多因素復(fù)合造模法致肺陽(yáng)虛大鼠模型的研究

1、多因素復(fù)合造模法致肺陽(yáng)虛大鼠模型的研究【摘要】目的討論肺陽(yáng)虛大鼠病理模型方法。方法采用煙熏(外邪犯肺)、冰水游泳(形寒勞倦)、常溫游泳(勞倦)、服用他吧唑冰水溶液(免疫抑制、內(nèi)飲生冷)多因素復(fù)合造模法來(lái)制備肺陽(yáng)虛證大鼠模型。觀測(cè)大鼠體征，測(cè)定血液流變學(xué)指標(biāo)。結(jié)果造模后期，大鼠出現(xiàn)喘鳴、呼吸急促、畏寒少動(dòng)、精神萎靡、毛發(fā)混亂無(wú)光澤、飲水量下降等病癥;模型大鼠體重、背部溫度、肛溫、抓力呈顯著性下降(P0.05);低切變率下的全血粘度、全血復(fù)原粘度、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、電泳指數(shù)均顯著性升高(P0.05)。結(jié)論該造模方法能較好的與肺陽(yáng)虛之臨床病癥相吻合，說(shuō)明該方法是可行的。【關(guān)鍵詞】肺陽(yáng)虛;大鼠;血流變1

2、實(shí)驗(yàn)材料1.1材料檸檬酸鈉(分析純，上?；瘜W(xué)試劑公司，20220527)、甲巰咪唑薄膜衣片(他吧唑)，規(guī)格10g50，批號(hào)5728801，德國(guó)默克公司，購(gòu)自浙江省中醫(yī)院，配制成0.1g/l溶液，冷藏;雄獅過(guò)濾嘴香煙(焦油量：10g、煙氣煙堿量：0.8g、煙氣一氧化碳量：12g)，浙江中煙工業(yè)有限責(zé)任公司)。2方法2.1造模方法SD大鼠20只，隨機(jī)分為2組：正常對(duì)照組、模型組，每組10只。模型組大鼠置于透明煙熏箱中香煙煙熏20in/d，使其外邪犯肺;接著常溫游泳30in/d，冰水(02)游泳10in/d，使其勞倦，耗傷陽(yáng)氣;并飲用他吧唑冰水溶液(0.1g/l)，使其免疫低下。以上處理，每天一次，

3、連續(xù)35天，使其外感于寒、內(nèi)傷于陽(yáng)，內(nèi)外合邪，從而使肺陽(yáng)虛衰。2.2指標(biāo)檢測(cè)每日定時(shí)稱量體重、進(jìn)食量、飲水量，并觀察其一般體征是否有肺陽(yáng)虛病癥(如咳聲低弱、皮毛潮濕、乏力少動(dòng)等)。測(cè)定以下指標(biāo)：體重：造模前后的體重差異。于造模第15、24、31天測(cè)定背溫;第16、25、32天測(cè)定肛溫。于溫慧萍，等:多因素復(fù)合造模法致肺陽(yáng)虛大鼠模型的研究造模第5、20、34天測(cè)定抓力大校35天后，下腔靜脈取血，加肝素鈉抗凝，取血后4h內(nèi)測(cè)其血液流變學(xué)指標(biāo)。取全血約2l，測(cè)定全血粘度控制切液錐按高切變率(HS，150s-1)、中切變率(S，50s-1)和低切變率(LS，10s-1)旋轉(zhuǎn)，待轉(zhuǎn)速穩(wěn)定后測(cè)定該切變率下

4、全血粘度(BV);另取全血約1l，離心，測(cè)定血漿粘度(PV);取全血參加血沉管(不得有氣泡)，測(cè)定紅細(xì)胞壓積(HT)、血沉(ESR)、血沉方程K值(K);計(jì)算全血復(fù)原粘度(BRV)，根據(jù)BRV=(BV-PV)/HT，得出各切變率(HS、S、LS)下的BRV;計(jì)算紅細(xì)胞聚集指數(shù)(AI)、變形指數(shù)(DI)、剛性指數(shù)(RI)、電泳指數(shù)(EI)，RAI=LS/HS，DI=1-(PV/HS)0.4/HT，RI=(HS-PV)/(PVHT)，EI=RAI/HT。3結(jié)果3.1一般體征造模后期大鼠出現(xiàn)喘鳴、呼吸急促、畏寒少動(dòng)、精神萎靡、毛發(fā)混亂無(wú)光澤、扎堆等病癥。造模第25與26天，各有只大鼠在造模過(guò)程中死亡

5、，解剖時(shí)發(fā)現(xiàn)腹腔積水，肉眼觀察其肺顏色偏暗，可能是因?yàn)榉魏粑ヂ?，嗆水?dǎo)致死亡。3.2肺陽(yáng)虛大鼠的體重變化表1顯示造模一個(gè)月后，模型組大鼠體重與正常對(duì)照組相比，顯著性下降(P0.05)。這與肺氣耗損肺氣，脾肺有相生關(guān)系，日久子盜母氣，殃及脾土，土不生金，以致肺脾兩虛，那么見(jiàn)哮喘氣促，面白體瘦，說(shuō)明造模成功。表1實(shí)驗(yàn)組鼠體重的比擬轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3.3肺陽(yáng)虛大鼠飲水變化趨勢(shì)由圖1可知，模型組大鼠與正常對(duì)照組比，后期模型組的大鼠飲水量明顯少于正常對(duì)照組大鼠。肺陽(yáng)虛者肺寒氣化不行，那么通調(diào)水道之職失司，痰飲內(nèi)停，從而不渴，表現(xiàn)為飲水量減少，說(shuō)明模型的建立與臨床病癥相吻合，造模成功。圖1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6、飲水變化趨勢(shì)圖3.4肺陽(yáng)虛大鼠的背部體表溫度的變化表2顯示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組的背部溫度有降低趨勢(shì)，造模前期無(wú)差異。造模后期模型組體表溫度低于正常對(duì)照組，呈顯著性差異(P0.05)。肺陽(yáng)虛因陽(yáng)虛陰盛，肺失溫煦，肌膚失溫，故形寒肢冷，其臨床的主癥之一就是背部畏寒，背部體表溫度下降，說(shuō)明造模成功。表2實(shí)驗(yàn)組鼠體表背部溫度的比擬3.5肺陽(yáng)虛大鼠的肛溫的變化表3顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠肛溫降低(P0.05)。肺陽(yáng)虛肺陽(yáng)缺乏，陰寒內(nèi)盛，寒性凝滯，故造模后，大鼠肛溫降低，說(shuō)明機(jī)體陽(yáng)虛，造模成功3.6肺陽(yáng)虛大鼠抓力的變化表4顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠抓力降低(P0.05)。提示可

