器第17頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四第18頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四儲存和輸送液體設備進樣系統(tǒng)柱系統(tǒng)檢測器控制和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)第19頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四選擇流動相的原則：保持色譜柱的穩(wěn)定性化學惰性適合所用的檢測器對樣品有一定的溶解能力清洗、更換方便、毒性小沸點、粘度等物理性質合適第20頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四反相色譜最常用的流

7、動相：水、甲醇、乙腈、四氫呋喃、異丙醇等。水甲醇體系：大約50水的時候粘度最大水乙腈體系：35水的時候粘度最大。第21頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四存放流動相的容器一定要惰性的，并且有機溶劑要避光。輸液泵要求流量平穩(wěn),可以調節(jié)的流量范圍寬，耐高壓。一般是柱塞往復泵。第22頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四第23頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四進樣系統(tǒng)包括手動進樣和自動進樣無論手動進樣還是自動進樣，都要通過六通閥。六通閥進樣是高壓系統(tǒng)的需要，既不影響系統(tǒng)的正常運行又能夠讓樣品進到系統(tǒng)中去。第24頁，共40頁，2022年

8、，5月20日，20點33分，星期四第25頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四柱系統(tǒng)包括色譜柱和柱溫箱反相鍵合相色譜柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱(一種常用的反相色譜柱。其固定相常用十八烷基(ODS)鍵合相，因此稱為ODS柱也叫C18柱 )。柱溫箱的溫度控制要求比較精確，因為流體的粘度受溫度的影響較大。第26頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四液相色譜檢測器測量原理不同分類：光學性質檢測器電學和電化學性質檢測器熱學性質檢測器第27頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四光學性質檢測器：紫外可見光檢測器示差折光檢測器熒光檢測器蒸

9、發(fā)光散射檢測器化學發(fā)光檢測器第28頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四紫外吸收檢測器有三種類型：固定波長紫外吸收檢測器：低壓汞燈提供固定254nm或280nm紫外光?？勺兌嗖ㄩL檢測器(VWD: variable wavelength detector)：氘燈做光源，光柵分光光二極管陣列檢測器photodiodearray detector（PDAD，PDA, DAD）：鎢燈和氘燈組合光源，進入檢測池的不是單色光，而是一段紫外波長上的光。PDA 可以輔助定性。第29頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四第30頁，共40頁，2022年，5月20日，20點3

10、3分，星期四折光指數(shù)檢測器（refractive index detector RID）：也稱為示差折光檢測器。溶液的折射率等于溶劑及其中所含各組分溶質的折射率與其各自的摩爾分數(shù)的乘積之和。RID是通用型的檢測器，但是靈敏度不高。RID不能用于梯度洗脫。第31頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四蒸發(fā)光散射檢測器第32頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四第33頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四電學和電化學檢測器：安培檢測器電導檢測器庫侖檢測器介電常數(shù)檢測器極譜檢測器第34頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四熱學性質：光聲檢測器熱透鏡和光熱偏轉檢測器第35頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四工作站：完成數(shù)據(jù)采集和對儀器的控制的工作。第36頁，共40頁，2022年，5月20日，20點33分，星期四五、高效液相色譜法的應用和進展1、在生物化學和生