7、能與肺陽(yáng)虛者衛(wèi)陽(yáng)缺乏，肺寒胸陽(yáng)不展，溫煦無(wú)力，肺氣無(wú)化而更加衰弱有關(guān)。表4對(duì)肺陽(yáng)虛大鼠抓力的影響3.7對(duì)血流變的影響3.7.1對(duì)全血粘度的影響表5顯示：與正常對(duì)照組比擬，模型對(duì)照組低切變率(LS，10s-1)下的全血粘度顯著升高(P0.05);中、高切變率下的全血粘度呈上升趨勢(shì)。表5對(duì)肺陽(yáng)虛大鼠三個(gè)切變率下全血粘度的影響與正常對(duì)照組比擬，P0.05，P0.013.7.2對(duì)全血復(fù)原粘度的影響表6顯示：與正常對(duì)照組比擬，模型對(duì)照組低切變率(LS，10s-1)下的全血復(fù)原粘度顯著升高(P0.01);中、高切變率下的全血復(fù)原粘度呈上升趨勢(shì)。表6對(duì)肺陽(yáng)虛大鼠低、中、高切全血復(fù)原粘度的影響與正常對(duì)照組比擬

8、，P0.05，P0.013.7.3對(duì)血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程K值的影響表7顯示與正常對(duì)照組比擬，模型對(duì)照組的血漿粘度有升高趨勢(shì)，紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程K值差異不大。表7對(duì)肺陽(yáng)虛大鼠血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、血沉、血沉方程K值的影響3.7.4對(duì)全血聚集指數(shù)、剛性指數(shù)、變形指數(shù)、電泳指數(shù)的影響表8顯示與正常對(duì)照組比擬，模型對(duì)照組的剛性指數(shù)、變形指數(shù)、電泳指數(shù)呈顯著性升高(P0.01)。表8對(duì)肺陽(yáng)虛大鼠全血聚集指數(shù)、剛性指數(shù)、變形指數(shù)、電泳指數(shù)的影響肺朝百脈，主治節(jié)，血的運(yùn)行有賴于肺氣的敷布與調(diào)節(jié)。肺陽(yáng)虛者，溫煦無(wú)力，致心血不運(yùn)，使血液“濃、粘、凝、聚。從血流變學(xué)的研究結(jié)果可以看出肺陽(yáng)虛

9、組大鼠全血比粘度、全血復(fù)原粘度、剛性指數(shù)、紅細(xì)胞變形指教比正常組高，有顯著性差異(P0.01)，說(shuō)明造模成功。4討論為進(jìn)一步觀察多因素復(fù)合造模方法致肺陽(yáng)虛模型在大鼠上的重現(xiàn)性，我們采用煙熏+冰泳+服他吧唑復(fù)合因素造模，觀察其對(duì)相關(guān)指標(biāo)的影響。本實(shí)驗(yàn)在經(jīng)典的煙熏與寒冷結(jié)合的方法上加以改良，常溫游泳30in使其勞倦，耗其陽(yáng)氣;立即予以冰水中游泳10in，給予“形寒勞倦刺激;在此根底上，我們給予模型組大鼠飲用免疫抑制劑他吧唑冰水溶液(0.1g/l)，造成免疫功能低下，脾土虛弱，母病及子(土藏金)，肺陽(yáng)虛衰。觀察指標(biāo)盡可能符合肺陽(yáng)虛中醫(yī)臨床：肺陽(yáng)虛者，肺氣虛冷，陰寒內(nèi)盛，寒性凝滯，無(wú)力溫煦機(jī)體，故考察大鼠肛溫。陽(yáng)虛陰盛，肺失溫煦，肌膚失溫，故形寒肢冷，故考察了其背部溫度。肺陽(yáng)虛者衛(wèi)陽(yáng)不布，倦怠無(wú)力，故考察了大鼠抓力。肺朝百脈，主治節(jié)。?醫(yī)學(xué)真?zhèn)鳉庋?曰：“人之一身之氣，皆氣血之所循。肺陽(yáng)虛衰，必然導(dǎo)致氣血失調(diào)，肺陽(yáng)虛者多寒邪犯肺，導(dǎo)致肺失溫煦，寒性凝滯，表現(xiàn)出“血瘀，故測(cè)定血流變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明模型組大鼠毛色無(wú)光、喘鳴、尿量減少、飲水減少、體重增長(zhǎng)緩慢;其背部溫度、肛溫、抓力顯著性降低(P0.05);其血液低切變率下的全血黏度、全血復(fù)原粘度、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、電泳指數(shù)均顯著性升高(P0.05)。說(shuō)明該模型符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)主證3：喘息氣短、背畏寒、四肢不溫，